流式细胞仪测定奶牛全血多形核白细胞的吞噬功能和呼吸爆发作用

试验建立了用流式细胞仪同时测定奶牛全血中多形核白细胞（PMN）吞噬功能和呼吸爆发作用的微量检测方法。奶牛全血用二氢诺丹明处理后，与直径为1．75μm的蓝色荧光乳胶微球培养，PMN内的二氢诺丹明被呼吸爆发过程中产生的还原性物质转化成发绿色荧光的诺丹明（ROD）。用流式细胞仪计数PMN，仪器可在数秒钟内计数几十万个PMN，识别PMN是否吞噬蓝色荧光微球和／或含POD，并可检测每个PMN所吞噬的微球数量。当血液中含细胞松弛素B为1、2．5、5mg/L时，PMN的吞噬功能和呼吸爆发作用均下降。     

MTT法测定以牛血液及乳中多形核白细胞的杀菌功能

金黄色葡萄球菌和多形核白细胞于37℃培养一定时时间，用皂素破坏白细胞，然后加入3－（4，5－二甲基噻唑－2－YL）2，5－二苯基－四唑溴盐（MTT）溶液，未被白细胞杀死的金黄色葡萄球菌将MTT转化成蓝紫色甲沉淀，用二甲亚砚溶解沉淀，并用酶标仪测定甲相对含量，以此推算白细胞杀菌能力，结果表明，MTT法重复性好，一次可测定多个样品，与平板计数法比较，有较好的一致笥，用该法测定奶牛血液和乳中白细胞的杀菌功能，结果牛乳中白细胞杀菌功能显著低于血液中的白细胞，这有可能是奶牛乳腺易受感染的一个原因。     

Simultaneous Flow Cytometric Analysis of Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Equine Leukocytes

This paper describes a method for simultaneously measuring phagocytosis and oxidative burst activity in equine peripheral blood leukocytes by flow cytometry. Opsonized propidium iodide-labelled Staphylococcus aureus (PI-Sa) was used to measure the uptake of bacteria by equine phacocytes and the oxidative burst activity by oxidation of dihydrorhodamine 123. The requirements to achieve optimal activity of phagocytosis and oxidative burst are described. The advantage of the simultaneous technique is that it provides both independent and comparative values for phagocytosis and the oxidative burst, for the detection of impaired mechanisms of microbial destruction. Furthermore, the technique allows evaluation of opsonization activity in this context.     

麦洼牦牛初乳和常乳中超氧化物歧化酶活力的研究

研究了麦洼牦牛脱脂乳中超氧化物歧化酶 (SOD)的活力。结果显示 :牦牛初乳 (泌乳第 1～ 7天 )中SOD活力(Nu/mL)分别为 31 4 6 3± 39 5 1、35 5 73± 39 1、36 4 4 9±2 2 1 7、32 4 73± 30 6、31 3 96± 1 8 0 0、31 6 6 5± 1 9 5 1、31 7 5 2± 1 0 6 8,常乳中的活力为 2 92 4 9± 6 96Nu/mL。与常乳相比 ,泌乳第 3天的初乳中SOD活力显著高于常乳 ,其余各天差异不显著。半奶牦牛和犏牛乳中SOD活力分别为 1 89 75± 1 1 71和 1 2 5 6 5± 2 2 9,均极显著低于常乳     

奶牛多形核白细胞凋亡的分子调控与乳腺免疫

多形核白细胞(polymorphonuclear neutrophil leukocytes,PMN)在奶牛乳腺防御病原菌感染中充当首要防线,而PMN的凋亡在解除奶牛乳腺的炎性反应中发挥关键作用。作者综述了PMN凋亡的分子调控及其在奶牛乳腺免疫中的重要作用和意义。     

牛初乳与牛常乳中乳脂肪球膜蛋白质的组成及功能的对比研究

利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)将牛初乳与牛常乳中乳脂肪球膜蛋白质的组成部分进行分离鉴定,发现牛初乳与牛常乳中乳脂肪球膜蛋白质的组成存在较大的差异,且在牛初乳中鉴定出628种乳脂肪球膜蛋白质,牛常乳中鉴定出487种乳脂肪球膜蛋白质.由基因本体(gene ontology,GO)功能注释分析发现,在生物过程中生物调控作用是牛初乳和牛常乳中乳脂肪球膜的主要生物过程.在分子功能上,牛初乳的乳脂肪球膜蛋白质的绑定作用大于牛常乳.在细胞组成上,牛初乳乳脂肪球膜蛋白质参与细胞外区域远远大于牛常乳.通过京都基因与基因组百科全书系统(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)代谢通路分析可知,牛初乳和牛常乳乳脂肪球膜蛋白质参与的代谢途径不同,表明牛初乳在日后的生产加工中更具有利用价值.     

水牛初乳和常乳主要组分的动态变化

试验旨在研究水牛初乳和常乳主要组分的动态变化规律。采用乳品分析仪对摩本杂水牛(摩拉水牛×德宏水牛)初乳和常乳中乳脂、乳糖、乳蛋白、总固形物(TS)和非脂固形物(SNF)等含量进行测定,用SDS-PAGE对乳蛋白各组分进行分离,并利用凝胶成像系统进行扫描定量。结果表明,初乳中乳糖含量随泌乳天数的增加逐渐升高;乳蛋白、总固形物(TS)和非脂固形物(SNF)含量呈下降趋势;初乳中乳脂含量变化不规则,出现小幅波动;蛋白质各组分中乳铁蛋白(LF)、血清白蛋白(SA)、免疫球蛋白(Igs)含量第1天最高,以后开始下降;酪蛋白(CN)在乳蛋白百分比含量中占优势,随着泌乳天数的增加逐渐升高;β-乳球蛋白(β-LG)第1天含量低,第5 和7天达到最高值;α-乳白蛋白(α-LA)第1天最低,第2天急剧上升,以后变化平稳。常乳中大部分组分含量比较稳定,有时有波动,但各天数之间差异不显著。研究结果显示,水牛乳中大部分组分的含量在初乳中变化较大,初乳的营养价值高于常乳。     

Iodine Content in Colostrum and Milk of Cows and Sows

The concentration of total iodine in colostrum and normal milk of cows and sows has been determined using a Technicon Autoanalyzer. In cows as well as in sows a lowering of the level of iodine in milk was observed during the first few days after parturition. At the first sampling within 8 hrs. after parturition the concentration of iodine in colostrum of cows from 2 herds was on average 3.4 and 2.4 μg/100 ml, respectively. Corresponding value for colostrum of the sows was 67 μg/100 ml. Based on informations about the composition of the food and daily food consumption it could be estimated that 0.5–1 and 20–45 % of the daily intake of iodine were secreted per 1 milk or colostrum of cows and sows, respectively. It can be concluded that the mammary gland of the sow has a considerably higher ability to concentrate iodine than that of the cow. Furthermore the concentration mechanism is more efficient immediately after parturition than at later stages of lactation.     

牛初乳与牛常乳中游离氨基酸和不溶性蛋白质氨基酸对比研究

牛乳是生产婴幼儿配方乳粉时首要选择的原料乳,氨基酸是构成牛乳蛋白质的结构单位,按照分布区域的不同,分为游离氨基酸和不溶性蛋白质氨基酸两类。以产后0～7 d的牛初乳和15 d～6 个月的牛常乳为原料,对牛乳中不同结构域的氨基酸种类及含量进行对比分析。结果表明：9 种游离必需氨基酸在牛初乳和牛常乳中均被检测到,分别有8 种和7 种游离非必需氨基酸在牛初乳和牛常乳中被检测到,其中,牛初乳中8 种必需氨基酸、4 种非必需氨基酸含量均显著高于牛常乳（P＜0.05）;在不溶性蛋白质氨基酸中,牛初乳和牛常乳中均含有8 种必需氨基酸和10 种非必需氨基酸,其中,牛初乳中苏氨酸、精氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、丙氨酸含量显著高于牛常乳（P＜0.05）,而牛常乳中赖氨酸含量显著高于牛初乳（P＜0.05）。     

Isolation of Mare's Milk Oligosaccharide Fraction of Colostrum,Transitional, and Mature Phases Promotes In Vitro Oxidative Burst in Murine Macrophages

Present preliminary findings demonstrate in vitro stimulation of splenic lymphocytes of BALB/c mice after exposure to oligosaccharide fractions isolated from mare's milk during colostrum, transitional, and mature lactation periods, which shows immunostimulatory action of oligosaccharide content present in mares' milk. Oligosaccharide fractions caused more pronounced oxidative burst at a much lower concentration (0.1 μg/mL) compared with that shown by levamisole (standard immunostimulant) at a much higher concentration of 10 μg/mL. In this study, it was observed that oligosaccharides fraction of colostrum phase attaining high potency of immunostimulatory property.     

水牛初乳和常乳中五种酶活性的动态变化

对摩本杂水牛(摩拉水牛×德宏水牛)初乳和常乳中AMS、γ-GT、NAGase、ALP以及LP的活性进行测定.结果表明,初乳中5种酶的活性大多显著或极显著高于常乳(P<0.05或P<0.01),而常乳之间差异均不显著(P>0.05).初乳中AMS活性第1、2、3天差异不显著(P>0.05),第1、2天极显著高于第5、7天...     

奶牛初乳与常乳中营养成分和免疫物质的特征

初乳是奶牛产后24 h内的乳汁,为犊牛提供天然免疫和早期生长的能量来源,且初乳在医疗保健领域也具有一定的研究价值。初乳在产后一段时间内的物质成分会发生较大的变化,与常乳形成明显的差异。本文对比分析了初乳和常乳中营养物质、免疫活性物质、生长因子以及酶的含量差异,直观地展现了初乳中不同物质的变化过程,针对性地为初乳和常乳的加工制作提供思路,为特异性地开发初乳资源,提升初乳的利用率给出参考依据。     

基于蛋白质组学技术分析初乳和常乳摄入对初生犊牛肝脏蛋白表达的影响

【目的】试验旨在对犊牛肝脏蛋白进行蛋白质组学分析,筛选与初乳、常乳摄入相关的蛋白。【方法】以经产荷斯坦母牛分娩的9头公犊牛为研究对象,随机分为初乳组(CI)、常乳组(M)和对照组(CT),每组3头。初乳组和常乳组犊牛分别饲喂初乳和常乳,于出生后24 h屠宰;对照组未饲喂初乳或常乳,于出生后2 h屠宰。采用Label-free蛋白组学技术对3组犊牛肝脏的蛋白表达谱进行分析,以Q<0.05为阈值筛选各组间的差异表达蛋白,并进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】在犊牛肝脏中共鉴定到3 901个蛋白,其中在初乳组、常乳组和对照组中分别鉴定到3 521、3 646和3 548个蛋白,有3 202个蛋白在3组中共表达。对差异表达蛋白进行分析显示,初乳组和常乳组犊牛肝脏中共筛选出287个差异表达蛋白,主要参与细胞代谢、应激反应、生长发育和氧化还原等生物过程,显著富集通路为内吞作用、氨基酸代谢和氧化磷酸化;初乳组和对照组犊牛肝脏中共筛选出154个差异表达蛋白,主要参与细胞代谢、单组织过程和肌酸合成等生物过程,显著富集通路为氨基酸代谢、黏着斑和内吞作用等。【结论】饲喂初乳的犊牛肝脏中差异表达...     

水牛初乳和常乳中锌、铁、铜含量的动态变化

 采用火焰原子吸收分光光度法对摩本杂水牛（摩拉水牛×德宏水牛）初乳和常乳中Zn、Fe、Cu等三种微量元素含量进行测定。结果表明,在第1 、2 d的初乳中Zn含量显著高于其余几天的初乳和常乳（P<0.05）,第3 d开始Zn含量接近常乳,在3 d至90 d之间稍有波动,但差异不显著（P>0.05）。Fe和Cu含量随泌乳进行逐渐降低,其在初乳中的含量均高于常乳,常乳之间差异不显著（P>0.05）。其中第1 d初乳中Fe含量显著高于第7 d （P<0.05）,而与其余几天初乳相比差异不显著（P>0.05）,第1、2 d初乳中Fe含量均显著或极显著高于常乳（P<0.05）;第1 d初乳中Cu含量显著高于第3、5 d的初乳（P<0.05）,与第2、7 d相比差异不显著（P>0.05）,第1、2 d初乳中Cu含量极显著高于常乳（P<0.01）。研究显示水牛初乳中Zn、Fe、Cu等三种微量元素的含量大都高于常乳,反映了乳腺在初乳期矿物质的分泌特点。     

猪乳中常规成分、胰鸟素和表皮生长因子浓度的动态变化

选择8头3～4胎、产仔9～13头的健康大长北(大约克×长白×北京黑猪)母猪，对其分娩后35d泌乳期内初乳和常乳中的常规成分、胰岛素和表皮生长因子进行了动态分析。结果表明，母猪刚分娩时其初乳中乳蛋白、总固型物、胰岛素和表皮生长因子的浓度均高于常乳(P<0.05)，乳糖和乳脂则随泌乳期延长而增加，分娩后3d内这种变化显著(P<0.05)，而常乳中则变化不明显。     

基于双向电泳技术研究湖羊初乳和常乳乳蛋白质组差异

试验旨在分析绵羊初乳和常乳乳蛋白质组的差异,揭示绵羊不同泌乳阶段的乳蛋白质组特征。选用6只胎次相同、预产期相近的湖羊母羊,分别采集分娩后第1、3、7天的初乳和第14、28、56天的常乳,每个时间点采集6份奶样并等体积混合,离心弃去乳脂肪,采用双向电泳（2-DE）技术对初乳和常乳的脱脂乳蛋白进行比较分析。结果发现,初乳中乳蛋白含量较高,且随着泌乳期的延伸,乳蛋白含量降低。以第1天乳蛋白2-DE图谱为参照,第3天检测到38个差异蛋白点,其中有20个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第3天图谱中,其余17个蛋白点呈现表达量的差异;第7天检测到35个差异蛋白点,其中有19个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第7天图谱中,其余15个蛋白点呈现表达量的差异;第14天检测到34个差异蛋白点,其中有11个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第14天图谱中,其余22个蛋白点呈现表达量的差异;第28天检测到38个差异蛋白点,其中有28个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第28天图谱中,其余9个蛋白点呈现表达量的差异;第56天检测到36个差异蛋白点,其中有26个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第56天图谱中,其余9个蛋白点呈现表达量的差异。综上,共检测出44个差异表达的蛋白点,其中有8个蛋白点仅存在于第1天图谱中,而这些蛋白主要涉及免疫活性功能。     

In Vitro Effects of Acellular Milk on the Bactericidal Components of Caprine Polymorphonuclear Neutrophils

The effects of acellular milk on the activity of the microbicidal cationic enzymes of the polymorphonuclear cells of goats were studied in an attempt to explain the phenomenon by which PMN functions fail in mastitis. Assays were undertaken on the myeloperoxidase, lysozyme and elastase activities in a polymorphonuclear cell (PMN) lysate, both in the presence and absence of acellular milk from homologous species. There was a significant decrease (p<0.05) in the activity of lysozyme, myeloperoxidase and elastase in the presence of acellular milk. Superoxide and H₂O₂ production following activation of caprine PMNs by lipopolysaccharide (LPS) was significantly reduced (p<0.05) in the presence of acellular milk. Thus, the microbicidal function of PMNs is significantly impaired in the presence of acellular milk and this may contribute to the development of mastitis in dairy animals.     

牛初乳中乳铁蛋白粗提工艺的优化研究

利用盐析和有机溶剂沉淀相结合的方法对牛初乳中的乳铁蛋白进行初步的分离,采用单因素试验和正交试验的方法对影响分离效果的因素进行了试验研究,研究结果表明:用pH值8.5、80%的硫酸铵溶液进行盐析,然后用60%的乙醇浓度进行沉淀,分离的效果较好。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明,乳铁蛋白的纯度大约为48%,分子量大约为78000Da。     

牛初乳IgG对仔猪增重和血液指标的影响

选取10窝1日龄大白仔猪60头,随机分为3组。按不同剂量(0、500mg、1000mg)灌服牛初乳IgG,分别测定不同处理组仔猪日增重、血清总蛋白含量、血清牛IgG浓度,旨在探讨新生仔猪吸收异源IgG能力及异源IgG对仔猪生产性能及机体免疫功能的影响。结果显示,灌服IgG1000mg的仔猪,0～15日龄日增重、5、10日龄血清总蛋白含量显著高于对照组(0)(P<0.05),实验组5日龄血清牛IgG浓度较高,并能有效降低仔猪腹泻头次。     

Effect of Oestrous Cycle on the Oxidative Burst Activity of Blood Polymorphonuclear Leucocytes in Cows

Blood polymorphonuclear leucocyte (PMN) oxidative burst activity, plasma cortisol levels, and the total and differential white blood cells counts (WBC) of six cycled dairy cows were evaluated for a period of 24 days, three times a week; on Mondays, Wednesdays and Fridays. The PMN oxidative burst was indirectly evaluated by flow cytometry, measuring the intracellular oxidation of 2′,7′‐dichlorofluorescein diacetate to 2′,7′ dichlorofluorescein (DCF) by H₂O₂‐production. Results are pre‐sented as the mean fluorescence intensity (MFI) of DCF. Cow’s oestrous cycle was evaluated by following the plasma progesterone levels using a radioimmunoassay method. Levels of cortisol in the plasma were measured using a fluorimetric method. The oxidative burst activity of PMN, represented a maximum value (MFI = 117.6 ± 7.4) during the oestrous period. A fall was then observed, in which a steady state was observed during the lutheinic phase of the oestrous cycle, reaching the minimum value [MFI = 73.2 ± 11.2 (p ≤ 0.01)] on the days +8, +9 and +10. No significant variations were observed in the levels of cortisol, or in total and differential WBC, during the whole period. Nevertheless, as far as cortisol levels were concerned, a trend analogous to that of the oxidative burst activity was observed. Our results demonstrated that the oestrous cycle might influence directly, or indirectly, the immune system of cows, by altering the oxidative burst of PMN.