四种槲皮素水溶性衍生物对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响

目的 :研究四种人工半合成槲皮素水溶性衍生物 ,即乙氧基槲皮素、槲皮素磷酸酯 (B)、槲皮素单硫酸酯和槲皮素二硫酸酯对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响。方法 :用比浊法检测血小板聚集。结果 :乙氧基槲皮素对血小板聚集无影响 ;槲皮素磷酸酯 (B)、槲皮素单硫酸酯和槲皮素二硫酸酯对血小板聚集有抑制作用 ,IC5 0 分别为 80μ mol/ L、95μ mol/ L和 1 85μ mol/ L。结论 :槲皮素磷酸酯 (B)、槲皮素单硫酸酯和槲皮素二硫酸酯具有抗血小板活性     

半边旗中二萜类化合物5F对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响

目的：研究半边旗中二萜类化合物５Ｆ（１１α－羟基－１５－氧－１６－烯－对映贝壳核烷－１９酸）对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响。方法：血小板悬液与５Ｆ孵育１ｍｉｎ，然后用聚血酶（５０Ｕ／Ｌ）作用５ｍｉｎ，用血液凝集仪记录血小板聚集情况。结果：半边旗中二萜化合物５Ｆ对凝血酶诱导的兔血小反聚集有抑制作用。结论：半边旗中二萜类化合物５Ｆ具有抗血小板的作用。     

精胺对猪血小板膜中肌醇磷脂和蛋白质磷酸化的影响

用猪血小板膜与(r-~(32)P)ATP进行磷酸化反应,观察精胺对肌醇磷脂和蛋白质磷酸化的影响.结果表明:(1)对磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸的生成有明显促进作用;(2)对血小板中47KDa蛋白质磷酸化有强烈抑制作用(IC_(50)≈1.0mmol/L)。精胺的这些作用可能与其生理作用机理有关。     

腺苷及类似物对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

猪血小板膜与不同浓度的腺苷或100μmol/L的腺苷类似物及γ—~(32)P—ATP37℃反应5min.被标记的磷脂酰肌醇—4—单磷酸通过薄层层析法分离、放射自显影定位、液体闪烁计数定量的结果表明:腺苷可强烈抑制猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化,半数抑制率为14μmol/L;腺苷类似物cAMP、5′—氯—5′—脱氧腺苷、腺嘌呤、α′—脱氧腺苷、AMP、阿糖腺苷、cGMP在浓度为100μmol/L时对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化有不同程度的抑制作用。     

肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响

在Mg~(2+)存在下,用(γ-~(32)P)ATP与猪红细胞膜保温(30℃)3min,观察一些药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响。用氯仿:甲醇中止反应。用酸性氯仿:甲醇混合液抽提磷脂及硅胶板TLC分离磷脂。经放射自显影及液体闪烁计数测定生成的(~(32)P)-磷脂酰肌醇-4-磷酸。结果表明①肝素和新霉素对磷脂酰肌醇磷酸化有抑制作用;②六氯环己烷对磷脂酰肌醇磷酸化有促进作用;③Li_2SO_4(10mmol/L)、EGTA(100μmol/L)、茶硷(100μmol/L)作用不明显;④二甲亚矾在低浓度时有促进作用,而在较高浓度时则有抑制作用。结果提示上述作用可能与这些药物的作用机理有关。     

EGF对人鼻咽癌细胞体外生长和膜蛋白磷酸化与肌醇磷脂磷酸化的影响

本文观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）与人低分化鼻咽癌上皮细胞系 　ＣＮＥ－２ Ｚ在软琼脂培养基上集落形成能力及膜蛋白、膜肌醇磷脂磷酸化的关系。 结果表明：（１）ＥＧＦ经受体介导，低浓度时（０．０１～０．１７ｎｍｏｌ／Ｌ）促进细胞生 长，高浓度时（≥１．６７ｎｍｏｌ／Ｌ）抑制细胞生长；（２） ＥＧＦ促进膜蛋白磷酸化反 应；（３） ＥＧＦ促进膜肌醇磷脂转换。提示了ＥＧＦ对ＣＮＥ－ ２ Ｚ细胞体外生长的影 响与其促进膜蛋白磷酸化和膜肌醇磷脂转换有关。本文根据实验结果探讨了ＥＧＦ 与人鼻咽癌的关系。     

四种槲皮素水溶性衍生物对凝血酶诱导兔上板聚集的影响

目的：研究四种人工半合成槲皮素水溶性衍生物,即乙氧基槲皮素、槲皮素磷酸酯（Ｂ）、槲皮素单硫酸酯和槲皮素二硫酸酯对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响。方法：用比浊法检测血小板聚集。结果：乙氧基槲皮素对血小板聚集无影响;槲皮素磷酸酯（Ｂ）、槲皮素单硫酸酯和槲皮素二硫酸酯对血小板聚集有抑制作用,ＩＣ５０分别为８０μｍｏｌ／Ｌ、９５μｍｏｌ／Ｌ和１８５μｍｏｌ／Ｌ。结论：槲皮素磷酸酯（Ｂ）、槲皮素单硫酸酯和槲皮素二硫酸酯具有抗血小板活性。     

肌醇脂质和cAMP在血小板活化因子诱导血小板聚集中的作用

目的：探讨肌醇脂质和cAMP两个细胞内第二信使系统在血小板活化因子(PAF)诱导血小板聚集过程中所起到的作用和相互关系。方法：采用PKC激动剂PMA和Ca^2 通道A23187,以及PKA激动剂Sp-cAMPS和抑制剂Rp-cAMPS干预的方法,分析观察这两个信使系统在PAF诱导血小板聚集过程中的作用;采用^3H—Inositol和^14C-Adenine双标记液体闪烁技术测定PAF诱导血小板可逆聚集过程中肌醇-1,4,5-三磷酸酯(IP3)和cAMP的水平变化的方法,分析研究这两个信使系统在PAF诱导血小板聚集过程中的相互关系。结果：(1)PMA和A23187能分别增强PAF的血小板聚集效应,而且两者具有协同作用;(2)Rp-cAMP和Sp-cAMPS两者本身都不能引起血小板聚集,但能分别增强和抑制PAF的聚集效应;(3)IP3和cAMP的水平变化分别与血小板的聚集和解聚过程一致。结论：(1)肌醇脂质信使系统是细胞内转导PAF诱导血小板聚集的主要胞内信使系统。(2)降低血小板内cAMP浓度不能诱导聚集,但能增强肌醇脂质信使系统的聚集效应;升高cAMP水平能拮抗肌醇脂质信使系统的作用,这可能是使可逆相聚集的血小板解聚的一个重要机制。     

田七总皂苷对兔全血血小板聚集的影响

目的观察田七总皂苷对凝血酶或ADP诱导的兔全血血小板聚集的影响。方法兔全血与田七总皂苷孵育5min,然后用凝血酶或ADP作用1min,用全血血小板聚集仪观察兔全血血小板聚集情况。结果田七总皂苷50、100和200μmol/L作用兔血小板后,用凝血酶诱导时对血小板聚集的抑制率分别为39%、60%和61%;用ADP诱导时抑制率分别为65%、79%和60%。结论田七总皂甙对凝血酶和ADP诱导的兔全血血小子板聚集都有抑制作用。     

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对血小板聚集、蛋白磷酸化和肌动蛋白聚合的影响

目的：进一步研究蛋白激酶C抑制剂Staurosporine在血小板聚集、蛋白磷酸化、肌动蛋白聚合中的作用。方法：以32P－Na2HPO4标记血小板；以血小板聚集仪测定血小板聚集；以SDS－PAGE分离蛋白质，进行放射自显影；以TritonX－100抽提法沉淀骨架蛋白。结果：（1）1μmol／LStaurosporine完全抑制0．5U／ml凝血酶或10μmol／LPMA诱导的血小板聚集，大部分抑制20μmol／LA23187诱导的血小板聚集。（2）1μmol／LStaurosporine几乎完全抑制0．5U／ml凝血酶、或10μmol／LPMA、或20μmol／LA23187诱导的血小板40kD和20kD蛋白磷酸化。（3）1μmol／LStaurosporine完全抑制0．5U／ml凝血酶或10μmol／LPMA诱导的血小板肌动蛋白聚合。结论：Staurosporine抑制蛋白激酶C的活性．从而抑制血小板的聚集和肌动蛋白聚合；蛋白激酶C在血小板聚集和肌动蛋白聚合中起着重要调控作用。     

槲皮素单硫酸酯和5’-氯-5’-脱氧腺苷单用与合用对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响

目的：研究槲皮素单硫酸酯和5’-氨-5’-脱氧腺苷合用对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响。方法：用比浊法检测血小板聚集。结果：槲皮素单硫酸酯和5’-氨-5’-脱氧腺苷对凝血酶诱导的兔血小板聚集都有抑制作用，两者合用作用增加。结论：槲皮素单硫酸酯与5’-氨-5’-脱氧腺苷具有协同抗血小板聚集的作用。     

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对血小板聚集,蛋白磷酸化和？…

目的：进一步研究蛋白激酶Ｃ抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ在血小板聚集，肌动蛋白聚合中的作用，方法：以＾３２Ｐ－Ｎ２ＨＰＯ４标记血小板；以血小板集仪测定血小板聚集，以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离蛋白质，进行放射自显影，以Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００抽提法沉淀骨架蛋白，结果：（１）１μｍｏｌ／ＬＳｔａｕｏｐｓｏｒｉｎｅ完全抑制０．５Ｕ／ｍｌ凝血酶成１０μｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的血小板聚集，大部分抑制２０μｍｏｌ／     

腺苷对猪血小板膜上磷脂酰肌醇激酶和磷脂酰肌醇-4-磷酸激酶的抑制作用

用差速离心法分离猪血小板膜，在适当条件下，用［ γ－３２ Ｐ） ＡＴＰ与其保温，观察３２Ｐ掺入磷脂情况。结果表明：（１）无外源性磷脂酰肌醇－４－磷酸（ＰＩＰ）时，３２Ｐ主要掺入ＰＩＰ；补充外源性ＰＩＰ后，３２Ｐ也可掺入磷脂酰肌醇－ ４， ５－二磷酸（ ＰＩＰ２） ９（ ２）腺苷及类似物 ５’－氧－ ５’－脱氧腺苷对３２ Ｐ掺入这两种磷脂均有强烈的抑制作用；（３）这种抑制作用呈剂量—效应关系（ＩＣ５０分别为８０μｍｏｌ／Ｌ和７０μｍｏｌ／ Ｌ），并与ＡＴＰ里竞争性。提示腺苷及类似物５’－氯－５’－脱氧腺苷这种抑制作用可能与其抑制血小板聚集作用有关。     

槲皮素对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基的影响

肌醇磷脂3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3-K)是多磷脂酰肌醇通路中的一个重要的效应器和涉及信号转导和细胞转化的关键酶。PtdIns(3)P、PtdIns(3,4)P2和PtdIns(3,4,5)P。是PI3-K的酶促反应产物,它们在细胞内起到第二信使的作用,调节一些蛋白激酶的活性如PAC、PKB和有些PKC同工酶等,PI3-K通过这些信号传导途径参与多种生物学事件,如囊泡运输、     

腺苷对大鼠心肌钙蛋白 I 及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度梯度离心法从大白鼠心肌细胞分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ—~(32)P]ATP 保温以观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷和腺苷类似物对磷酸化的影响。结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要参入肌钙蛋白 I(Troponin1,29000Da);在质膜组分,~(32)P 主要参入磷脂酰肌醇-4-一磷酸(Ptd Ins4P),亦即 TAP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对 Ptd Ins 磷酸化的抑制最强烈。cAMP 对肌钙蛋白 I 的磷酸化有剌激作用,这与文献报道相符。作者认为,腺苷和 cAMP 对肌钙蛋白 I 磷酸化的拮抗作用与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现,肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用可能有重要的生物学意义。     

磷脂酰肌醇3-磷酸对UV-B诱导蚕豆保卫细胞中过氧化氢产生和气孔关闭的影响

【目的】研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）催化产物磷脂酰肌醇3-磷酸（PI3P）对紫外线B（UV-B）诱导保卫细胞中过氧化氢（H2O2）产生和气孔关闭的影响,为进一步阐明植物细胞转导UV-B辐射信号的机制提供依据。【方法】以蚕豆（Vicia faba L.）表皮条为材料,采用PI3K的抑制剂沃曼青霉素（WM）和LY294002（LY）来抑制PI3P的形成,采用二苯基碘（DPI）和水杨基氧肟酸（SHAM）分别抑制H2O2形成的NADPH氧化酶途径和细胞壁过氧化物酶途径,通过气孔开度分析和激光扫描共聚焦显微镜技术,确定PI3P在0.8 W•m-2 UV-B辐射诱导蚕豆保卫细胞H2O2产生和气孔关闭中的作用。【结果】WM和LY能显著抑制UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭;外源H2O2处理能显著逆转WM和LY对UV-B诱导气孔关闭的抑制效应,但WM和LY不能抑制外源H2O2诱导的气孔关闭;UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭能被活性氧清除剂和SHAM显著抑制,但不能被DPI抑制。【结论】PI3P通过诱导蚕豆保卫细胞中产生于过氧化物酶途径的H2O2形成来介导UV-B辐射诱导的气孔关闭。     

Tyrphostin AG555对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基活性的影响

目的：研究tyrphostin AG555对重组人肌醇磷脂3-激酶（PI3-K）p110β催化亚基的影响。方法：利用基因工程的方法获得PI3-K p110β催化亚基;用磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸．[У-^32P]ATP与重组PI3-K p110У催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性;用氯仿和甲酵抽提^32p标记的磷脂。并以硅胶扳薄层层析和放射自显影来进行分析。结果：AG555（2．5～20μmol／L）对重组人PI3-K p110β催化亚基有抑制作用。结论。tyrphostin AG555是一种重组人PI3-K p100β抑制剂。重组人PI3-K p110β催化亚基可作为一种较为简便的筛选有效的PI3-K抑制剂的反应物。     

重组人磷脂酰肌醇3-激酶p110β催化亚基的原核表达

目的：表达人磷脂酰肌醇3－激酶p110β催化亚基。方法：将构建有人磷脂酰肌醇3－激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)p110β催化亚基cDNA的重组质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG进行诱导表达。用磷脂酰肌醇－4、5－二磷酸、[γ-^32P]ATP与重组PI 3－K p110β催化亚基一起保温的方法测定PI 3－K的活性；^32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提、板薄层层析和放射自显影来分析。结果：SDS－PAGE显示表达出－110kD的新蛋白质分子，重组蛋白占菌体总蛋白的比例为15％，大多数重组蛋白以可溶性形成存在。wortmannin是PI3－K特异的抑制剂，wortmannin对重组PI 3－K p110β亚基有抑制作用，这种抑制作用呈剂量依赖关系（2.5-20nmol/L)。结论：重组蛋白是有活性的人PI3－Kp110β催化亚基。