家蚕胚胎温敏性基因的RAPD标记筛选

用家蚕华1、S栏品种及其杂交后代F2分离群体为材料进行胚胎湿敏性基因的RAPD分子标记筛选，经287个随机引物的PCR扩增产物电泳分析，筛选到2个特异性DNA多态片段，一个只出现在温敏性赤蚁蚕品种中。另一个出现在非湿敏黑蚁蚕品种中，扩增条带的分子量约1350bp，命名为OPA－021350，经共分离的检测分析，与黑蚁非温敏性状有较紧密的连锁关系，并以pEGM^R-T Vector为载体，大肠杆菌DH5α为宿主进行了克隆。     

家蚕耐氟笥RAPD分子标记研究

在含有耐氟主效基因的家蚕品种T6和高敏感品种733新及其近等基因系NF733新中，采用200个RAPD随机引物进行扩增，获得了与家蚕耐氟性有关的两个分子标记OPD－08850和OPB－10917，用OPB－10917，分子标记在加交世代中进行检测，其结果是各回交世代耐氟性个体都出现同样的特异带，从而验证了分子标记的可靠性。     

小麦显性多子房基因的RAPD标记

利用BSA法，以显性多子房小麦（rriticum aestivum）与普通小麦（T.aestivum）品种西农1376进行杂交，从F2分离世代建立多子房性状基因池和单子房基因池，采用RAPD-PCR方法，以440个随机引物筛选单、多子房的混合群体及其双亲。发现10个引物的扩增产物在近等基因系间表现出特异性，表现为多子房亲本及其混合群体有带，单子房亲本及其混合群体无带；6个引物扩增产物表现出的特异性相反，单子房有带，多子房无带。经过重复实验和群体单株验证，引物S236在多子房亲本、混合群体及其群体单株中都表现出稳定的多态性，可以作为多子房显性基因的分子标记。     

RAPD校正及玉米肿囊腐霉抗性基因的分子标记

RAPD校正是指以RAPD的扩增能力为尺度对DNA模板进行调速以使RAPD具有最合适的扩增能力。RAPD校正的理论 可重复的碱基误配率的存在以及RAPD片段间的扩增竞争，误配率的大小决定了RAPD竞争性条带的有无和强弱，本研究应用RAPD校正的DNA对玉米肿囊腐霉抗性基因的分子标记进行了筛选，找到一个呈反向连锁的分子标记DPB17800，其遗传距离为8.1cM。结果一,RAPD有显著地提高RAPD扩增的重复性。     

与苹果柱型基因（Co）紧密连锁的分子标记的筛选

苹果的柱型性状很适合于现代化的矮密栽培,所以成为苹果生产上有重要利用价值的农艺性状.寻找与柱型基因(Co)紧密连锁的分子标记,就可以借助于标记辅助选择的手段来提高柱型苹果的育种效率.本研究以短枝富士、舞姿(柱型)及其F1分离群体为试材,用分离群体分组分析法,筛选到了Co基因的一个AFLP标记,群体中的共分离分析结果表明,该标记与Co基因位点的重组率为3.3±2.3%.Southern分析结果显示,此标记在苹果基因组中为单拷贝.     

甘蓝Ogura胞质雄性不育基因的RAPD标记筛选*

有关利用RAPD[1]技术进行分子标记的研究报道很多,如王俊霞等[1]对甘蓝型油菜Pel CMS育性恢复基因和王晓武等[2]对甘蓝的一个显性核雄性不育基因均进行了RAPD标记.我们经过多年的选育,已经成功把外源胞质雄性不育基因转育到甘蓝自交不亲和系上,现已成功选育出不育性稳定和经济性状优良的甘蓝雄性不育系.为了更深入的研究其不育机理,利用RAPD分子标记技术对其不育基因进行了标记,为以后开展甘蓝杂优育种提供标记基因打下基础.     

大葱(Allium fistulosumL.)胞质雄性不育基因的RAPD标记

利用220个随机引物分析了大葱不育系（209A0和保持系（209B）的cpDNA,mtDNA。其中引物S13、S38、S72、S73、S200在叶绿体或线粒全基因组中扩增出了多态性片段S132800、S38950、S7230S731100、S2002400；单株检测表明，它们与育性连锁S132800能在“章丘大葱”、“莱芜鸡腿”、“韩国大葱”等群体中区分N、S胞质，S2002400能在所有供试材料中区分两种胞质因而具有更大的利用价值。筛选的标记在测交，杂交，自交后代中仍能检测到，可用于分子标记辅助育种。     

甘薯抗茎线虫病基因的RAPD标记

以甘薯（Ipomoea batats）高抗品种徐781和高感品种徐薯18的200个后代为实验材料，对其进行抗病性鉴定和RAPD分析，获得与抗茎线虫病基因相连锁的RAPD标记OPD01-700。经13个高抗后代、5个高感后代、8个感病后代以及已鉴定的具有稳定抗性的10个品种验证表明，该标记可作为甘薯抗茎线虫病辅助育种的分子标记。     

小麦T型雄性不育恢复基因的遗传分析及RAPD标记

2114是一个携带有来自小伞山羊草的恢复基因的T型恢复系，为研究该恢复系恢复基因的遗传，我们将恢复系2114与3个不育系ND44A、D8442A、D北15A杂交，通过调查三个组合的F2代群体育性分离对恢复基因进行了遗传分析。分析表明除了一对主效基因控制外，2114 性同时又受微效基因的影响，而且2114中携带有恢复基因的易位染色体在不同遗背景中雄配子的传递率不同。以ND44A／2114的F2代分离群体为作图群体，利用分离群体分组分析法（Bulked Segregant Analysis,BSA），用460个随机引物对2114中的T型细胞质雄性不育恢复基因Rf6进行RAPD分析，筛选到10个可在亲本间扩增出多态性的引物，其中OPI18经多次重复能在亲本间及不育和可育池间扩增出稳定的多态性片段OPI181260。进一步对F2群体的147个单株分析表明：OPI181260与恢复基因Rf6的遗传距离为3.4cM。     

中国野生葡萄抗白粉病基因RAPD标记的克隆及序列分析

对获得的中国野生葡萄抗白粉病基因RAPD标记OPW02-1756、OPO11-964、OPY13- 661、OPB11- 520、OPW05-766、OPV03-1365和OPJ16-759进行了回收、克隆、测序及序列分析。结果表明,7个RAPD标记的实际长度分别是1756bp、964bp、661bp、520bp、766bp、1365bp和759bp。OPW02-1756序列与3条欧洲葡萄cDNA克隆获得的EST序列有94 ~ 98%的同源性。OPO11- 964序列与欧洲葡萄“赤霞珠”的1条EST序列有93%同源性,与“霞多丽”的2条果实不同发育时期获得的EST序列有90%和87%的同源性,与甜橙在多种病原菌侵染后通过cDNA文库获得的1条EST序列有83%的同源性。OPO11-964最大的一个阅读框架包含444个碱基,编码147个氨基酸,该氨基酸序列和21个其它生物的未知功能蛋白序列有部分相似性。OPY13-661序列与欧洲葡萄16条EST序列有同源性,其中与“赤霞珠”cDNA克隆的EST有较高的同源性, 与“霞多丽”的2条叶片非生物胁迫有关的EST序列同源性均为89%。OPB11-520序列与拟南芥基因组4条未知功能DNA序列有94%同源性。OPW05-766序列与来自于酿酒葡萄的GAG-POL 前提有50%的同源性。OPV03-1365序列与水稻基因组6条序列有81 ~ 88%的同源性,与拟南芥基因组3条序列有84 ~ 91%的同源性。OPJ16-759与欧洲葡萄“霞多丽”叶片14条非生物胁迫EST序列有83 ~ 100%的同源性,与欧洲葡萄“Cabsau”浆果3条水分胁迫的EST序列有94 ~ 100%的同源性。     

猕猴桃雄性基因RAPD标记S1032-850的获得及其应用

利用RAPD技术对美味猕猴桃(Actinidia deliciosa var.deliciosa)海瓦德×秦雄201杂交F1代雌雄分离群体进行分析,获得了与雄性基因链锁的RAPD标记.通过对300个随机引物的筛选和研究,得到了与猕猴桃雄性基因链锁的RAPD标记S1032-850,并在杂种后代、中华猕猴桃(A.chinensis var.chinensis)和美味猕猴桃雌雄个体上进行了验证.进一步对猕猴桃雄性RAPD标记S1032-850回收、克隆和测序,获得了该标记的核苷酸特定序列,由867bp的特定碱基序列组成,该序列片段已被GenBank收录,登陆号为AY336259.     

葡萄属植物抗黑痘病基因的RAPD分析

采用田间自然鉴定的方法,研究了中国野生葡萄部分种和株系、欧洲葡萄及其杂种、葡萄种间杂交组合毛葡萄商-24?欧洲葡萄龙眼的F1群体对黑痘病的抗性.结果表明,中国野生葡萄的部分种和株系对黑痘病表现了高度的抗性.种间杂交后代对黑痘病的抗性存在很大的差异.欧亚种葡萄品种间对黑痘病的抗性存在抗病和感病两种类型.欧美杂种葡萄品种间对黑痘病的抗性只存在抗病程度的差异.运用RAPD技术,采用集群分离分析(bulked segregant analysis, BSA)的方法进行葡萄抗黑痘病基因连锁的分子标记的研究,获得了与抗病基因相连锁的RAPD标记:OPV02-600和OPJ13-300,并在杂种后代、葡萄野生种、河岸葡萄和欧洲葡萄中进行了验证.     

芽孢杆菌(Bacillus spp.)拮抗基因的分子标记

用ＢＯＸ－ＰＣＲ指纹图谱进行了１８４个格兰氏生菌株,其中有４１个菌株与标准菌种Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ之间的ＤＮＡ指纹图谱相似性大于７０％,在离体条件下,测定这些菌株对水稻纹枯菌的拮抗性能。选出４个代表菌株（Ｇ４３３、Ｇ４３４＾－、Ｇ３９６＾＋、Ｇ２９２＾＋）用于筛选ＲＡＰＤ－ＰＣＲ的有效引物、先后共测试了１２４个随机引物,有８个随机引物能够产生明显与拮抗基因相关的ＤＮ     

玉米Rf3基因近等基因系(NIL)的构建及RAPD验证

利用杂交、回交和自交序成了玉米ＣＭＳ－Ｓ型育性恢复基因Ｒｆ３的一对近等基因系（ＮＩＬ）以用于相关分子撑的研究,先前的研究认为,建立ＮＩＬ所需回交次数一般为６次以上,本研究用ＲＡＰＤ分析证明了Ｒｆ３基因近等基因系创建的回交次数为４次,即达到与目标连锁片段的有效渗入。     

黄瓜果实苦味(Bt)基因的插入缺失(Indel)标记

为了筛选与黄瓜果实苦味(Bt)基因紧密连锁的插入缺失(Indel)标记,本研究以黄瓜(Cucumis sativusL.)果实苦味和果实不苦的高代纯合自交系46GBt和931为亲本构建的F2分离群体为试材,明确了黄瓜果实苦味性状遗传是符合单显性基因控制的质量性状.同时在完成Bt基因初步定位和双亲重测序的基础上,利用生物信息学分析双亲在初步定位区域的序列差异,设计了7对InDel标记.通过对含有184个单株的F2群体分析,获得了与Bt基因连锁距离为0.8 cM的Indel标记Bt-InDel-1.利用不同于本研究且包含58个单株的黄瓜F2群体材料对Bt-InDel-1的验证分析表明,该标记检测的正确率达到94.8％.本研究结果可用于无苦味黄瓜的分子标记辅助选择(MAS)育种及Bt基因精细定位.     

苹果属小金海棠Fe(Ⅱ)转运蛋白基因的克隆和序列分析

1986年,Romheld和Marschner首先提出高等植物在长期适应缺铁胁迫过程中逐渐形成的两种适应性机理。在缺铁胁迫的条件下,机理I植物通过激活一种特异的H^ -ATPase而使土壤酸化,并通过一种特异的根部还原酶将Fe(Ⅲ)还原成Fe(Ⅱ)。之后Fe(Ⅱ)通过它的转运蛋白(Transporter)跨越根部的细胞质膜而被转运。     

水稻Wx基因(CT)n微卫星标记与稻米淀粉品质的关系研究

利用引物４８４／４８５对龙特甫Ａｘ３７１Ｆ２群体的３６个单株进行Ｗｘ微卫星（ＣＴ）ｎ检测发现,微卫星标记是共显性标记,３种类型标记的分离比是８：１５：１３,符合盂德尔分离定律,进一步将同－Ｗｘ基因型植株上的种子混合测定淀粉品质,发现表观直链淀粉含量（ａｐｐａｒｅｎｔａｍｙｌｏｓｅｃｏｎｔｅｎｔ,ＡＡＣ）、糊化温度（ｇｅｌａｔｉｎｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ,ＧＴ）、胶稠度（ｇｅｌ ｃｏｍ     

与大白菜TuMV抗病基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记开发

分子标记辅助选择可大大加快育种进程,然而由于大白菜抗病毒病遗传规律的复杂性,目前所定位的基因和筛选的连锁标记远不能满足育种需要,为了更好地对抗病毒病白菜(Brassica campestris ssp.pekinensis)进行分子标记辅助选择,本研究筛选了与大白菜抗芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记.本研究在对该基因进行定位的基础上,利用回交1代(backcross1,BC1)分离群体,采用分离群体分组分析法(bulked segregation analysis,BSA)、简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)和序列特异引物(sequence specific primer,SSP)标记技术,筛选与该基因紧密连锁的分子标记.通过对13对SSP引物和16对SSR引物的分析表明,有8对引物在两亲本间表现多态性,有5对引物扩增出的标记与基因TuRBCS01紧密连锁或共分离,分别为mBr4072、Bra025493-1、Bra025493-2、Bra025467-4和Bra025467-5.筛选出与大白菜TuMV抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记2个,分别为SAAS_mBr4072_240 (1.5 cM)和Bra025493-1(1.0 cM),另有3个标记与基因TuRBCS01共分离,分别为SAAS—Bra025493-2_749、SAAS_ Bra025467-4—780和SAAS—Bra025467-5_ 956.上述标记丰富了大白菜抗TuMV分子标记的数量和种类,有望用于大白菜抗病毒病分子标记辅助选择.     

利用香味基因(fgr)的功能分子标记1F/1R高效选育籼稻香型不育系

为了尝试利用分子育种技术高效选育实用性籼稻优质香型不育系,本实验对参试的13份水稻籼型(Oryzasativa ssp.indica)保持系进行了稻米香味性状测定,并采用香味基因(fgr)的功能分子标记1F/1R进行PCR分子检测,发现宜香B有浓烈香味,PCR扩增出Ⅰ型带(fgr/fgr),其余材料均为Ⅱ型带(Fgr/Fgr)。利用该分子标记,对Ⅱ-32B/宜香B配组的F1～3进行了1F/1R标记多态性鉴定,结果表明,分子标记具有共显性特性,表现为单基因控制模式。经过F2代分子标记辅助选择,F3代入选株系的香味特异性标记1F/1R纯合率高达96.0%。在F3选留的Ⅰ型纯合系基础上,结合株型、粒型、透明度、垩白度、糊化温度、直链淀粉等指标的田间和室内选择,选株与Ⅱ-32A成对交,并以后每世代保持约50～60对成对交规模,连续5代选株成对交,最终获得了一批性状稳定的优质香型不育系(保持系),暂定名为浙农香A(B)系列。实验还选取4份代表性不育系(保持系)作了较为全面的特性鉴定,结果表明,该4份不育系(保持系)的1F/1R均为Ⅰ型标记,香味明显,且株型良好、粒型细长、高透明度、低垩白、中等糊化温度、中等AC含量,是...