牛卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵泡大小、卵泡液和卵丘细胞对牛卵泡卵母细胞体外成熟的影响。结果表明 :直径 2～ 6mm卵泡中的卵母细胞成熟率 ( 72 1%)最高 ,与直径小于 2mm( 5 8 4%)、6～ 8mm( 5 6 4%)及大于 8mm ( 3 5 0 %)卵泡中的卵母细胞组差异显著 ;成熟培养基中添加 10 %的新鲜牛卵泡液 (bFF)对牛卵母细胞的体外成熟有促进作用 ,但高浓度的bFF( 2 0 %、3 0 %)则抑制牛卵母细胞的体外成熟 ;卵丘 -卵母细胞复合体的质量影响卵母细胞的体外成熟 ,A、B、C三级卵母细胞成熟率分别为 86 1%、66 3 %、3 5 6%,卵裂率分别为 42 8%、3 1 9%、10 5 %,差异均显著 (P <0 0 5 )。     

卵泡大小和颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

用切割法采集卵泡液,收集卵丘一卵母细胞复合体（Cumulus oocytes comlexs,COCs）和自然裸卵,将部分COCs去除卵丘细胞获得机械裸卵,COCs放入体外成熟培养液中培养为成熟卵母细胞,加入获能的精子液,进行体外受精。结果表明：卵母细胞的体外成熟率和卵裂率与卵泡直径密切相关,大卵泡（80．95％,P〈0．01）和中等卵泡（75．50％,P〈0．05）的卵母细胞成熟率高于小卵泡（50．27％）;犬卯泡（53．53％）和中等卵泡（47．13％）的卵裂率显著高于小卵泡的32．26％（P〈0．05）。COCs、机械裸卵和自然裸卵的体外成熟率分别为75．0％、54．2％和10．5％,差异极显著（P〈0．01）,卵裂率分别为53．8％、10．8％和0％,差异极显著（P〈0．01）。对照组和1×10^5、1×10^6个／mL颗粒细胞组卵母细胞体外成熟率分别为68．6％、69．6％和67．8％,无显著差异（P〉0．05）,但均显著高于1×10^7个／mL（51．5％,P〈0．05）和1×10^10个／mL（35．5％,P〈0．05）颗粒细胞组,但各组间的体外受精率无显著差异（P〉0．05）。结果提示,大卵泡和中卵泡的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率显著高于小卵泡,体外成熟培养液中添加高浓度的颗粒细胞能显著抑制卵母细胞的体外成熟。     

牛有腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究

试验从屠宰场收集了 4 8头青年黄牛、34头青年水牛的卵巢共 16 4个 ,共回收可用卵母细胞 86 4枚。水牛平均每个卵巢可回收 3.2 2枚可用卵母细胞 ,相当于黄牛 (6 .72枚 )的一半。试验结果表明 :水牛卵巢生长卵泡少 ,卵母细胞产量少、质量差 ;3种采集黄牛卵泡卵母细胞的方法 ,用抽吸加切割法平均从每个卵巢回收的可用卵数 (7.71枚 )都极显著高于抽吸法 (6 .19枚 )和切割法 (6 .4 4枚 ) (P <0 .0 1) ,但是该法手续繁杂 ,适于一次且只能收集少量卵巢时使用 ;在黄牛和水牛卵母细胞成熟培养液中用 0 .3%PVP代替 10 %FBS ,牛卵母细胞的体外成熟率无显著差异 (P >0 .0 5 )。     

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状孟庆刚李光鹏曹允考（东北农业大学动物科学系１５００３０）１引言随着哺乳动物胚胎工程技术的发展，人们对猪卵母细胞体外成熟的研究也取得了很大的进展。关于猪卵母细胞体外成熟的理论和培养技术也日渐成熟。相信随此项技术的发展，人们...     

牛卵母细胞体外成熟技术研究

从两方面探讨了牛卵母细胞的体外成熟培养效果,即对不同级别和不同卵巢卵泡直径的卵丘卵母细胞复合体（COCs）进行成熟培养,测定其成熟率。COCs级别不同,培养成熟率之间存在很大差异,A级COCs成熟率为63．81％,B级为47．81％,显著高于C级和D级（P〈0．01）。卵母细胞的成熟率与采集COCs时的卵泡直径关系密切。中等卵泡的卵母细胞的成熟率为61．82％,显著高于小卵泡和大卵泡（P〈0．01）。试验结果表明：A级和B级COCs是卵母细胞体外培养的主要资源;在卵母细胞体外培养过程中,宜选择卵泡发育水平基本正常的中等卵泡采集COCs,而不宜选择发育过大或过小的卵泡。     

牛卵母细胞体外成熟

卵母细胞体外成熟培养研究主要集中在提高体外成熟卵母细胞支持胚胎发育的能力上。本文主要从成熟机理、卵母细胞的来源、卵母细胞的成熟培养环境及培养时间等方面进行了综述,介绍了目前卵母细胞体外成熟培养的进展情况。     

牛卵母细胞体外成熟的研究进展

牛在大多数情况下一胎一仔，自然双胎的概率很小。其根本原因在于：牛的卵巢大多数情况下每次只排1个卵，因而可能有一个胚胎产生，这极大地影响了牛的繁殖性能。而通过牛卵母细胞体外成熟技术能获得较多的卵子，与体外受精技术的相结合，大大提高了牛的繁殖性能，近年来人们对牛卵母细胞体外成熟进行了不断研究，并取得许多新的进展，笔者就此作了综述。     

影响牛卵母细胞体外成熟的因素

本文就牛体外受精的关键环节之一体外成熟,阐述了卵母细胞质量、培养基、激素、生长因子、血清、卵泡液及颗粒细胞对其的影响。     

牛卵母细胞体外成熟的研究进展

牛在大多数情况下是一胎一仔,自然双胎的概率很小。其根本原因在于:牛的卵巢大多数情况下每次只排1个卵,因而只可能有一个胚胎产生,这极大地影响了牛的繁殖性能。而通过牛卵母细胞体外成熟技术能获得较多的卵子,与体外受精技术相结合,大大提高了牛的繁殖性能。近年来人们对牛卵母细胞体外成熟进行了不断研究,并取得许多新的进展,笔者就此作了综述。     

牛卵母细胞体外成熟的研究进展

本文就卵母细胞的来源、培养基的选择、培养温度、气相条件、培养液的体积、添加物、成熟判断的标准对卵母细胞IVM的影响以及存在的问题进行了分析,指出卵母细胞的体外成熟是体外受精技术的重要环节,是决定体外受精成功与否的关键。     

牛卵泡卵母细胞的体外成熟和冷冻保存

在简化牛卵母细胞体外成熟的基础上,观察了保护剂、平衡温度、预平衡方法、解冻方法以及冷冻方法对牛卵泡卵母细胞冷冻的影响。结果表明:在体外成熟培养液中添加26.2 mmol/L的NaHCO3和对屠宰场卵巢进行选择更能促进牛卵母细胞的体外成熟;无论是程序冷冻还是玻璃化冷冻,乙二醇(EG)与甘油(GLY)相比更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻效果;在程序冷冻中,冷冻液中添加0.1 mol/L蔗糖比添加0.3mol/L的蔗糖更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻;在玻璃化冷冻中,37℃和25℃的平衡温度比4℃更适合牛卵泡卵母细胞的冷冻;在10%、5%、1%的预平衡浓度之间,5%的预平衡浓度即可达到预平衡的效果;在解冻时,多步脱除保护剂更能保护冷冻的卵母细胞;比较了几种最小样本量(minimum size sample,MSS)玻璃化冷冻方法,解冻成熟培养后的成熟率,拉细毛细玻璃管冷冻法为(41.67±3.19)%,极显著高于未拉细毛细玻璃管冷冻法(glassmicropipette,GMP)的(30.19±1.93)%和固体表面冷冻法(solid surface vitrification,SSV)的(28.33±2.89)%(P<0.01)。     

猪小腔卵泡卵母细胞体外成熟研究

本实验通过与2～6mm猪卵泡卵母细胞相对比，研究了猪2mm以下卵泡卵母细胞的体外成熟。结果如下(1)由2mm以下卵泡获得的小(直径100.29±7.9μm)、中(109.36±3.71μm)和大(118.90±2.46μm)3类卵母细胞培养48h的成熟率分别为0、22.31％和45.45％。(2)2mm以下卵泡卵母细胞的成熟率(52.63％)显著低于2～6mm卵泡卵母细胞的成熟率(80.39％)。(3)以含PFF的培养液培养2mm以下卵泡卵母细胞其成熟率(53.54％)显著高于不含PFF的对照组(22.77％)。(4)在培养的前24h加入PMSG、后24h去除PMSG，其成熟率(41.86％)与含PMSG的培养液连续培养48h的成熟率(50.0％)无显著差异，而显著高于前24h不加PMSG，后24h加入PMSG培养的成熟率(5.41％)；也显著高于以下不含PMSG的培养液连续培养48h的成熟率(3.3％)。     

卵泡发育和卵母细胞成熟

本文简要叙述了卵泡发生的生理过程。着重讨论了卵泡发生期间的内分泌调节及影响卵母细胞成熟因素的研究现状。随着动物胚胎工程技术的发展，对胚胎的需求日益增多。充分利用卵母细胞的体外成熟和体外受精技术，可提供大量的优质胚胎。卵母细胞体外成熟的历史已有三十余年，并已在小鼠（１９６５）、大鼠（１９７４）、仓鼠（１９９３）、兔（１９８７）、猪（１９８６）、山羊（１９８４）、绵羊（１９７８）、牛（１９６５）、恒河     

培养液体积对牛卵泡卵母细胞IVM效果的影响

研究了不同的培养液体积 ( 10 0 μl、40 0 μl、2ml)对牛卵泡卵母细胞的体外成熟及随后的发育能力的影响。结果表明 ,采用四孔培养板用 40 0 μl培养液 (上覆灭菌矿物油 )培养卵母细胞 ,其体外成熟率及发育率与微滴 ( 10 0 μl)培养的相应指标无显著差异 (P >0 0 5 ) ,但二者均显著优于 2ml体积的培养体系     

山羊腔前卵泡卵母细胞体外发育与体外成熟的研究

通过比较3种培养基、5个培养系统和4种培养方法对卵母细胞生长率的影响,结果发现,就卵母细胞生长率而言。以MEM HEPES培养液＋5％FCS＋40μg/mlFSH 20ng/ml IGF-1 2mmol/L cAMP 2mmol/L次黄嘌呤培养系统为佳。在腔前卵泡体外培养过程中,12个卵泡经腔期发育,约占同等培养条件下卵泡九的2％（12／603）。培养卵泡经腔期发育并未改善其卵母细胞的成熟率（0／12）。腔前卵泡卵母细胞经过不同时间的体外培养,发现经12和14d培养结不的卵母细胞中,有81％（47／58）生发泡明显迁移至质膜下;培养14d的卵母细胞中,约16．4％（9／55）产生pbI但不排出,因而在胞质中见到极体;;培养16d得到1枚排出pbI的孤雌激活卵;同时发现培养16－18d卵母细胞退化率明显增高（P＜0．01）。推测山羊腔前卵泡卵母细胞体外培养的适宜时间为16d。     

促卵泡素对奶牛卵母细胞体外成熟的影响

为研究促卵泡素（FSH）在奶牛卵母细胞的成熟过程中的促进作用,在牛卵母细胞成熟液中添加0μg／mL、10μg／mL、25／μg／mL、50μg／mL、100μg／mLFSH统计成熟率。结果表明,添加FSH各组与对照组相比,卵母细胞的成熟率均显著提高。而添加10μg／mL、25μg／mL、100μg／mL组卵母细胞的成熟率之间差异不显著,50μg／mL组卵母细胞的成熟率最高。无论是否添加FSH都不会影响到孤雌激活的卵裂率。说明FSH具有促进奶牛卵母细胞成熟的功能。     

不同因素对牛卵母细胞体外成熟培养效果的影响

文章主要从采集方法、性周期阶段以及培养液中FBS浓度3个方面对牛卵母细胞体外成熟的影响进行了分析。结果表明：①不同采卵方法的采卵效果存在差异,但成熟培养和体外受精情况差异不显著（P〉0．05）;②从卵泡期和黄体期卵巢采集到的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率分别,为59.7%,56．6％和39．5％、36．6％,没有显著差异（P〉0．05）;③培养液中添加20％FBS组的卵母细胞成熟率和卵裂率显著高于10%FBS和30%FBS组（P〈0．05）.     

牛卵母细胞体外成熟的影响因素

卵母细胞的体外成熟受多种因素的干扰和制约,不同种类、不同因素、不同的实验室条件等对卵母细胞的生长发育影响均很大。随着卵母细胞体外成熟技术的不断改进和完善,提高牛卵母细胞体外成熟的数量和质量以及充分利用良种资源等的研究就具有十分重要的意义。从体外成熟的作用机制、卵母细胞的获取、激素、成熟时间及人为操作等因素对牛卵母细胞体外成熟的影响进行了综述。     

牛性机能发育阶段与卵泡、黄体因素对卵母细胞

利用屠宰母牛卵巢,对来自不同性机能发育阶段母牛的卵巢卵母细胞、不同状态卵巢卵泡的卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）进行了系列研究。结果表明,来自初情期、性成熟母牛卵巢的卵母细胞受精后的卵裂率（７４．７％和８１．５％）、囊胚率（２３．０％和２６．８％）显著高于来自初情期前母牛卵巢卵母细胞的卵裂率（１８．８％）和囊胚率（１．８％）Ｐ〈０．０５;有黄体卵巢的卵母细胞体外受精后的发育能力显著