基于ISSR和SRAP标记的69份红毛丹种质资源DNA指纹图谱构建

利用筛选出的多态性高、谱带清晰的8条ISSR引物和18对SRAP引物分别对海南省保存的69份红毛丹种质资源进行PCR扩增,8条ISSR引物共检测到425条多态性条带,其中品种(系)特异条带47个,平均位点多态性信息含量(PIC值)为0.928,可鉴别的种质资源数25~67份;18对SRAP引物共检测到894条多态性条带,其中品种(系)特异条带69个,平均位点多态性信息含量(PIC值)为0.936,可区分的种质资源数为17~63份。综合各项指标,利用ISSR16和ISSR5引物21个条带用于构建红毛丹种质DNA指纹图谱,该图谱可有效区分69份红毛丹种质资源。     

菜薹杂交种ISSR和SRAP的指纹图谱构建

利用ISSR和SRAP两种分子标记技术,对1份菜薹杂交组合进行分析。结果表明,3个ISSR引物和3对SRAP引物可扩增出供试材料双亲的互补特征带,将双亲及杂种F1区分开;另有2个ISSR引物也可有效鉴别双亲及杂种F1。从而建立了由ISSR和SRAP两种标记技术组成的鉴定该杂交组合的分子指纹图谱,并转化为数字指纹图谱,为菜薹种子纯度的鉴定开辟了新的技术途径,为菜薹新品种知识产权的保护提供了重要手段。     

甜瓜杂交种SSR指纹图谱的构建

以2个甜瓜杂交品种(系)的种子东方蜜1号和01-31为试材,从63对SSR引物中筛选出10对扩增产物具有稳定多态性的引物,这些引物分布在甜瓜整个基因组,每对引物可以检测到2～4个数目不等的多态性片段(allele),共27个多态性片段,平均为2.7个,片段大小介于85￣270bp之间,并从入选的10对SSR引物中选出7对构建了这2个甜瓜杂交种的指纹图谱。在比较分析各试材图谱的基础上,探讨了品种指纹图谱的统计学方法,并对构建的2个甜瓜杂交种的指纹图谱进行了可信度分析,建立了适于种子检验中使用的标准SSR标记指纹图谱。实验表明,利用SSR技术进行甜瓜杂交种的纯度鉴定是可行的、有效的。     

6个新疆矮化核桃品种的指纹图谱构建及亲缘关系分析

以8个核桃品种叶片为材料,利用ISSR技术,从100条ISSR引物中筛选出2条对8份DNA进行PCR扩增,共扩增位点34个,其中多态位点24个(比例达70.58%),构建出8个核桃品种的数字化指纹图谱。以NTSYSpc2.1软件计算品种指纹图谱的相似系数(GS)并进行(UPGMA)聚类分析,样品间的GS在0.54～0.94之间,在GS=0.64处将8个核桃品种分成2组:第一组母本为‘扎343’(1号),矮化品种有‘新温724’(4号)和‘新温908’(5号);第二组母本为‘新早丰’(2号),矮化品种有‘新温609’(3号)、‘新温915’(6号)、‘新温916’(7号)和‘新温917’(8号),与田间表现基本一致。     

甜瓜资源与品种核酸指纹鉴定关键技术

在全基因组水平利用分子标记技术,构建甜瓜种质核酸指纹库,建立早期、快速、准确的甜瓜种子纯度、真实性及资源的遗传血缘检测技术. 1 关键技术核心 筛选出用于构建甜瓜核酸指纹库的核心引物是关键技术问题.利用20份具有代表性的甜瓜品种(系)筛选1219对SSR引物,得到多态性的引物470对.综合考虑扩增条带统计难易、多态性信息含量(PIC)、整合遗传连锁图谱(ICUGI,2011,http:∥www.icugi.org/.)等多种因素,最终选择其中18对扩增多态性丰富的引物作为核心引物.经过18对引物扩增后,可以对供试甜瓜品种(系)中的每一份材料建立了一个能区别于其他供试材料的指纹图谱代码.     

李种质资源ISSR反应体系的建立

以5′-(AC)_9 A-3′为引物对牛心李(Prunus salicina cv.Niuxinli)ISSR(inter-simple sequence repeats)反应体系的优化研究表明,25μL ISSR反应体系中,Taq酶、Mg~(2+)、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的最适浓度分别是:0.3U、1.5mmol/L、0.2μmol/L、20ng和0.16mmol/L。利用该优化体系,以5′-(AC)_9 T-3′为引物,构建了中国李18个品种的ISSR指纹图谱,该引物可将这些品种完全区别开来;以5′-(AC)_9 C-3′为引物,构建了李属6类种质资源的ISSR指纹图谱,该引物区分率为100％。     

西州密系列甜瓜SSR指纹图谱构建及聚类分析

为利用SSR标记技术建立西州密系列甜瓜品种的DNA指纹图谱,实现快速准确地鉴定品种.利用18份西州密系列甜瓜品种(系)对73对甜瓜SSR引物进行筛选,获得9对扩增稳定、呈共显性、条带清晰、多态性好的引物,其中每对引物可检测到3～6个等位变异,平均4.33个;多态性信息含量(PIC)平均值为0.45,变化范围为0.20～...     

杏品种的RAPD分析

实验从S系列(Sangon公司)100个引物中筛选出能稳定扩增的18个引物,用这些引物首次对新世纪与红丰等20个杏品种进行了扩增,均具有多态性。共扩增出218条带,106条具有多态性,多态性比例为48.6%;建立了红丰及新世纪等优新品种的DNA指纹图谱,找到了它们的特异谱带。利用特异谱带结合DNA指纹,可将参试品种鉴别出来。同时利用STATISTIC软件,根据RAPD标记相似系数采用UPGAM聚类策略,对20个杏品种进行了聚类分析。在LD=0.4时划等值线,将参试品种分为7类。     

苹果品种ISSR指纹图谱构建

以富士、长富2、长富6、红星、新世纪、美国8号及凉香等7个品种为试材,进行了ISSR(inter-simplesequencerepeats)分析,构建了这几个苹果品种的ISSR指纹图谱。发现引物IS061可将富士、长富2与长富6三个品种一一区分开;而IS026则能将富士、红星、新世纪及美国8号4个品种相互区别开。初步证明利用ISSR标记技术能很好地将不同苹果品种鉴别出来。     

基于SRAP的三倍体无子西瓜品种指纹分析和杂种纯度鉴定

为了解三倍体无子西瓜品种SRAP(Sequence-Related Amplified Polymorphism)扩增特点及其在三倍体西瓜杂种纯度鉴定中的适应性,利用SRAP引物组合对当前生产上推广的9个三倍体无子西瓜品种进行了指纹分析和杂种纯度鉴定研究。结果表明,1)30对引物组合中筛选出多态性引物组合24对,共产生109条多态性带,平均每对引物组合产生多态性带4.5条,单个组合的多态性比率在12.5%～80%。2)结合多对SRAP引物组合,可以鉴别不同品种。3)在黑蜜5号及其父母本的指纹分析中,发现有1对引物组合(ME4/EM3)在黑蜜5号杂交种上扩增出了特异的条带,可以区分母本和杂交种,试验证明该引物组合能够用于黑蜜5号的杂种纯度鉴定。     

甜瓜属REMAP分子标记体系的建立及应用

基于甜瓜属Ty1-copia类逆转座子的长末端重复序列信息,结合ISSR引物序列,在体系优化的基础上建立了适用于甜瓜属物种的REMAP(retrotransposon-microsatellite amplified polymorphism)标记体系。对46份甜瓜属不同类型材料进行聚类分析,证明该标记体系能有效检测甜瓜属不同类型材料间的多态性,可以用于甜瓜属作物品种鉴定及指纹图谱构建。     

郑抗系列无籽西瓜品种SSR指纹图谱的构建

为实现无籽西瓜品种的快速、准确鉴定,用23对西瓜核心SSR引物分析了15份无籽西瓜品种的DNA指纹。23对核心引物中有21对具多态性,共扩增出58个基因型,平均2.71个,平均多态性信息量(PIC)为0.36。10对引物在9个品种上具有特征谱带,组合PIC值0.4的8对引物可以将参试的15个无籽西瓜品种一一区分开,并利用这8对引物构建了参试品种的数字指纹图谱。研究表明,西瓜核心SSR引物适合用于构建无籽西瓜品种的DNA指纹,将为无籽西瓜品种真实性鉴定和知识产权保护提供有效的技术依据。     

甜瓜分子标记纯度鉴定研究

以2个甜瓜品种西域雪1号、西域雪2号及其亲本为试材,建立并优化了单粒种子DNA快速提取法和适合甜瓜的RAPD、SSR分子标记杂交种纯度鉴定体系。从100条随机引物中筛选出G17用于西域雪2号纯度鉴定,可有效区分母本和杂交种。从19对SSR引物中筛选出9对稳定扩增、多态性丰富的引物构建西域雪1号、西域雪2号的SSR指纹图谱。SSR分子标记用较少引物即可扩增出品种特异性条带,且多数F1代带型呈双亲互补,非常适合种子纯度鉴定。同时,使用高浓度、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,条带更清晰,可区分只相差1个碱基的扩增片段,同RAPD相比,SSR分子标记更适合甜瓜杂交种纯度快速鉴定。     

佳美苦瓜纯度的SRAP鉴定

利用SRAP分子标记技术,对苦瓜品种佳美及其亲本的DNA指纹进行分析研究,经多次试验,从108对引物中筛选出2对特征引物能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带,扩增产物具有高度的稳定性和重复性,构建了相应的DNA指纹图谱.对100株佳美苦瓜进行了纯度鉴定,结果有3株植株只有母本特异带而没有父本特异带,与大田检测的结果...     

利用中国香瓜与哈密瓜的F2 群体构建SRAP连锁遗传图谱

 以中国甜瓜地方品种自交系4G21 (香瓜) 和3A832 (哈密瓜) 杂交产生的114个F2单株为材料, 利用29对SRAP引物构建甜瓜分子遗传图谱, 共产生187个多态性位点, 其中152个位点组成12个连锁群, 该图谱覆盖基因组长度2 077.1 cM, 平均图距13.67 cM。每个连锁群的标记数6～32个, 平均图距9.72～19.19 cM, 连锁群长度85.3～469.1 cM。     

甜瓜SRAP多态性分析及在品种鉴定中的应用

以国家蔬菜工程技术研究中心甜瓜单倍体育种组提供的12份薄皮甜瓜,30份厚皮甜瓜,2份野生甜瓜为试材,该研究优化了甜瓜SRAP反应体系,筛选出10对引物组合,分析了甜瓜多态性并对品种进行鉴定.结果表明:10μL反应体系为1×Buffer lμL,引物组合各20 ng,模板DNA 20 ng,dNTPs 2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.2U.10对引物组合在2份甜瓜上共扩增出166条带,其中多态性条带104条,每对引物组合平均能扩增出10.4个多态性位点.甜瓜间遗传距离在0.08～0.79(平均为0.357),54份甜瓜被分为二大类:Ⅰ类包括1份印度野生甜瓜和3份哈密瓜;Ⅱ类可再分为2个亚类:Ⅱ-1,是12份薄皮甜瓜;Ⅱ-2,包括1份中国野生甜瓜和37份厚皮甜瓜.引物组合m21e01、m21e10和m21e11区分率分别高达79.6％、81.5％和79.6％,有助于品种的高效鉴定.     

茶花品种ISSR指纹图谱反应体系建立与优化

以30个茶花品种为试材,采用5因素4水平正交实验以及单因素优化试验方法,研究Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度和模板DNA浓度对ISSR-PCR指纹图谱条带清晰度的影响,以进行茶花品种ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选。结果表明:茶花品种ISSR-PCR最适扩增条件为25μL反应体系中,Mg2+3.0mmol/L、dNTPs 0.2mmol/L、引物0.3mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5U、模板DNA 80ng以及52.1℃退火温度;试验从100个ISSR引物中筛选出12个适用引物;并对12个ISSR引物的多态性和稳定性进行了检验。     

基于形态学标记及SSR 标记的甜瓜主栽品种分类鉴定研究

利用形态学标记、SSR 分子标记技术对市场上广泛种植的甜瓜品种进行分类鉴定。利用形态学聚类分析，得到60份材料间的相似系数为0.73～0.94，在相似系数为0.74 处，60 份甜瓜材料被分为2 类，为薄皮甜瓜和厚皮甜瓜；在相似系数为0.77 处，薄皮甜瓜按照单果质量、熟性、果皮底色、芳香气分为4 组，实现初步分类。经过SSR 标记聚类分析，得到60 份材料间的相似系数为0.75～0.95，当相似系数为 0.77 时，可以将所有供试材料分为6 类。利用SSR 分子标记技术，为60 份不同甜瓜品种构建唯一的指纹图谱。18 对SSR 引物，每对引物可以检测到4～11 条数目不等的多态性条带，平均为8 条。多态性信息含量（PIC）平均为0.71，变化范围为0.58～0.88。采用QR 编码为60 份甜瓜材料构建了唯一的指纹图谱。试验结果表明形态学标记对60 份材料实现初步分类，SSR 分子标记则能够有效地区别60 份材料，并且为建立甜瓜品种的核酸指纹图谱库提供了理论数据，实现对甜瓜品种进行快速、准确的鉴定。     

十大技术之一(二) 甜瓜资源与品种核酸指纹鉴定关键技术

在全基因组水平利用分子标记技术,构建甜瓜种质核酸指纹库,建立早期、快速、准确的甜瓜种子纯度、真实性及资源的遗传血缘检测技术。1关键技术核心筛选出用于构建甜瓜核酸指纹库的核心引物是关键技术问题。利用20份具有代表性的甜瓜品种(系)筛选1219对SSR引物,得到多态性的引物470对。综合考虑扩增条带统     

石榴品种SSR指纹图谱构建及杂种父本鉴定

以枣庄市石榴国家林木种质资源库中收集的168个石榴品种为材料，利用SSR分子标记技术构建了石榴品种资源指纹图谱，并基于指纹图谱信息，应用最大似然值法(LOD)对品种‘秋艳’和‘会理青皮软籽’的自然授粉实生苗进行了杂种筛选及父本初步鉴定。22对SSR引物从168个石榴品种样品中共扩增到76个等位标记位点，其中多态性位点58个，多态性为76.3%。平均等位位点数(N_a)、有效等位位点数(N_e)、观测杂合度(H_o)、期望杂合度(H_e)分别为3.455、2.269、0.362、0.538,Shannon’s信息指数(I)平均值为0.897，多态性信息含量(PIC)介于0.330～0.692之间，平均PIC值为0.462。利用22对SSR引物可将166个石榴品种区分开，另有‘大满天红甜’和‘小满天红甜’2个品种未有效区分，有同物异名的可能；在此基础上构建了166个品种的特异指纹代码及指纹图谱二维码。基于指纹图谱信息，利用SSR标记从‘秋艳’的30个自然授粉子代实生苗中筛选到1个真杂种Q-1，疑似父本为‘峄城丰...