白皮松成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导研究

[目的]建立白皮松体细胞胚胎发生快速繁殖体系,诱导出胚性愈伤组织。[方法]以白皮松成熟合子胚为外植体,以DCR作为基本培养基,研究不同浓度激素对外植体发育和胚性愈伤组织得率的影响。同时在不同激素浓度下对培养4周的外植体外形以及胚性愈伤组织进行了观察与分析。[结果]培养基中加入2,4-D可以使得外植体生长减慢,并出现愈伤组织,6-BA则使外植体的子叶变长,膨大并玻璃化。当2,4-D浓度为8mg/L、6-BA浓度为2mg/L时,胚性愈伤组织的诱导效果较好,诱导率平均为40.625%,该愈伤组织为白色半透明状,细胞小而细胞质浓,说明高浓度2,4-D和低浓度6-BA有利于白皮松成熟胚的胚性愈伤组织的获得。[结论]合适的激素种类和浓度是诱导白皮松成熟胚产生胚性愈伤组织的关键因素。     

玉米成熟胚愈伤组织诱导及其影响因素研究

以玉米成熟胚为外植体,初步研究了不同基本培养基、不同生长素及其浓度对成熟胚愈伤组织诱导的影响。结果表明,N6培养基对玉米成熟胚愈伤组织的诱导率略高于MS培养基,而且N6培养基上诱导的愈伤组织质量好于MS培养基;培养基中所添加的生长素种类及浓度对成熟胚愈伤组织诱导有较大影响。在MS和N6培养基中添加2,4-D,诱导玉米成熟胚愈伤组织的效果优于添加NAA;中低浓度的NAA（1．O～3．Omg／L）和中高浓度的2,4-D（2．0～5．0mg／L）有利于玉米成熟胚愈伤组织的诱导。     

攸县油茶胚状体发生及其组织学观察

[目的]研究以攸县油茶(Camellia yuhsienensis Hu)成熟子叶为外植体的胚状体发生情况。[方法]以子叶为外植体,接种于MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT培养基上,诱导胚性愈伤组织。胚性愈伤组织块转接至以MS为基本培养基,添加不同浓度6-BA和NAA的激素组合的培养基上诱导产生胚状体。取不同发育阶段的组织块制作石蜡切片,进行组织学观察。[结果]成熟子叶块接种于诱导培养基MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT,15d左右开始出现胚性愈伤组织。胚性愈伤组织转接至培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA时胚状体诱导率最高,为87.78%;无激素培养基也能诱导胚性愈伤组织产生胚状体,但诱导率极低,仅为6.67%。组织学观察表明,胚性细胞由愈伤组织表面及其内部邻近的若干细胞分化而来,经过球形胚、心形胚、子叶形胚等不同发育阶段直至成熟胚状体。[结论]诱导胚性愈伤组织分化为胚状体的最佳培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA。     

天山云杉成熟与未成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导及增殖研究

【目的】研究天山云杉成熟与未成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导及增殖条件技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系奠定了基础。【方法】以带胚乳和不带胚乳的未成熟合子胚及成熟合子胚为外植体,在不同生长调节剂浓度的DCR培养基上进行诱导培养。对不同生长时期合子胚的胚性愈伤组织诱导率和增殖量进行研究。【结果】(1)添加不同生长调节剂(2,4-D、6-BA、TDZ)浓度组合的DCR培养基上诱导成熟合子胚时,20μM 2,4-D和5μM 6-BA为最佳组合浓度,胚性愈伤组织诱导率最高,为55%。(2)对不同采样时间的三种合子胚胚性愈伤组织诱导率进行分析表明,带胚乳的未成熟合子胚(6月)为32.6%,成熟合子胚(9月)为60.6%,不带胚乳的未成熟合子胚(7月)为83.1%,7月为天山云杉胚性愈伤组织诱导的最佳采摘期。(3)胚性愈伤组织在不同5种培养基上增殖培养表明,培养基之间增殖量差异显著(P0.05)。BM2和SH培养基的增殖效果明显优于MSG,1/2DCR,DCR,以SH的综合增殖效果最好,其增殖量为4.55 g,增殖率为600%。(4)5种个体胚性愈伤组织在SH培养基上增殖培养表明,个体之间增殖量变化不明显(P0.05)。【结论】建立了天山云杉胚性愈伤组织发生技术平台,为天山云杉遗传改良种质创新、缩短育种周期奠定了研究基础。     

君子兰胚抢救及叶片再生体系建立研究

选择优良品种君子兰当年授粉未完全成熟果实,剥离胚为外植体,通过胚抢救获得愈伤组织胚,进而诱导出试管苗,通过试管苗叶片诱导愈伤组织,进而诱导不定芽的途径开展研究.以MS为基本培养基,添加不同浓度BA、ZT、2,4-D、NAA,研究不同发育时期胚诱导胚性愈伤组织、胚性愈伤组织诱导芽、丛生芽继代增殖、君子兰叶片基部不定芽诱导...     

葡萄风信子体细胞胚再生体系的建立及抗生素敏感性试验

【目的】建立葡萄风信子体细胞胚再生体系,通过外部形态判断愈伤组织的类型,并探索胚性愈伤组织对头孢霉素和潮霉素的敏感性。【方法】以多年生葡萄风信子‘蓝穗’的盛花期叶片为试验材料,通过正交试验筛选胚性愈伤组织诱导时适宜的植物生长调节剂质量浓度及配比;石蜡切片法观察不同愈伤组织内部的细胞结构,诱导具有胚性的愈伤组织形成体细胞胚,进而获得再生植株;在培养基中加入头孢霉素或潮霉素,观察2种抗生素对胚性愈伤组织生长和体细胞胚发生的影响。【结果】葡萄风信子胚性愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.1mg/L TDZ,在该培养基上诱导率高达100%。石蜡切片观察发现,外观质地紧密、节状或块状的愈伤组织为胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上可诱导形成体细胞胚,在光照条件下体细胞胚伸长并生根,最后形成成熟小鳞茎。头孢霉素质量浓度超过500mg/L时,葡萄风信子胚性愈伤组织的生长和体细胞胚的发生受到强烈抑制;引起胚性愈伤组织褐变的潮霉素临界质量浓度为90mg/L。【结论】建立了葡萄风信子体细胞胚再生体系,90mg/L潮霉素可作为区分转化与非转化葡萄风信子胚性愈伤组织的有效选择压。     

幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油幼胚为材料,研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2,4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响,结果表明,长轴为5~7.9 mm低温处理18 h的幼胚,诱导胚性愈伤组织的效果最好;使用山梨醇(浓度为3%)为碳源、含氮量低的WPM培养基,胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基;幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2,4-D浓度为2.0 mg/L,培养基中附加5.0 mg/L AgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。     

不同接种方式对水稻成熟胚组织培养的影响

以水稻成熟胚为外植体,采用4种不同的接种方式,对7个水稻品种的成熟胚进行了愈伤组织诱导和再分化试验,分析比较不同成熟胚接种方式的愈伤组织诱导率、愈伤组织质量和植株再生率.结果表明:将胚从种子上切下而直接接种在培养基上的接种方式,愈伤组织诱导率最高,愈伤组织质量最好,可以在短时间内获得大量胚性愈伤组织,其愈伤组织可在较短的时间内分化出较多的再生植株,是一种简单、方便、效果好的诱导水稻愈伤组织和再生植株的理想方法.     

超甜玉米自交系成熟胚愈伤组织诱导及再生方法研究

研究超甜玉米自交系1132成熟胚愈伤组织诱导和植株再生频率的影响因素,丰富诱导愈伤组织的外植体来源。以1132成熟胚为材料,通过比较研究蔗糖、脯氨酸、2,4-D等因素对愈伤组织诱导率和分化再生的影响,确定适合1132成熟胚外植体愈伤组织诱导和再生的方法。结果表明,蔗糖浓度40g/L,脯氨酸1.4g/L、2,4-D浓度为4 mg/L的诱导培养基上愈伤组织出现最早,且愈伤组织诱导率最高,达到75%。在继代培养基中2,4-D浓度为2 mg/L,其他相同的条件下,愈伤组织继代性最好,最易产生胚性愈伤组织。植株再生培养通过含60g/L蔗糖的MS培养基培养2~3周,后转入含30g/L蔗糖的MS培养基培养再生植株的方法最好,可实现芽和根的同步再生。利用1132成熟胚诱导产生愈伤组织,并分化再生植株是对幼胚再生体系的有效补充,可以克服玉米基因工程育种研究中幼胚受季节限制的不利条件,丰富甜玉米基因工程育种中外植体的来源。     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及分化

以4个基因型不同的小麦品种成熟胚为外植体进行离体培养,研究不同质量浓度2,4-D对愈伤组织诱导的影响;以陕253为外植体研究不同KT与NAA配比对小麦成熟胚愈伤组织分化的影响.愈伤组织培养基中2,4-D质量浓度为2～4 mg/L时,小麦成熟胚愈伤组织出愈率最高,品质最好.小麦对水分敏感程度与成熟胚愈伤组织的出愈率及品质...     

东方百合胚性愈伤组织诱导和植株再生研究

为建立东方百合元帅、提拔、西伯利亚的高频愈伤体系,以幼叶、花丝、生长点为外植体,进行了不同激素组合的MS固体培养基对胚性愈伤组织诱导及植株再生研究。结果发现,Picloram比2,4-D更有利于胚性愈伤组织的诱导,幼叶、花丝更能有效诱导出胚性愈伤组织和再生植株,生长点的出愈率较低。幼叶在MS＋2mg／L Pieloram培养基,花丝在MS＋2mg／LPicloraIn＋0．1mg／L ABA培养基,生长点在MS＋2mg／LPieloram＋0．03mg／LTDZ培养基上能高效诱导出愈伤组织,来自幼叶的胚性愈伤组织在MS＋1．0mg／LBA＋0．1mg／LKT＋0．1mg／LIBA培养基上能高频再生出芽,来自花丝的胚性愈伤组织在Ms＋1．5mg／LBA＋0．3mg／LKT＋0．2mg／LIBA培养基上能高频再生出芽。愈伤组织生长呈直线生长趋势。     

葡萄愈伤组织诱导及其染色体加倍

以葡萄叶片为外植体,在附加不同浓度2,4-D6、-BA及秋水仙素的MS、B5培养基上,均可诱导出愈伤组织;对颗粒状愈伤组织进行染色体鉴定结果表明:在加有秋水仙素的培养基上诱导的颗粒状愈伤组织均存在广泛的染色体变异,除2n=2x=38和2n=4x=76外,还有一些非整倍体细胞.其变异情况因品种、培养基而异.在加有20 mg/L秋水仙素,并附加1.0 mg/L 2,4-D和0.5 mg/L6-BA的B5培养基上,可获得加倍率高的愈伤组织;但诱导多倍化的愈伤组织均未分化成苗,这可能与愈伤组织染色体变异有关,或与诱导分化成苗的培养基、培养条件等因素有关.     

朱砂根皂苷高产愈伤组织的诱导与筛选

采用比色法测定了以朱砂根(Ardisia crenata)胚、根、茎及叶等4种外植体诱导的愈伤组织中皂苷含量,筛选高皂苷含量的愈伤组织。结果表明,朱砂根的胚和根诱导出来的愈伤组织皂苷含量最高,达到24.07 mg/g和21.25 mg/g,茎和叶诱导的愈伤组织皂苷含量较低,根和茎诱导的愈伤组织生长较好。     

珍稀濒危植物内蒙野丁香的组织培养与植株再生

本文采用植物组织培养方法,探讨内蒙野丁香不同组织器官在离体培养条件下被诱导形成愈伤组织,及进一步分化形成再生植株的过程和条件,结果表明:不同外植体的诱导率是茎>叶>根。激素种类及其浓度是器官脱分化与植株再生的决定因素,诱导愈伤组织的最适培养基为MS 2mg/L 6-BA 10mg/L IAA;芽分化诱导的最适培养基为MS 0.6mg/L 6-BA 5mg/L IAA;生根的最适培养基为MS 0.01mg/L NAA。     

小麦抗赤霉病杂种的花培研究

利用MS培养基或N6培养基,添加适当的植物激素与有机成分,对非小偃血统的普通小麦抗赤霉病杂种材料进行组织培养,获得花粉植株。用花药作外植体进行离体培养,有愈伤组织形成,有些杂种材料花药诱导成愈伤组织的频率较高。因此,通过花药培养途经,以缩短杂种性状稳定的年限,加速小麦抗赤霉病高产品种的选育进程是可能的。     

黑莓叶片组织培养及植株再生的初步研究

以美国黑树莓叶片作为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA、NAA或IAA进行愈伤组织诱导及植株再生试验.结果表明:树莓叶片外植体在培养基MS+6-BA 2.0～ 4.0 mg/L+NAA(IAA)0.01～0.5 mg/L都能不同程度地形成愈伤组织 ,但以MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L和MS+6-BA 4.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L愈伤组织的诱导率最高,诱导率可达100%;所试验的各种不定芽分化培养基,都能不同程度地诱导愈伤组织分化出不定芽,在添加6-BA 2.0 mg/L和NAA 0.01 mg/L的MS培养基上,愈伤组织分化不定芽的比例最高,达49.7%的;所产生的不定芽在1/2 MS+NAA 0.1 mg/L的培养基上的生根率可达89.3%.     

亚麻愈伤组织、不定根及不定芽的超微结构研究

试验通过扫描电镜对亚麻不同类型的愈伤组织、不定根和不定芽进行了超微结构观察。结果表明,以子叶或者下胚轴为外植体诱导的初始愈伤组织表面都较质密,细胞之间排列紧密没有空隙;胚性愈伤组织表面较光滑,细胞形状较规则,细胞形成团粒结构,形成团粒的细胞之间结合紧密,团粒与团粒之间结合松散,可观察到大的空隙。非胚性和褐化愈伤组织细胞形状不规则体积较大,表面形状不规则,有较多的覆盖物。不定根和不定芽表面有表皮毛。     

有机添加物对小麦成熟胚愈伤组织分化特性的影响

为了提高小麦成熟胚愈伤组织的分化率,以7个小麦品种(系)为试材探究不同质量浓度谷氨酰胺、天门冬酰胺及维生素B1对小麦成熟胚愈伤组织分化的影响。结果显示,谷氨酰胺和天门冬酰胺对小麦成熟胚愈伤组织的分化均有正向效应,低质量浓度的维生素B1可有效促进愈伤组织的分化,高质量浓度则抑制分化。促进效应从高到低依次为:天门冬酰胺、谷氨酰胺、维生素B1,最优组合中添加的质量浓度分别为:谷氨酰胺200mg/L、天门冬酰胺250mg/L、维生素B15mg/L。因此,在小麦成熟胚愈伤诱导培养基中添加适量的谷氨酰胺,天门冬酰胺及维生素B1可以更好地促进愈伤组织的分化。     

3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因的克隆与分析

【目的】克隆3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因,分析其在不同条件下的表达特性;构建植物表达载体并转化烟草,对转基因烟草的耐盐性进行初步鉴定。【方法】根据已获得的cDNA序列设计引物,扩增MsERF5、MsERF8和MsERF11的DNA序列,并分析基因结构;利用半定量RT-PCR技术分析其组织表达特异性和胁迫条件下的表达特性;通过农杆菌介导的方法转化烟草,鉴定盐胁迫条件下转基因烟草的表型和生理生化特性,初步验证其功能。【结果】MsERF5、MsERF8和MsERF11都不包含内含子。MsERF5在根、叶和花蕾中的表达量高于茎和花;MsERF8在根和叶中的表达量高于茎、花蕾和花;MsERF11在叶中的表达量最高;3个基因都能被多种非生物胁迫（盐、干旱、铝）和激素（脱落酸、赤霉素、乙烯利、水杨酸和茉莉酸甲酯）诱导,但表达模式不同。在盐浓度为200 mmol•L-1的筛选培养基上只有导入目的基因的愈伤组织能产生不定芽,250 mmol•L-1 NaCl处理再生植株10 d,转基因植株和野生型植株叶片的电导率和可溶性糖含量均呈现上升趋势,但野生型植株叶片的电导率显著高于转基因植株,可溶性糖含量则显著低于转基因植株（P＜0.05）;转基因植株和野生型植株叶片的叶绿素含量均呈现下降趋势,野生型植株叶片叶绿素含量显著低于转基因植株（P＜0.05）;盐胁迫条件下,转化不同基因的再生植株的电导率、叶绿素和可溶性糖含量没有显著差异（P＞0.05）。【结论】3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因都不包含内含子,其表达具有组织特异性,都能被多种非生物胁迫和激素诱导,能够使烟草愈伤组织在含盐培养基上形成不定芽并最终产生转基因植株,且转基因植株的耐盐性高于野生型植株。