肽核酸与基因表达

肤核酸(PNA)是一类人工合成的核酸类似物,PNA与核酸链以Waston-Crick碱基配对方式稳定互补结合,具有高度的亲合性、稳定性、特异性特征,PNA能调节基因的表达作用,包括调节基因的复制、转录(或逆转录)、翻译过程,因此PNA有着广泛的分子生物学效应,显示出作为基因调节药物的应用潜力.     

多聚酶链反应区分血清Ⅰ型MDV强弱毒株

选用血清Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ＿１）基因组中位于１３２ｂｐ正向重复序列两侧的２段寡聚核苷酸为多聚酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对Ⅰ型ＭＤＶ强毒株（京－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５Ｃ株）的核酸进行基因扩增。结果显示：该弱毒株核酸基因中含６个或更多个拷贝数的１３２ｂｐ正向重复序列，而强毒株核酸基因中仅含２个，相同引物对Ⅱ型、Ⅲ型ＭＤＶ（ＳＢ－１株，Ｆｃ１２６株）和禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）核酸作ＰＣＲ扩增，未检出任何核酸片段。     

生物基因学在开发新药中的作用及基因药物的发展前景

１生物基因学及其技术生命科学已经揭示，基因是维持生命机体特性及其生长、繁殖、遗传和对环境（包括药物环境）响应的物质，它存在于细胞核的核酸之中。己证实核酸呈双螺旋结构。核酸中的ＤＮＡ（脱氧核糖核酸）就是生物学家称之为基因（ｇｅｎｅ）的这种生命物质。ＤＮＡ分子的各个片段（或基因组）代表各自相应的生物功能和遗传信息。实践证明，在对基因片段作出定位和分离的基础上，进行基因改造、修饰或重组，可以改变生物的品种，可以改良物种的遗传特性，可以防治遗传性疾病，也可以应用基因重组技术寻找或研制新的药物，或通过对生…     

寡核苷酸探针原位检测石蜡切片中PRRSV核酸

根据GenBank收录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ATCCVR-2332株ORF6和ORF7基因序列，用O1igo软件设计并合成大小为37bp的寡核苷酸探针，经生物素标记后，成功建立了原住检测石蜡组织切片中PRRSV核酸的方法。该探针能检测到56PgPRRSV核酸的RT—PCR产物DNA，能特异检测出PRRSV核酸及其PCR产物，而对猪瘟病毒（HCV）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪乙脑病毒（JEV）的核酸呈阴性反应。应用该方法检测PRRSVSC-1株人工感染的28日龄仔猪，在感染后7d即可在肺脏、肾脏、扁桃体、胸腺、肺门淋巴结、十二指肠和大脑检测到PRRSV核酸。该法可用于仔猪PRRSV感染的诊断和组织中核酸的定位及分布研究，也可用于甲醛固定组织的回顾性诊断。     

地高辛标记大肠杆菌1型菌毛结构基因核酸探针对鸡大肠杆菌分离株？…

将ＰＣＲ扩增的鸡大肠杆菌１型菌毛蛋白结构基因（ｐｉｌＡ）用地高辛标记成核酸探针与分属２８个血清型的５０个鸡大肠杆菌分离株进行斑点杂交，阳性率达８４％，用甘露糖敏血凝试验（ＭＳＨＡ）检测阳性率为７２％，表明核酸杂交比ＭＳＨＡ法更敏感。     

钒钼酸铵显色定磷法检测核酸含量

核酸是生物遗传信息的贮存库，它是一类重要的生物大分子，具有调节生物体内能量代谢、促进蛋白质（酶）的合成，参与遗传信息编码、传递细胞信号等重要的生理和生化功能，从整体上讲可提高生理代谢水平，具有明显的保健功能（刘洁生等，2002）。目前一些公司生产的系列核酸产品作为一种半必需营养物质，已应用到食品、医药和饲料等多个领域，为确保产品质量符合标准要求，准确测出产品中核酸含量至关重要。     

核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗（nucleic acid vaccine），也称基因疫苗（genetic vaccine），是指将含有编码的蛋白基因序列的质粒载体，经肌肉注射或微弹轰击等方法导入宿主体内，通过宿主细胞表达抗源蛋白，诱导宿主细胞产生对该抗源蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗是利用现代生物技术免疫学、生物化学、分子生物学等研制成的，     

光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究

采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异，灵敏，稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。     

光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究

采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异、灵敏、稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。     

犬常见传染病诊断基因芯片的研究与应用

根据PCR技术扩增出犬腺病毒（CAV）ORF1（p-Ⅷ）基因、犬细小病毒（CPV）VP2基因、鸡血红蛋白的珠蛋白基因（GLOBc）各保守基因片段；采用RT—PCR扩增出犬冠状病毒（CCV）纤突蛋白（S）基因、犬瘟热病毒（cDV）融合蛋白（F）基因、犬副流感病毒（CPIV）核衣壳结构蛋白（NP）基因、狂犬病病毒（RV）核蛋白（N）基因的各一段保守序列，克隆荻取质粒。通过微量点样技术将这些质粒作为探针点在硝酸纤维素膜上，产生二维DNA探针阵列，制作成诊断基因芯片。对360份待检样品匀浆后提取核酸作为模板，扩增相应保守基因片段。通过生物素标记PCR（RT—PCR）技术，将所获得的扩增产物与诊断基因芯片进行特异性的逆向点杂交，然后用扫描仪对芯片进行扫描分析、判断。结果表明，此方法比病毒分离、HI、PCR或RT—PCR方法灵敏度高、特异性强，平均检出率要高20％以上，并可同时对犬多种疫病进行快速诊断。     

花粉中核酸的研究

花粉中核酸的研究王开发张玉兰张盛隆（同济大学花粉应用研究中心：２０００９２）花粉营养成分非常丰富，而其中的核酸是重要的成分之一，核酸分ＤＮＡ（脱氧核糖核酸）和ＲＮＡ（核糖核酸）两大类，核酸的基本结构单位是核苷酸，ＤＮＡ主要由四种脱氧核糖苷酸组成，ＲＮ...     

内蒙古农业大学饲用作物遗传育种重点实验室

内蒙古农业大学“饲用作物遗传育种重点实验室”于2002年建成，该实验室依托内蒙古农业大学农学院作物遗传育种学科（具有博士学位授予权），设有基因工程实验室、细胞与染色体工程实验室、组织培养实验室，面积1200m^2，拥有荧光显微镜、核酸蛋白检测仪、基因扩增仪、凝胶成像扫描系统、蛋白质双向电泳仪、人工气候室等先进仪器设备180余台（套）。     

RNA干扰的研究进展

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是多种生物体内由双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）介导同源mRNA降解的现象。这种现象广泛存在于生物界，是生物体抵御病毒或其它外来核酸入侵以及保持自身遗传稳定的保护性机制，以其高效率、高特异性等特性，较反义核酸、核酶、三链RNA等基因沉默技术显示了独特优势及广泛的应用前景。本文就其发现、分子机制及其应用等方面的研究进行综述。     

PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。     

非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72在大肠杆菌中的表达

利用PCR技术，从含非洲猪瘟（ASFV）P72基因的克隆质粒BBBBPr4中扩增出1．94kb的P72基因．将P72基因和表达栽体pET-30c（＋）分别用限制性核酸内切酶Fba Ⅰ／XHoⅠ和BamHⅠ／XHoⅠ进行双酶切，然后在T4DNA连接酶作用下，将P72基因定向克隆至栽体pET-30c（＋）中相应位点上，并转化至宿主菌BL21（DE3）中，得到了重组菌株BL21（DE3）（pET—ASFvP72）。经PCR鉴定，构建的重组菌株中合有P72基因。重组菌株BL21（DE3）（pET-ASFVP72）经IPTG诱导后，其表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析，结果表明衣壳蛋白P72基因可以在受体菌中高效表达，达到了菌体总蛋白的34％，表达产物的分子量约为78Ku，并能被ASFV抗体所识别。     

PRRSV GP5蛋白及猪IL-18基因共表达核酸疫苗免疫原性试验

本试验通过分子克隆技术分别构建了单独表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5基因以及PRRSVGP5基因和猪IL-18基因共表达的重组核酸疫苗质粒（pEGFP—GP5和pEGFP—ILl8-GP5）,并进行仔猪免疫原性研究,对构建的PRRSV核酸疫苗所诱导的体液免疫和细胞免疫水平进行检测,进一步研究了PRRSV核酸疫苗免疫效果以及猪IL-18基因对PRRSV核酸疫苗免疫调节作用的影响。同时,调查了商业上应用不同类型的PRRSV疫苗诱导的免疫效果,并与核酸疫苗免疫效果进行比较。结果表明,IL-18作为免疫佐剂在疫苗免疫猪后诱导的病毒特异性细胞免疫反应方面具有很好的调节作用,共表达IL18-GP5蛋白能够明显的改善DNA疫苗的免疫效力,增强抗PRRSV的免疫保护。因此,DNA疫苗做为一种新一代疫苗可用于对抗高致病性PRRSV感染。     

关于肌细胞生成素基因的初步探或

肌肉调节因子（MRF）基因家族编码4种明显不同的肌肉特异性转录因子,分别称为生肌决定因子（MoyD）、肌细胞生成素（MyoG）基因、生肌因子5（Myff3）和生肌调节因子4（MRF4）,这些蛋白质代表控制骨骼肌生成很多方面的关键调节因子。MyoG基因为近年来人们发现的一种与肌纤维数目有关的基因。本文对肌细胞生成素（Myogenin）基因的位置结构、遗传多态性、多态性的检测及与经济性状关系进行了初步探讨。     

内蒙古农业大学饲用作物遗传育种重点实验室

内蒙古农业大学“饲用作物遗传育种重点实验室”于2002年建成．该实验室依托内蒙古农业大学农学院作物遗传育种学科（具有博士学位授予权）．设有基因工程实验室．细胞与染色体工程实验室．组织培养实验室．面积1200m^2，拥有荧光显微镜。核酸蛋白检测仪、基因扩增仪、凝胶成像扫描系统．蛋白质双向电泳仪，人工气候室等先进仪器设备180余台（套）。     

大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合基因的构建及其免疫原性研究

用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和Ｂｇ１Ⅱ双酶切质粒ｐＢＳＴ２－６，获得了大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ（ＳＴ１）基因，再将含ＬａｃＺ基因（编码β－半乳糖苷酶）的载体ｐＵＣ１８用ＢａｍＨＩ酶切、碱性磷酸酶处理，然后与ＳＴ１基因通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化至受体菌ＤＨ５α中。通过菌落原位杂交筛选，共筛选出５３个ＳＴ１基因探针杂交阳性的重组子，对其中一个重组子ＤＨ５α（ｐＸＳＴ１）进行限制性核酸内切酶酶切分析和核苷酸序列分析，证明重组质粒ｐＸＳＴ１含有２个正向串连在一起的ＳＴ１基因，而且融合在ＬａｃＺ基因的上游，具有正确的阅读框架。又ＤＨ５α（ｐＸＳＴ１）菌株能在含Ｘ－Ｇａｌ的ＬＢ平板上长成蓝色菌落，而且ＥＬＩＳＡ也检测到ＳＴ１融合蛋白，这表明该菌株能表达具有β－半乳糖苷酶活性的大肠杆菌ＳＴ１—β－半乳糖苷酶融合蛋白。免疫实验结果表明，重组菌株ＤＨ５α（ｐＸＳＴ１）安全无毒，表达的ＳＴ１融合蛋白能够诱发ＢＡＬＢ／ｃ鼠产生抗体，该抗体具有中和天然ＳＴ１肠毒素的毒性作用，这表明ＤＨ５α（ｐＸＴ１）可以作为预防幼畜腹泻的菌苗候选株。     

伪狂犬病病毒Ea株糖蛋白gD基因的表达及基因免疫

构建了2个利用人类巨细胞病毒（HCMV）的启动子启动表达伪狂犬病病毒Ea株糖蛋白gD基因的真核表达质粒pCIDI和pcDDI，体外转染BHK－21细胞，用间接免疫荧光法检测，证实糖蛋白gD在细胞中得到表达。用表达质粒pCIDI和pcDDI作为核酸疫苗免疫BALB/c小鼠，ELISA检测小鼠血清中抗伪狂犬病病毒的抗体，结果其滴度为1：128－1：1512。初步证实，用gD基因作为核酸疫苗免疫动物，可以激活机体的免疫应答反应。