不同基质传代白僵菌菌株胞外蛋白酶和几丁质酶产生水平与菌株对桑天牛幼虫毒力的关系

研究了对桑天牛幼虫具有不同致病力的各种传代白僵菌菌株胞外蛋白酶和几丁质酶的产生水平,并分析其与菌株致病力变化的关系。结果表明:不同基质传代菌株随着培养时间的延长,胞外蛋白酶和几丁质酶活性逐渐升高,达到最高值后基本趋于稳定,几丁质酶产生时间要滞后于胞外蛋白酶;通过寄主桑天牛幼虫传代的白僵菌菌株比通过普通查氏培养基传代的菌株具有更强的产酶能力;不同菌株胞外蛋白酶和几丁质酶产生水平与菌株毒力有一定相关性,尤其是产酶高峰值与菌株的LC50呈显著相关性,可将其作为菌株初步筛选的参考性毒力指标。     

不同辐照剂量对蜂球囊菌杀灭效果的影响

本试验以蜂球囊菌(Ascosphaera apis)为研究对象,探究不同辐照剂量对蜂球囊菌的杀灭效果,以期明确有效杀灭蜂球囊菌的最低辐照剂量,为Co60γ射线辐照蜜蜂饲料(特别是蜂花粉)时的辐照剂量选择提供依据。利用细菌纯化技术从患白垩病意蜂幼虫体内分离纯化得到蜂球囊菌,并结合形态学、乳酸酚棉兰染色及5.8SrDNA序列分析技术进行鉴定;同时制备不同梯度浓度的蜂球囊菌孢子悬液加入到蜜蜂幼虫饲料中,以饲喂方式侵染3日龄意蜂幼虫,确定半数致死浓度(LC50);蜜蜂幼虫饲料中添加上述确定LC50的孢子,以不同辐照剂量处理,并通过侵染幼虫试验,确定有效杀灭蜜蜂饲料中孢子的最低辐照剂量。结果表明,通过形态学和分子生物学鉴定,从患白垩病的意蜂幼虫体内分离纯化得到真菌即为蜜蜂白垩病的病原——蜂球囊菌;蜂球囊菌对人工饲养条件下的意蜂幼虫的LC50为9.5×104个/mL;当Co60γ射线辐照剂量为7.0kGy时,幼虫患病率与未辐照组差异显著(P0.05),由此确定对添加半数致死浓度的蜂球囊菌孢子饲料的最低有效辐照剂量为7.0kGy。     

蜜蜂白垩病的草药防治研究

以意大利蜜蜂和蜜蜂球囊菌为主要试验材料,通过记录外界温湿度、幼虫脾的温湿度、蜂群的储蜜量和储粉量以及发病幼虫数,研究养蜂生产中白垩病发病时上述指标的变化趋势,并进行了相关性分析;以桧木、喜久二醇、黄藤碱和蛇床四种中草药制剂以及蜜蜂球囊菌为主要的试验材料,研究实验室条件下这四种中草药制剂对蜜蜂球囊菌生长的抑制作用。结果显示:试验组内,外界湿度、幼虫脾温度、储蜜量与发病幼虫数之间的相关性显著;对照组内,外界湿度与发病幼虫数之间的相关性显著;在6.5%、5.0%、3.5%、2.0%和0.5%5个浓度的药剂溶液中,喜久二醇、黄藤碱、蛇床3种中草药制剂对蜜蜂球囊菌没有抑制作用;而桧木在5.0%的溶液浓度上表现出一定的抑菌作用。结果表明,蜜蜂白垩病的发病与食物储蜜量、外界湿度和幼虫脾温度有关,而蜂群的食物储备量是导致白垩病发生的关键诱发因素;桧木中草药制剂对蜜蜂球囊菌的生长有一定的抑制作用。     

中华蜜蜂与意大利蜜蜂中肠消化酶活性差异性探讨

本试验对中华蜜蜂(A.c.cerana Fab.)和意大利蜜蜂(A.m.ligustica Spinola)的成年工蜂、幼虫中肠内蛋白酶、淀粉酶、蔗糖酶的活性进行了比较.试验结果显示:中华蜜蜂、意大利蜜蜂幼虫之间三种酶活性差异均不显著;而中华蜜蜂、意大利蜜蜂的成蜂间蛋白酶活性差异显著(P＜0.05),意大利蜜蜂高于中华蜜蜂;淀粉酶和蔗糖酶的活性分别为差异显著(P＜0.05)、差异极显著(P＜0.01),中华蜜蜂高于意大利蜜蜂;同一蜂种内,成年蜂中肠液内的三种酶活性,均高于大、小幼虫,且差异极显著(P＜0.01).     

嗜水气单胞菌不同分离株生化特性及胞外蛋白酶的检测

嗜水气单胞菌可引起多种宿主患病,该菌致病性与其产生的多种毒力因子特别是胞外蛋白酶有关。本研究检测了26株嗜水气单胞菌不同分离株的生化指标,采用脱脂乳平板法检测了胞外蛋白酶的产生情况,并利用PCR技术检测了2种胞外蛋白酶基因ahp-A(编码丝氨酸胞外蛋白酶)和eprCAI(编码温敏胞外蛋白酶)。结果表明,大部分菌株生化指标表现为蔗糖(+)、阿拉伯糖(+)、葡萄糖(+)、甘露醇(+)、鸟氨酸脱羧酶(-)、肌醇(-)、七叶苷(+);脱脂乳平板法检测发现,91.7%(22/24)的致病菌株均能产生胞外蛋白酶,而2株无毒株则不能产生,对2个胞外蛋白酶基因的检测也得到相似的结果。本研究将为嗜水气单胞菌的流行病学调查和致病机制的深入研究奠定基础。     

蜜蜂球囊菌荧光PCR快速检测方法的建立及应用

以蜜蜂球囊菌ITS1、ITS2和5.8 S rDNA保守序列(U68313)为参考,设计一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了一种快速检测蜜蜂球囊菌的荧光PCR方法。该方法灵敏度达1 ng/μL的阳性DNA比常规PCR高10倍。检测的特异性高,与蜜蜂幼虫芽胞杆菌、蜂房蜜蜂球菌、蜜蜂败血杆菌无交叉反应,同时可避免常规PCR因电泳造成的污染。应用该方法对蜜蜂及蜂制品的实际样品和模拟样品进行检测,结果显示所建立的荧光PCR检测方法在4 h内即可报告结果,与传统病原菌分离培养、常规PCR相比较,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好等优点,可以用于蜜蜂及其制品中蜜蜂球囊菌的快速检测和进出境检疫。     

球孢白僵菌MZ050724菌株对瓜实蝇的毒力测定

摘 要 本研究选用球孢白僵菌MZ050724菌株对瓜实蝇进行室内毒力测定,结果表明,在3.6?05-3.6?08个/ml 4个浓度中,成虫、幼虫和蛹的最大累计校正死亡率分别为(95.24?.55)%、(86.56?.88)%和(80.47?.86)%;其致死中浓度(LC50)分别为(2.544?.2846)?05个/ml、(2.9126?.4871)?05个/ml和(3.459?.4735)?05个/ml; 成虫、幼虫和蛹的致死中时间（LT50）分别为(4.643?.396)d(5.308?.225)d和 (6.139?.524)d。     

球孢白僵菌对小亚璃眼蜱的毒力测定及其孢外水解酶活性分析

球孢白僵菌作为一种很重要的生防真菌，已被广泛用于农业害虫和蜱的防治。在侵染宿主的同时，球孢白僵菌分泌大量孢外水解酶，如孢外蛋白酶和几丁质酶。这些酶类不但能够降解宿主表皮，而且被认为是菌株致病性的关键决定因子。为获得高毒力菌株的筛选方法，选取实验室分离鉴定的5株球孢白僵菌菌株，通过测定菌株的孢外水解酶活性和菌株对小亚璃眼蜱的致死率，并对球孢白僵菌的毒力和酶活性进行了相关性分析。结果显示，菌株蛋白酶活性与菌株毒力无相关性，菌株几丁质酶活性与菌株毒力呈现负相关性。本研究为蜱生防高毒力菌株的筛选以及酶活性的初步分析提供了理论依据。     

蜜蜂白垩病PCR快速检测方法的建立及初步应用

根据Genebank网站公布的蜜蜂球囊菌ITSl.5.8s,ITS2 rDNA保守序列(U68313)设计出一对特异性引物ASCU和ASCD,可特异性的扩增蜜蜂球囊菌ITSI,5.8srRNA,ITS2序列上大小为471 bp的片段.优化了PCR最佳反应条件和体系;特异性试验结果表明与蜜蜂幼虫芽孢杆菌、蜂房蜜蜂球菌、蜜蜂败血杆菌无交叉反应,具有良好的特异性.敏感性试验结果表明敏感性可达7CFU/mL的蜜蜂球囊菌.通过将定量的蜜蜂球囊菌添加到蜂蜜、花粉、蜂胶和蜂王浆等蜂产品中进行模拟检疫,结果显示所建立的PCR检测方法适用于上述蜂产品中蜜蜂球囊菌的检疫.该方法与病原菌分离培养等传统检疫方法相比较,具有快速、灵敏、特异等优点,可用于蜜蜂及蜂产品中白垩病的进出口检疫及快速诊断.     

蜜蜂白垩病发病特点及其防治

蜜蜂白垩病是真菌蜜蜂球囊菌(Ascophaera apis)引起的,容易感染西方蜜蜂的幼虫,成年蜂虽不易感染,但是病原的携带者和传播者。1991年我