马氏珠母贝不同地理种群内自繁和种群间杂交子一代感染多毛类寄生病的分析

选用我国马氏珠母贝 3个地理种群 ,北海野生种群 (BW ) ,大亚湾野生种群 (DW)和三亚野生种群 (SW)作为亲本 ,通过不同地理种群内自繁产生了 3个子一代群体 (BB1 、DD1 、SS1 )和不同地理种群间杂交产生了 3个子一代群体 (BD1 、BS1 、DS1 )。比较分析 6个子一代群体感染多毛类寄生病的情况表明 ,马氏珠母贝是多毛类寄生虫的易感贝类 ,多毛类寄生虫基本上是凿贝才女虫 ;子一代的感染率在 66 7%～ 75 5 %之间 ,雌、雄贝之间的感染率无显著差异 (P >0 0 5) ,双壳同时感染多毛类寄生虫的感染率大于仅单壳(左壳或右壳)感染的感染率(P <0 0 5) ,在同一个群体内 ,感染多毛类寄生病与未感染多毛类寄生病贝的形态性状指标 (壳长、壳宽、总体重和壳重 )无显著差异 (P >0 0 5) ,说明多毛类寄生病并未影响马氏珠母贝的生长。多毛类寄生病的主要危害是导致马氏珠母贝的大量死亡。杂交子一代群体DS1 和BD1 的多毛类寄生病率与自繁群体BB1 相比 ,分别降低了 8 4%和8 8% (P <0 0 5) ,表明种群间杂交一代初步提高了马氏珠母贝抗多毛类寄生虫病的能力。     

马氏珠母贝不同组织同工酶的比较

采用聚丙烯酰酰胺凝胶水平平板电泳技术,研究了马氏珠母贝的８种组织７种同工酶的酶谱表型,结果表明：所测组织中未检出α－磷酸甘油脱氢酶（α－ＧＰＤＨ）和醇脱氢酶（ＡＤＨ）,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）只在肝脏一条微弱谱带,苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）、苹果酸酶（ＭＥ）和超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）部分组织间有显著差异,而酯酶（ＥＳＴ）则具有明显的组织特异性。     

马氏珠母贝附着生物及防除方法研究

论文主要对马氏珠母贝附着敌害生物的种类、附着方式、危害及防治等进行了综述。     

马氏珠母贝选育群体4个世代的遗传变异

采用9个多态性微卫星位点分析马氏珠母贝(Pinctada fucata)壳高选育品系(JCS)4个世代的遗传多样性与遗传结构的变化。结果表明, 随着选育的进行,  4个世代每个位点的平均有效等位基因数(N_e)从2.096下降至1.435, 平均等位基因丰度(R_s)从3.556下降至 2.556, 平均观测杂合度从0.492渐次下降至0.269, 遗传多样性呈明显的下降趋势。随着选育世代的增加, 从等位基因频率的变化来看, 部分呈上升趋势, 部分呈下降趋势, 部分基本保持稳定, 其中, 一些低频基因甚至会趋于消失。在所有等位基因中, 大部分的频率呈随机变化趋势, 并在不同的世代间上下波动; HHM20- 158 bp的频率呈有规律的变化, 由中高频逐步上升至高频, 呈富集趋势。结论认为, 经过4代的选育, 马氏珠母贝选育群体遗传多样性呈降低趋势, 遗传结构趋于稳定。本研究旨在为后续的马氏珠母贝选育策略提供理论指导。

     

马氏珠母贝EST微卫星的筛选

构建了马氏珠母贝的血液、足、鳃、胃、肝、心脏、外套膜、珍珠囊和感染多毛虫马氏珠母贝的血液(血感)等9个组织的cDNA文库,测序获得了6979个EST序列,从中查找到了268个重复序列,隶属于243个EST,含微卫星的EST数占EST总数的3.48%.珍珠囊cDNA文库含微卫星的序列所占比例最高,为6.16%,血感的最低,为1.65%.双碱基重复序列130个,占48.5%,(AT/AT)n类型最常见;三碱基类型的83个,占约31%,其中(AAT/ATT)n和(AAG/CTT)n较多;四碱基重复的有30个,占11.2%,(AAAT/ATTT)n占了该类型的约50%.一共能够设计151对微卫星引物,有130对可以扩增,占合成引物总数的86.09%,其中,多态性引物45对.多态性EST-SSR的筛选将为马氏珠母贝的分子遗传学研究、种质鉴定和野生资源保护等提供可靠的工具.     

马氏珠母贝精子的超低温保存

通过比较不同pH值（5．5-9．5）、不同盐度的海水等作为基础液对马氏珠母贝精子保存的影响,选择其中无激活精子作用又对其生理特性（活力,寿命,受精能力等）无影响者,加入二甲亚砜抗冻剂配制成超低温保存的抗冻保护液,精液与保护液按1：10和1：20的比例混合,样品按4组不同的降温程序平衡后转入液氮冷冻,比较其超低温冻存的效果。结果表明：以海水（pH7．5—8．0）为基础液,配制10％DMSO作为抗冻保护液,精液与保护液比例为1：20,在低温（0-4℃）中平衡约30min,在距液氮面15cm、5cm处分别停留5min、10min后转入液氮（-196℃）,冻存精子效果良好。冷冻24h、48h及5个月后,在38—40℃下水浴解冻复苏后,用终浓度0．25‰的氨海水刺激,精子存活率可超过60％,受精率可达80％。     

马氏珠母贝术前处理的研究

实验结果表明:经术前处理后的插核贝休养期存活率为95 2%,育珠期存活率达85 5%,每贝只插1个核,休养期留核率为0 86,育珠期留核率达0 71。珍珠的质量明显提高,优质珍珠的生成率高达34 6%,比对照组高出27 5%。     

不同海区养殖的马氏珠母贝珍珠质颜色比较

为探讨不同环境对珍珠质颜色的影响,本研究将遗传背景相同的马氏珠母贝分布于海南黎安、广东流沙、广西北海和广西防城4个不同的海区养殖.一年后,用CSE-1型成像色度仪测量4个区域贝壳珍珠质的颜色,记录相应的颜色参数Lab值.结果显示,不同海域养殖的贝壳珍珠质颜色显示了不同的特征,其中广西北海、广西防城和海南黎安这3组贝壳珍珠质颜色较为接近,均表现为明度高、偏黄绿;而广东流沙与这3个地区的色差较大,表现为明度低、黄绿杂色浅、偏白色的特征.     

马氏珠母贝亲代选择对子一代的影响

研究了马氏珠母贝不同亲本规格对后代的影响,以期为育种和苗种生产中的亲贝选择提供科学的理论指导。试验从来自同一养殖群体的2000个随机个体马氏珠母贝中选取规格最大（壳长55.89±1.65mm）、中等（壳长48.55±0.81mm）、最小（壳长42.22±2.51mm）的性成熟个体各50个作为亲贝（♀∶♂=1∶1）,按规格分成大、中、小3组,分别进行各组内亲本个体群交,在相同环境及试验条件下分析亲本选择对子代生产性能的影响。结果表明,大规格亲贝优于中规格亲贝（P〈0.05）;中规格亲贝优于小规格亲贝（P〈0.05）;马氏珠母贝亲代选择对子一代生产性能具有显著影响（P〈0.05）。这表明马氏珠母贝大规格亲贝群交后代表现出明显的生长优势,截断选择策略有效。     

马氏珠母贝人工育苗的若干关键技术

讨论了马氏珠母贝(Pinctada martensii)人工育苗的若干关键技术。马氏珠母贝育苗的关键是要做到亲贝优、幼虫优、饵料质量好数量足、水环境稳定。育苗的最高成活率可达31．1％,单位水体的出苗量可达62．3万个／m^3。     

Genetic linkage map of the pearl oyster,Pinctada martensii (Dunker)

Genetic linkage maps were constructed with amplified fragment length polymorphism (AFLP) and microsatellite markers for the pearl oyster, Pinctada martensii (Dunker), the main bivalve used for marine pearl production in Asia. Twenty‐four AFLP and 84 microsatellite primer pairs were used for linkage analysis in a full‐sib family with two parents and 78 offspring. Of the 2357 AFLP fragments generated, 394 (16.7%) were polymorphic and segregating. Most (340 or 86.2%) of the markers segregated according to expected Mendelian ratios. Female and male linkage maps were constructed using 230 and 189 markers, including 15 and 10 microsatellites respectively. The female map consisted of 110 markers in 15 linkage groups, covering 1415.9 cM, with an average interval of 14.9 cM. The male map consisted of 98 markers in 16 linkage groups, with a total length of 1323.2 cM and an average interval of 16.1 cM. When unlinked doublets were considered, genome coverages were 78.5% for the female and 73.5% for the male map. Although preliminary, the genetic maps constructed here should be useful for future linkage and quantitative trait loci mapping efforts.     

Estimating the heritability for growth-related traits in the pearl oyster,Pinctada fucata martensii (Dunker)

Twelve paternal half-sib families (or 36 full-sib families) of the pearl oyster, Pinctada fucata martensii (Dunker), were produced according to the requirements of hierarchical genetic mating design. A total of 4320 individuals, aged 15 months, were measured for seven growth-related traits. Predicated upon the additive-dominance genetic analysis model, varying genetic variance components and then heritabilities of the growth-related traits of interest were estimated using analysis of variance. Results showed that seven growth-related traits had larger additive genetic variances (P<0.05); the dominance genetic variance of shell weight (SW) was smaller (P>0.05), the dominance genetic variances of other six traits were all larger (P<0.05). Narrow- and broad-sense heritabilities for the seven traits were, respectively, 0.64 ± 0.10 and 0.78 ± 0.12 for shell length, 0.49 ± 0.06 and 0.63 ± 0.09 for shell height, 0.38 ± 0.14 and 0.54 ± 0.16 for shell breadth, 0.41 ± 0.17 and 0.56 ± 0.11 for hinge length, 0.53 ± 0.11 and 0.68 ± 0.08 for body weight, 0.35 ± 0.07 and 0.55 ± 0.08 for tissue weight and 0.67 ± 0.10 and 0.75 ± 0.16 for SW. All heritability estimates were statistically significant (P<0.05). According to these results, the mass selection procedure is suggested for the breeding of P. martensii.     

马氏珠母贝微胶囊饲料的适用性研究

本研究测定了自主研发的马氏珠母贝(Pinctada martensii)微胶囊饲料的粒径范围、悬浮性和稳定性;并以室内投喂微胶囊饲料的马氏珠母贝为实验组,自然海区养殖的马氏珠母贝为对照组,养殖45 d后比较实验组与对照组成活率、生长率、软体部生化成分、肝胰脏形态与消化酶的差异。结果表明:(1)该饲料粒径均小于48μm,其中约80%饲料颗粒粒径在28~48μm;(2)该饲料分散性良好,静置状态下,在盐度为35的Na Cl溶液中的沉降速度是(2.74±0.21)mm/s;(3)饲料的氮保留率(NRR)较高,25℃浸泡120 min后、35℃浸泡60 min后NRR分别为(79.10±0.15)%和(80.85±0.72)%;(4)实验组和对照组的成活率没有显著差异(P0.05);实验组壳长、壳宽、壳高和总重的绝对增长率和相对生长率均显著低于对照组(P0.05);(5)实验组软体部脂肪含量显著大于对照组(P0.05),碳水化合物、蛋白质和灰分含量无显著差异(P0.05);(6)实验组肝胰脏为橘黄色,淀粉酶活力显著大于对照组(P0.05),纤维素酶、蛋白酶活力差异不显著(P0.05)。研究结果表明,该微胶囊饲料粒径小、稳定性较好,能被马氏珠母贝消化与吸收,但需要继续改进饲料配方、完善室内养殖技术方案,为马氏珠母贝工厂化养殖条件的优化提供科学依据。     

马氏珠母贝两个不同地理种群的形态性状

在“珍珠贝育种规划（Pearl Oyster Breeding scheme,POBs）”中,马氏珠母贝的两个地理种群——印度养殖种群和三亚野生种群正在作为两个基础群（Basic population）建立专门化品系,通过杂交获得杂种优势,构建杂交配套系以培育优良品种。从形态上看,印度养殖种群体个体大,而三亚野生种群体个体小;三亚野生种群的壳宽系数为0．18,大于印度养殖种群的0．15,三亚野生种群的贝体外形较凸,而印度养殖种群的贝体外形扁平。三亚野生种群的壳重指数（25．30）大于印度养殖群体（18．80）。通过成像色度检测分析系统分析,每个种群都有自己的颜色特征值——三刺激值和颜色参数;比较两个种群颜色参数Lab时表明,三亚野生种群贝壳珍珠质颜色的明度（L）大于印度养殖种群,色品比印度养殖种群更偏向绿色（-a）和黄色（b）,印度养殖种群色品偏向蓝色和红色。两个种群间贝壳珍珠质的色差（△XEab）为10．69,属于大色差,感觉强烈。     

影响马氏珠母贝植核育珠绩效的关键技术研究

本研究在海水珍珠养殖核心区域流沙湾,通过设置不同术前处理方法、不同配液进行小片保养和不同模式育珠三个实验,比较其对马氏珠母贝植核育珠绩效的影响。术前处理方法分别为抑制性腺、温度差促排、盐度差促排和对照组(A_1、A_2、A_3、AD);小片保养分别为配液1号、配液2号、配液3号、和对照组(B_1、B_2、B_3、BD);育珠模式分别为海区休养与育珠、池塘休养与育珠和池塘休养与海区育珠(C_1、C_2、C_3)。经休养、育珠结束后,比较其育珠绩效相关指标值的差异。实验结果显示:实验Ⅰ中各术前处理组间育珠贝的育珠绩效值差异不具有统计学意义(P0.05),而各处理组(A_1、A_2、A_3)育珠贝的成活率、留核率、成珠率、优良珠率和育珠绩效值均显著高于对照组(AD)(P0.05),其中温度差促排组(A_2)具有最高的育珠绩效值;实验Ⅱ中各不同配液保养组间育珠贝的育珠绩效值差异不具有统计学意义(P0.05);而通过细胞小片保养各组(B_1、B_2、B_3)的育珠绩效值都显著高于对照组(BD)(P0.05)。其中配液1号组(B_1)具有最高的育珠绩效值;实验Ⅲ中各不同育珠模式组间育珠贝的成活率和留核率:(C_1)与(C_2)之间差异不具有统计学意义(P0.05),而和(C_3)之间存在统计学意义;育珠贝的成珠率、优良珠率和育珠绩效值:(C_1)与(C_3)之间差异不具有统计学意义(P0.05),而和(C_2)之间存在统计学意义(P0.05),;其中池塘休养与海区育珠组(C_3)具有最高的育珠绩效值。     

日本珍珠贝人工繁殖苗在热带海区的养殖生长观察

日本珍珠贝引进海南陵水热带海区养殖,人工繁殖幼贝苗1·5~2·0mm下海养殖。经1年的养殖生长观察,结果为:平均壳长59·2mm、壳高59·7mm、壳宽20·7mm,平均个体重34·8g;养殖90d,生长速度较快,壳长平均增长值为11·9mm,相对增长率为55·4%;壳高平均增长值11·2mm,相对增长率61·2%;壳宽平均增长值5·9mm,相对增长率为190·3%。壳长、壳高和体重增长之间具有非常显著的相关关系。研究表明,该贝在海南热带海区养殖的生长速度快,是适宜引进的养殖对象。     

微胶囊饲料对马氏珠母贝育珠性能、生长基因和矿化基因表达的影响

本研究分析了自主研发的微胶囊饲料替代微藻对马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)育珠性能、生长相关基因和矿化相关基因表达的影响。共设置了3个实验组,其中,EG1组投喂亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis),EG2组投喂微胶囊饲料+亚心形扁藻,EG3组投喂微胶囊饲料。养殖170 d后,比较马氏珠母贝的育珠性能、闭壳肌生长相关基因EGFR、FGF18、GHITM和TβRI以及外套膜的中央膜和边缘膜矿化相关基因pearlin、DPT、pif177和N19的表达。结果表明:(1)各组间马氏珠母贝育珠贝的存活率、留核率不存在显著性差异(P0.05),所采收珍珠的珍珠层厚度及平均质量也不存在显著性差异(P0.05);(2)各实验组间马氏珠母贝闭壳肌中EGFR、FGF18、GHITM和TβR I的相对表达量不存在显著性差异(P0.05);(3)各实验组间马氏珠母贝中央膜中DPT和N19的相对表达量差异不显著(P0.05),EG2和EG3组pearlin的表达量显著性高于EG1组(P0.05),pif177在EG3组中的表达量显著性高于EG1和EG2组(P0.05);(4)各实验组间马氏珠母贝边缘膜中pearlin、DPT和N19的相对表达量差异不显著(P0.05),EG2和EG3组pif177的表达量显著高于EG1组(P0.05)。研究结果说明,该微胶囊饲料可以替代部分微藻进行育珠生产,为进一步研发马氏珠母贝的人工配合饲料及开展工厂化育珠积累了参考资料。