转基因动物细胞中外源基因整合位点的分析

旨在通过测定转基因动物中外源基因在宿主染色体上的整合位点来阐述外源基因的整合机制及对该过程中出现的有关问题进行讨论。本研究以MYF6(Myogenic factor 6)转基因小鼠及FAT-1转基因牛为试验材料,采用TAIL-PCR(热不对称交互式PCR)、hiT AIL-PCR(高效热不对称交互式PCR)及本试验室改进的hiT AIL-PCR法,对转基因动物进行了外源基因的整合位点的检测及测序分析。本研究检测到3个MYF6转基因小鼠和一个FAT-1转基因牛的外源基因插入到染色体上的片段,还获得了大量的未能整合到染色体上的PCR片段。通过对以上片段的测序分析,我们发现重组质粒并不一定是在酶切位点断裂,重组质粒可以发生随机断裂,首尾相连等,外源基因整合如宿主染色体,可以同源重组的方式进行整合,也可以进行随机插入。同时,发现并分析了在转基因动物检测中可能存在的问题。通过对外源基因在转基因动物体内整合位点的分析,能够明确转基因动物的遗传背景,能够为转基因动物的生产提供帮助。     

转基因动物关键技术及其进展

转基因动物是指体内基因组中稳定地整合有外源性基因的动物。通过基因重组的各种方法可人为的改造动物基因组，并在动物活体水平上研究有关基因的结构和功能，是一个四维时空的研究体系，为从分子到个体多层次、多方位的研究基因提供了新的方法和思路。这种突出的优越性使转基因动物具有广泛的应用潜能，其中转基因小鼠已大量地应用于基础研究中的各个领域；转基因大动物则在应用研究中取得了显著的进展。１原核显微注射法该法由美国人Gordon发明，是最可靠，也是使用最广泛的动物转基因方法。其基本原理是：通过显微操作仪将外源基因直接…     

转基因技术的应用

转基因动物技术就是将外源基因或体外重组的基因结构转移到动物受精卵内组成一个新的融合基因，使其在动物体内整合和表达，产生具有新的遗传特征或性状的动物，并能将新的遗传信息稳定遗传给后代，获得转基因系或转基因群     

猪基因转移技术的新进展

前言过去十年里,随着重组 DNA 技术的发展,科学家们已能分离单一基因,分析和修饰核苷酸的结构,复制分离到的基因,并将外源基因转移到动物的基因组中。这种对遗传物质的直接操作被称作“遗传工程”。“转基因动物”则是指基因组中含有重组 DNA 的动物1983年,作者与 Ralph 致力于生产转基因猪的研究,并获得了首例转基因猪(Ham-mer 等,1985)。本文扼要介绍转基因猪生产技术的研究现状。1 转移猪基因的方法生产转基因猪的微注射过程与小鼠相似,只是猪卵母细胞不透明,其原核很难辨认。我们发现,将猪卵母细胞以10000～     

我国兽用转基因微生物产品的安全评价

转基因生物是指通过基因操作技术对遗传物质（DNA）进行重组、修饰,从而改变基因组构成的动物、植物、微生物。动物用转基因微生物产品主要是指经过人工修饰基因的疫苗、诊断试剂和饲料添加微生物。转基因技术打破了异种微生物之间天然杂交的屏障,实现了微生物间的基因转移,获得了新的生物学性状。基因重组技术为人类有效的利用微生物的遗传特性,     

转基因技术在动物饲养上的应用

动物转基因技术是20世纪80年代初发展起来，主要就是将外源基因或体外重组的基因结构转移到动物受精卵内组成新的融合基因。使其在动物体内整合和表达，产生具有新的遗传特征或性状的动物，并能将新的遗传信息稳定遗传给后代，获得转基因系或转基因群体，或者将外源基因在特定调控元件作用下在某些宿主组织中进行独立的复制，并在一定时间内表达外源蛋白。前者是永久性地表达，又称为整合表达，这种表达可以遗传，对改变动物的性状意义重大。后者是暂时性表达，不能遗传给后代，只在当代表达，这种表达为动物疾病进行基因治疗和基因预防奠定了理论基础。     

动物转基因技术的研究应用进展

动物转基因技术的研究应用进展李兴光山东省农科院畜牧兽医研究所（２５０１００）动物转基因技术就是将外源基因或体外重组的基因结构，经体外增殖和修饰转移到动物受精卵内，或将部分内源基因剪除或抑制，使其在动物体内得以整合和表达，以产生具有新遗传特征或性状的转...     

转基因技术在畜牧生产中的应用

80年代早期 ,产生了将外源基因显微注射到受精卵 ,产生携带外源基因的动物品系新技术 ,这种携带有外源基因的动物称为“转基因动物”。随着现代分子生物学技术的发展 ,相继出现了 DNA体外重组、某些重要生产性状基因的分离、基因融合、胚胎体外操作等转基因相关技术 ,并在畜牧生产中得到了广泛的应用。目前已报道的转基因动物有线虫、果蝇、海胆、两栖动物、鱼类、小鼠、猪、牛、羊、鸡、兔等。本文就目前转基因的方法及该技术在提高畜禽生产性能、抗病育种、疾病治疗等方面的应用作一论述。1　外源基因转移方法1 .1　显微注射法　 Jaenis…     

基因工程在饲料和畜牧生产上的应用和展望

一、基因工程在畜牧生产上的应用基因重组技术是从1972年贝鲁格把癌病毒SV_(40)的基因引入到大肠杆菌的质粒中开始的。由于携带这种癌基因的大肠杆菌在自然界中可能造成人或动物致癌的危险,致使这项研究曾     

转基因技术在畜牧业中的应用

1973年美国首先成功地将基因在体外 重组并通过质粒转入细菌内,进行无性繁 殖,基因工程从此应运而生.基因工程或称 基因重组技术,是将不同生物的基因在体外 人工剪切组合并和质粒、噬菌体、病毒的载 体DNA连接,然后转入微生物或细胞内进 行扩增,并使转入的基因在细胞内表达,产 生所需的蛋白质.一些转基因技术已经在 家畜和家禽中得到应用.例如,猪体导入人 生长激素基因,使猪膘厚减少,瘦肉率提高; 在转基因猪中表达了人的血红蛋白,在转基 因山羊奶中,获得堪称血友病人救星的药物 蛋白,转基因鸡的生长激素显著提高;将人 的基因导入产蛋鸡,其输卵管中合成了人类 促红细胞生成素,等等.不久的将来,转基 因技术将在动物疾病控制、品种改良和药物 开发方面发挥举足轻重的作用. (晓红辑)     

转基因在动物生产中的应用

人们一直期望畜产品和人类健康产品能快速得到提高,DNA重组技术和转基因的出现使得在不同物种间,甚至不同系统发育领域间的这一提高在很大范围内变为可能。如今,我们能在细菌中生产人类胰岛素,在牛奶中获得人类凝结因子。转基因、动物克隆和动物多产技术的进步在一定程度上已经实现了在动物转基因领域的期望。作者回顾了当前动物转基因乳、肉和转基因抗病动物的研究近况,并讨论了一些由转基因技术应用而引发的生物伦理学和商业性问题。     

我国转基因食品的发展现状

1.转基因食品 转基因技术主要是指利用重组DNA技术和物理、化学及生物学等方法把重组DNA分子导入生物体的技术。应用转基因技术构建的生物称为转基因生物,包括转基因植物、转基因动物和转基因微生物。因此,通俗地讲,转基因食品就是利用转基因生物生产和加工的食品。与转基因植物、动物和微生物相适应,转基因食品也可以进一步分为转基因植物食品、动物食品     

转基因动物制备方法

动物转基因技术是通过将外源性目的基因整合到动物染色体上,使其在体内整合和表达,获得表达外源基因动物的技术。该技术广泛应用于转基因动物育种、基因功能研究、药用蛋白生产和器官移植等方面。其主要方法包括逆转录病毒感染法、显微注射法、体细胞核移植法、胚胎干细胞介导法、精子介导法等。本文旨在对动物转基因的各种技术和方法进行综述,甄别各自的优缺点,为科研工作者提供一定的参考。     

转基因动物技术及其研究进展

转基因动物技术是在基因工程、细胞工程和胚胎工程的基础上发展起来的,具有更广阔的应用前景,能应用于畜牧业、渔业和医疗领域中。综述了转基因动物技术概念、转基因动物技术研究现状,转基因动物技术导入外源基因的方法和步骤、转基因动物技术的应用以及转基因动物研究与应用存在的问题,并且对转基因动物技术在动物新品种培育、医学疾病模型研究和生物制药等领域的应用前景进行了展望。     

动物乳腺生物反应器的研究、发展及产业化

动物乳腺生物反应器(mammary gland bioreactor),又称动物个体乳腺表达系统,它属于转基因动物的范畴,其核心内容是通过各种转基因技术,将乳腺组织特异性启动子驱动的外源基因,在动物乳腺组织高效表达,在乳汁中生产目的产品。它是20世纪90年代初才出现的生物技术,通过回收奶就可以提取有重要价值的生物活性蛋白。在一般情况下,这种特异性表达方式更安全、可靠。本文主要简单介绍动物乳腺生物反应器的一些基本情况,以及我国的研究和产业化发展情况。1动物乳腺生物反应器的基本情况1.1定义乳腺生物反应器一般指用重组DNA技术和转基因技术,将…     

转基因昆虫研究

所谓转基因是指基因的转移 ,即用各种方法插入生物体自身不具有的基因 ,由于染色体遗传物质的交换而使其表现形态得以改变。通过转基因获得的生物称为转基因生物 ,即转基因植物与转基因动物。进而所谓转基因昆虫 ,是指在昆虫染色体上插入了别的生物的基因的重组昆虫。利用病毒导入外源遗传物质时 ,被重组的基因存在于病毒染色体上 ,于是病毒仅只感染生物体 (也称宿主 ) ,而不将重组基因传递给它的下一代。但是转基因昆虫则在染色体上进行了遗传物质的重组 ,一旦基因导入后 ,则可在后代中传递 ,与昆虫自身所具有的基因在后代中的表达完全相同…     

日本结缕草ZjADH基因对拟南芥的转化及其耐寒性分析

为研究日本结缕草ZjADH基因是否与植物耐寒有关,通过DNA重组技术将ZjADH基因插入3302Y质粒中,成功构建了植物表达载体3302Y-ZjADH,通过农杆菌介导的花序侵染法获得具有草铵膦抗性的转基因植株。PCR和qRT-PCR鉴定表明,目的基因已整合入拟南芥基因组中并能够成功表达。对野生型和转基因拟南芥进行低温(4 ℃)处理和耐寒分析,结果表明,转基因拟南芥对低温胁迫的抵抗能力明显高于未转基因植株。在低温胁迫下,转基因拟南芥中脯氨酸的含量显著高于野生型植株,而活性氧的积累明显低于野生型植株;对转基因植物抗性相关基因的表达分析显示:转基因植物体内SOD、APX及LEA基因的表达水平明显高于未转基因植株,说明ZjADH基因可能通过提高转基因植物体内SOD、APX及LEA的表达活性来增强植物的抗寒性。综上所述,日本结缕草ZjADH基因的表达能够提高转基因植株的耐寒性,对ZjADH基因的研究也为进一步获得抗寒转基因日本结缕草植株奠定理论依据。     

转基因羊的制备方法研究进展

我国正在实施的转基因生物新品种培育科技重大专项,为转基因羊的培育提供了新机遇.转基因育种,通过转基因技术将外源基因通过载体导入受体生物体,使其在动物体内整合与表达,可以避开物种间杂交不育的生殖隔离,在较短时期内培育出常规方法不能或难以育成具有特别优良性状的动物品种或种群.本文对转基因羊的制作方法加以简单综述.     

猪11β-HSD1真核过表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的表达

11β-羟类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)可使无生物活性的皮质酮催化为有活性的皮质醇,本试验利用长白猪肝脏组织提取的RNA反转录出11β-HSD1基因的cDNA,通过反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和DNA重组技术,将11β-HSD1基因构建到pcDNA3.1真核表达载体上,构建了11β-HSD1-pcDNA重组质粒。通过PCR扩增、酶切电泳和测序分析的方法对重组的质粒进行了鉴定,并将其转染了Hepa1-6细胞,通过RT-PCR检测了其过表达强度。试验结果表明,成功构建了猪11β-HSD1-pcDNA真核过表达载体,为转基因动物的研究奠定了基础。     

创新生物科技对猪营养和猪肉生产效率改进的推动作用

随着世界人口的不断增长和生活水平的提高,在现有资源不断减少的同时,人们对优质猪肉蛋白质的需求却大幅度增加。除了通过改善日粮的营养水平及组成,还需要依靠生物技术培育出具有优良性状的猪。生物技术可以归类为克隆具有相同遗传组成的动物(通过体细胞核移植,胚胎细胞核移植或胚胎胚吐)或用基因工程(通过重组DNA技术和基因编辑)来产生转基因动物或微生物。克隆有助于保护物种和品种,特别是那些具有良好生物和经济特性的物种和品种。重组DNA技术将来自多个来源的遗传物质结合到单个细胞中以产生蛋白质,并且是基因(基因组)编辑的基础。基因编辑涉及基因的敲除、插入或沉默,以产生具有重要生产性状的转基因猪;或对抗生素敏感的微生物。目前的基因编辑工具包括使用锌指核酸内切酶(ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(TAL?EN),或基因组定点编辑技术[成簇规律间隔短回文重复-Cas9蛋白(CRISPR/Cas9)]。根据细胞类型和质粒,通过转染(基于脂质的试剂、电穿孔、核转染或显微注射)或噬菌体将ZFN、TALEN或CRISPR/Cas9组分递送到靶细胞中。与ZFN和TALEN编辑相比,CRISPR/Cas9提供更高的效率,更易于设计,以及更高的基因工程灵活性。迄今为止,已经产生转基因猪可以表达牛生长激素、细菌植酸酶、真菌糖酶、植物和秀丽隐杆线虫脂肪酸去饱和酶,以及解偶联蛋白-1;缺乏肌肉生长抑制素,α-1,3-半乳糖基转移酶或CD163[猪生殖和呼吸综合征病毒("蓝耳病")的细胞受体]。生物技术有望在未来能提高猪生产效率和开发抗生素替代品。