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猪生殖—呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH—1a株N基因的分子克隆,?… 总被引:3,自引:0,他引:3
根据已发表的PRRSVIAF-exp91株的核酸序列,设计了一对特异性引物,用RT-PCR扩增了PRRSVCH-1a株的N基因,经补平和磷酸化后,克隆到pUC18SmaI位点上,经电泳分析,酶切和PCR鉴定证实后,进行序列测定,序列分析表明CH-1a株与IAF-exp91株(美洲型)N基因核苷酸同一性为93.2%,氨基酸同一性高达96.7%,而与LV株(欧洲株)核苷酸同一性为63%,氨基酸同一性仅 相似文献
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重组和构建了新城疫病毒融合蛋白基因,并对该基因进行了鉴定。结果显示,将NDV Fx基因片段经RT-PCR扩增,插入经EcoRⅠ和SalⅠ酶切克隆载体pUC18及表达载体转化大肠埃希氏菌JM109株。用氨苄青霉不平板法初步筛选克隆,双酶切法,核酸探针,PCR及核苷酸序列分析法鉴定后,表明插入成功且阅读框架正确。 相似文献
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鸡传染性喉气管炎病毒王岗株gC和gD基因的克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
根据已发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)SA-2株的核酸序列,设计了1对引物,以ILTV-中国王岗株DNA为模板,PCR法扩增出1条1.39kb的基因片段,将扩增产物插入到真核表达质粒pCR^TM3-Uni,得到重组质粒pTA-gD,另将克隆到pBluescript SK质料中的gC基因酶毁后,插入到pCR^TM3-Uni载体,得到重组质粒pTA-gC,经电泳分析、酶分、PCR鉴定后,进行序列测 相似文献
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应用反转录聚合酶链式反应检测鸡Th1样淋巴因子mRNA表?… 总被引:7,自引:3,他引:4
应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和限制性酶切分析技术对鸡脾细胞体外受到有丝分裂原ConA刺激的情况下,其Th1样淋巴因子mRNA的表达水平进行了研究。实验结 果表明,ConA诱导培养3个小时的鸡脾细胞表达α-干扰素(ChIFN-α)、γ-干扰素(ChIFN-γ)和白细胞介素-2(ChIL-2)等鸡的Th1样淋巴因子mRNA 。未诱导但培养了3小时的鸡脾细胞可表达ChIFN-α和ChIFN-γmRNA,而未 相似文献
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新城疫病毒F48E9株F基因主要功能区的核苷酸序列分析 总被引:12,自引:2,他引:10
本试验首先以NDVF48E9株的基因组RNA为模板,逆转录合成F基因cDNA第一链,再通过PCR技术扩增F基因的cDNA,然后将其克隆到质粒pUC19中,经分子量比较、酶切分析、PCR等方法证明,我们已经获得了NDVF48E9株F基因的阳性克隆。经初步序列分析,FA段核苷酸序列与参考株(D26/76)序列同源性为89%,FB段同源性为91%。二者的氨基酸序列表明,F48E9株F蛋白裂解位点与其它强毒株裂解位点氨基酸组成相同,即112RRQRR116F117。这两段序列中包含的三个Cys残基和三个潜在的糖基化位点都相当保守。 相似文献
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新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的… 总被引:4,自引:4,他引:4
用SPF鸡胚繁殖新城疫病毒(NDV)F46E9株(强毒)、LaSotaE4株(弱毒)、对病毒进行纯一提RNA。用1对均为27个碱基的引物进行RT-PCR,扩增出了2个毒株的融合蛋白裂解位点(Fc)基因。将Fc基因定向克隆人pUCLaFc,用EcoRI/Sal I双酶切法、PstI单酶切法、PCR法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的LaSotaE4Fc基因定向导入表达载体质粒pBV221,aqt 相似文献
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新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的表达 总被引:4,自引:1,他引:4
用SPF鸡胚繁殖新城疫病毒(NDV)F46E9株(强毒)、LaSotaE4株(弱毒),对病毒进行纯化,抽提RNA。用1对均为27个碱基的引物进行RT-PCR,扩增出了2个毒株的融合蛋白裂解位点(Fc)基因。将Fc基因定向克隆入pUC18的EcoRI和SalⅠ位点之间,获得2个毒株Fc基因克隆pUCF46Fc和pUCLaFc,用EcoRI/SalⅠ双酶切法、PstⅠ单酶切法、PCR法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的LaSotaE4Fc基因定向导入表达载体质粒pBV221,获得重组子pBVLaFc。PCR和内切酶酶切法鉴定表明,Fc插入的位置和方向都正确无误。用E.coliDH5α通过热诱导法进行了表达。用SDS-PAGE和Western-blot法检测了表达产物。结果表明,有1条能够与NDV多抗反应的特异条带,分子量约15700,与预期大小一致,说明是Fc基因的表达产物 相似文献
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新城疫病毒F48E8株核衣壳蛋白基因的克隆及其酶切分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据已发表的新城疫病毒(NDV)核衣壳蛋白(NP)基因序列,设计合成1对长度为32mer的引物。RT-PCR扩增NDVF48E8株、Ulster株、LaSota株的NP基因,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,均呈现1条长1.5kb左右的特异性带。将F48E8株扩增产物克隆入pUC18载体,经限制性内切酶分析证实为NP基因。 相似文献
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PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒 总被引:6,自引:2,他引:4
利用逆转录-PCR(RT-PCR)特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因组中M基因和N基因之间一段核酸片段。以pUC19质粒载体将此片段克隆,用EcoRI和HindⅢ酶切此重组质粒,回收克隆片段后,制成生物素标记的核酸探针。用RT-PCR及生物素核酸探针法分别对IBV,IBDV,ILTV,MDV及NDV进行检测,结果证明该方法为IBV特异性检测方法。对人工感染IBV的SPF鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测,证明本方法能在SPF鸡接毒后1~10d内检出IBV。 相似文献