家蚕卵线粒体DNA限制性内切酶长度多态性研究

利用29种限制性内切酶对34个不同品种家蚕卵mt DNA进行酶切分析,发现一化、二化品种与多化品种的HaeⅢ酶切图谱有差异,但不同的地理品种间没有出现酶切多态性现象。另外,一些家蚕品种的受精卵和非受精卵mt DNA在Bgl I和Pst I酶切焉,呈现不同的酶切带型。同时,绘制了较精确的家蚕mt DNA限制性内切酶酶切图谱。     

瓯江彩鲤线粒体DNA的限制性内切酶分析

用 13种限制性内切酶对瓯江彩鲤的线粒体DNA(mtDNA)进行RFLP分析 ,结果表明 :(1)共产生 18种限制性态型 ,其中 5种酶产生限制性片段长度多态性 (RFLPs) ,归结为 5种基因单倍型。 (2 )瓯江彩鲤mtDNA大小为 16 .6 0± 0 .15kb ,单倍型间的基因多样性指数和群体核苷酸多样性指数分别为 0 .75 17、0 .0 2 86 ,遗传多样性较丰富     

瓯江彩鲤线粒体DNA的限制性内切酶分析

用 13种限制性内切酶对瓯江彩鲤的线粒体DNA(mtDNA)进行RFLP分析 ,结果表明 :(1)共产生 18种限制性态型 ,其中 5种酶产生限制性片段长度多态性 (RFLPs) ,归结为 5种基因单倍型。 (2 )瓯江彩鲤mtDNA大小为 16 .6 0± 0 .15kb ,单倍型间的基因多样性指数和群体核苷酸多样性指数分别为 0 .75 17、0 .0 2 86 ,遗传多样性较丰富     

柞蚕核多角体病毒基因工程载体的研究 Ⅰ柞蚕核多角体病毒DNA限制性内切酶图谱

本文研究了柞蚕核多角体病毒的分离、纯化、纯化后的病毒DNA经限制性内切酶Pat Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ、XhoⅠ、SalⅠ、EcoRⅠ及EcoRⅠ+BamHⅠ等酶解后电泳分别形成31、26、6、15、24、5及7条区带。据内切酶图谱测算柞蚕核多角体病毒的分子量为75.16±2.3×10~6道尔顿。并比较了柞蚕、蓖麻蚕及家蚕等核多角体病毒的亲缘关系。     

毛细管电泳快速检测限制性内切酶酶切产物

[目的]建立1种利用毛细管电泳快速、高效检测限制性内切酶酶切产物的方法。[方法]以甲基纤维素(MC)为筛分介质,用PBR322/BsuRⅠDNA Marker为试验对象,研究筛分介质浓度、pH值、毛细管柱温度和电场强度对毛细管电泳法分离小片段双链DNA的影响,寻求最佳电泳条件,并将此方法用于检测MspⅠ内切酶的酶切产物。[结果]MC浓度对双链小片段DNA的分离度有较大影响。随MC溶液浓度的增加,分离度呈先增后减的趋势。毛细管电泳的最佳条件为:MC浓度为2.0%,pH值为8.0,毛细管柱温度15℃,电场强度为275 V/cm。在此条件下,对MspⅠ内切酶的酶切产物进行检测,在20 min内检测到3个酶切片段。[结论]与平板凝胶电泳相比,运用毛细管电泳检测小片段限制性内切酶酶切产物更高效。     

分月扇舟蛾颗粒体病毒的形态和限制性内切酶图谱分析

将从自然罹死的分月扇舟蛾Closteraanastomosis (L .)幼虫中分离到的一种颗粒体病毒 (简称CaL GV)置于电子显微镜下观察 ,其形态为椭圆形 ,大小为 (30 4 .5 3× 139.0 9)nm ;经碱解病毒粒子为杆状 ,大小为(2 4 6 .2 1× 6 1.36 )nm ;经酚∶氯仿∶异戊醇 (2 5∶2 4∶1)抽提 ,氯仿∶异戊醇 (2 4∶1)洗涤 ,2倍体积无水乙醇沉淀 ,抽提的核酸经EcoRⅠ ,HindⅢ ,NcoⅠ ,PstⅠ限制型内切酶酶解 ,1×TAE缓冲液 ,0 .8%琼脂糖凝胶电泳 ,获得CaLGV核酸酶解图谱。以λDNA HindⅢ酶解片段在凝胶中的迁移率与相应片段分子量的对数值做标准曲线 ,求得CaLGV平均分子量为 10 0 .4 8kb ,核酸含量为OD2 60 /OD2 80 =1.89。     

德国骑乘马线粒体DNA的限制性酶分析

通过５种限制性内切酶获得了１３匹德国骑乘马线粒体ＤＮＡ的切割图谱。结果发现，限制性消化产生了１（ＥｃｏＲ１），３（ＢｇＩ Ⅱ），４（ＢａｍＨⅠ）或５个（ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ）限制性片段，并确定了所有片断的分子大小。ｍｔＤＮＡ总的大小平均为（１６．４８±０．１０）ｋｂ，除ＢａｍＨⅠ外，ｍｔＤＮＡ的限制性切点对于所有的个体是完全一致的。用ＢａｍＨⅠ检测到ｍｔＤＮＡ的多态性，通过带谱分析推断，德国骑乘     

一株鸭瘟病毒的分离与鉴定

从湖北省武汉市某种鸭场送检的死亡鸭肝脏中分离到1株病毒,结合流行病学调查,剖检病理变化特征初步诊断为鸭瘟病毒感染。根据Gen Bank上公布的鸭瘟病毒UL6基因序列设计一对引物,提取病毒核酸DNA进行PCR扩增,得到大小约为416 bp的目的片段。测序结果表明与Gen Bank上公布的鸭瘟病毒UL6基因的序列相似性达到99%。鸭胚感染试验表明,感染的鸭胚在第四天开始死亡,并出现典型的鸭瘟病毒感染症状。上述结果表明,该种鸭场种鸭死亡是由鸭瘟病毒所引起的。     

鸭瘟病毒的分离与鉴定

用9日龄鸭胚从送检病死鸭中分离出疑似鸭瘟病毒.经测定,分离的病毒对氯仿敏感,属DNA病毒;60℃以上的温度作用1h后,病毒的感染力完全破坏;pH值为3.0、4.0、5.0、6.0、10.0、11.0的条件可使分离病毒死亡;动物回归试验,可使四川麻鸭96h后陆续死亡.鉴定结果为鸭瘟病毒.     

茶毛虫核型多角体病毒基因组酶切分析及质粒文库的构建

应用限制性内切酶图谱分析法,估算茶毛虫核型多角体病毒基因组大小为１３１．０９ｋｂ;通过随机克隆,将ＥｐＮＰＶ基因组８条ＢａｍＨ Ｉ酶切片段中的６条,１３条Ｐｓｔ Ｉ酶切片段中的７条,２６条ＥｃｏＲ Ｉ酶切片段中的７条,２１条ＨｉｎｄⅢ酶切片段中的７条,１４条Ｘｂａ Ｉ酶切片段中的９条分别克隆至载体ＰＴＺ１９Ｒ,构建了ＥｐＮＰＶ基因组的部分质粒文库。     

小鹅瘟的研究——弱毒在雏鹅和成年鹅体内分布和排泄

本文首次报道了将小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）弱毒株注射鹅（成年鹅和雏鹅）后，用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测了不同时间病毒在鹅体各组织器官的分布和由粪便排出的情况，以及同群饲养但不注射ＧＰＶ的雏鹅和成年鹅感染ＧＰＶ弱毒的情况。实验结果表明，ＧＰＶ弱毒经肌肉注射到１日龄雏鹅体内后８小时即可在心血中检测到ＧＰＶ的存在，ＧＰＶ弱毒经肌肉注射到成年鹅体内后８小时即可在心血中检测ＧＰＶ的存在；弱毒注射到雏鹅体内后用ＤｏｔＥＬＩＳＡ检测到ＧＰＶ的时间顺序是：心、肝、脾、肺、肾，而胸肌和脑未检测到ＧＰＶ弱毒的存在，而同居感染雏鹅各个组织、器官未检测ＧＰＶ的存在；弱毒注射到成年鹅体内后检测到ＧＰＶ的时间顺序均为：心、肝、肾、脾、肺，同样胸肌和脑均未检测到ＧＰＶ的存在，而同居成年鹅的各个组织、器官未检测到ＧＰＶ的存在。为临床上更好地应用ＧＰ弱毒疫苗预防ＧＰ提供了理论依据。     

红莲型水稻不育系与保持系线粒体DNA酶切分析

为研究水稻细胞质雄性不育的分子基础,我们提取纯化了红莲型水稻丛广４１Ａ 和丛广４１Ｂ 的线粒体ＤＮＡ,采用限制性内切酶酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ） 方法比较了红莲型不育系和保持系线粒体ＤＮＡ酶切图谱,发现两者之间存在一定的差异,部分支持了细胞质雄性不育与线粒体ＤＮＡ 有关的结论     

苹果潜隐病毒的研究——Ⅱ.苹果茎沟槽病毒对苹果生理生化的影响

用金冠、富士二品种幼苗接种茎沟槽病毒(SGV)后,分期测定蛋白质、核酸、DNA、总氮、氨基酸、可溶性糖、铁和锌含量。结果表明:受SGV侵染的植株,核酸、蛋白质含量下降;DNA、总氮、游离氨基酸含量增加;铁含量增加,锌含量减少,可溶性糖含量增加。     

应用~(32)P 标记DNA探针检测伪狂犬病病毒的研究

本文报道建立了一种以~(32)P 标记的 PRV 全基因组 DNA 和重组质粒PSAG1-19DNA 作为探针,检测感染培养细胞中 PRV-DNA 的斑点杂交法。两种探针均能检测10Pg 的 PRVNDA,而与正常细胞抽提物无同源关系,具有较高的灵敏度和特异性。应用了一种快速、简便的 PRV DNA 抽提法,简化了样品制备的程序,提高了检测的可靠性。比较研究了杂交法中的一些重要条件,包括探针的选用,样品 DNA 的处埋,滤膜的选用等,为检测 PRV 提供了一种灵敏、可靠的方法。     

木薯天蛾颗粒体病毒某些生化特性——病毒DNA限制性内切酶解及结构多肽分析

本文采用限制性内切酶,分析木薯天蛾颗粒体病毒(Erinnyis ello Granulosis Virus简称EeGV)的DNA。同时,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE),对病毒包涵体蛋白质和病毒粒子结构多肽进行分析。结果表明,EeGV基因组的分子量为89.82 Kbp(硷基对);包涵体蛋白只有一条带,其分子量为31.0KDa(道尔顿);病毒粒子至少有18种结构多肽,其分子量在14.00～205.00 KDa范围之间,其中,有6条带明显地不同于Piris rapae GV和Trichoplusia ni GV;经EcoR_1,Hind Ⅲ,Kpnl酶解的EeGV DNA片段数目和分子量都明显不同于PrGV和TnGV的DNA片段。     

产蛋下降综合症H_（91）病毒基因组DNA的酶切分析

从发病鸡群中分离的产蛋下降综合症病毒（ＥＤＳ＿（－７６））Ｈ＿（９１）株接种鹅胚收获的尿囊液，用氯化铯密度梯度离心等方法纯化了ＥＤＳ病毒。电镜下观察到病毒无囊膜，大小为７０～８５ｎｍ。从纯化的病毒悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现一条分子量为３４ｋｂ、背景清晰的核酸带。用６种限制性内切酶对其基因组ＤＮＡ进行了酶切分析，各种酶消化分别产生４，４，９，９，１１和３条片段。将此结果与ＥＤＳ标准株ＡＶ＿（－１２７）株基因组ＤＮＡ由相同的内切酶消化的结果进行比较发现，由ＨｉｎｄⅢ和ＳｍａⅠ消化２个病毒基因组ＤＮＡ产生的片段数及大小有些差异。     

酶联免疫吸附试验检测鸭瘟抗体的研究和应用

应用提纯的鸭瘟病毒作为包被抗原，建立了用于检测鸭瘟抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）间接法。试验结果表明，该法特异性高（与鸭病毒性肝炎等１３种病的阳性血清不发生交叉反应），与血清中和试验的符合率为１００％但其敏感性比血清中和试验至少要高１０００倍，且重复性好，结果可靠，用于大批量样品的检测大约经６小时即可获得结果，是一种适合于血清流行病学调查、进出口鸭对鸭瘟的检疫和对鸭群进行免疫抗体水平检测的敏感、快速、准确性高、特异性强、重复性好且简便实用的方法。