脂肪细胞因子脂联素与围产期奶牛脂肪动员关系

选择健康奶牛和自然发生酮病奶牛,应用荧光定量RT-PCR方法,观测健康奶牛围产期间及酮病牛脂联素(ADPN)与激素敏感脂肪酶(HSL)表达的规律。结果表明,在健康奶牛的围产期,脂肪组织ADPN mRNA和HSL mRNA变动趋势相同且呈正相关,与机体能量代谢状态一致。酮病牛脂肪组织HSL mRNA的表达低于产后健康奶牛,但ADPN mRNA却极显著地高于健康奶牛产后各时段(P<0.01)。     

健康奶牛围产期脂肪组织ADPN mRNA和HSLmRNA丰度

为探讨脂联素(ADPN)与激素敏感脂肪酶(HSL)对围产期奶牛脂肪动员的影响及其相互关系,随机选取围产期健康奶牛10头,分别于产前28天、产前14天、产后1天、产后14天和产后28天,应用荧光定量RT-PCR法检测其脂肪组织ADPN mRNA和HSL mRNA丰度。结果表明:在围产期,随着分娩日龄的临近,其脂肪组织的HSL mRNA水平随着ADPN mRNA丰度的降低而下降,产后则随其升高而上升,初步推测脂联素可能是通过调控脂肪HSL mRNA的表达和分泌来调节围产期奶牛脂肪的。     

葡萄糖对体外培养的牛脂肪细胞HSL mRNA和ADPN mRNA丰度的影响

在体外牛脂肪细胞培养介质中分别添加0,5,10,15,20,25 mmol/L等不同梯度的葡萄糖,各浓度组均设置3个重复,应用荧光定量PCR技术,观测不同浓度的葡萄糖对体外单层培养的牛脂肪细胞脂联素（ADPN）mRNA与甘油三酯脂肪酶（HSL）mRNA丰度的影响。结果表明,葡萄糖可抑制牛脂肪细胞ADPN mRNA的表达,并促进HSL mRNA的表达。     

NEFA和BHBA对体外培养的脂肪细胞HSL、ADPN mRNA表达的影响

在体外培养的牛脂肪组织和脂肪细胞中,分别添加5个浓度梯度的NEFA和BHBA,均设3个重复,通过荧光定量PCR技术,观测不同浓度的NEFA和BHBA对牛脂肪细胞ADPN mRNA与HSL mRNA丰度的影响。结果表明:NEFA在一定浓度范围内(0.2~0.8 nmol/L)对ADPN mRNA表达有显著促进作用并呈剂量依赖性,而高浓度(&gt;1.6 nmol/L)时又显著下调其表达;0.2~0.8 nmol/L NEFA对HSL mRNA的表达有抑制作用,呈剂量依赖性,但在高浓度时(&gt;0.8 nmol/L)反而促进了其表达(P&lt;0.05)。低浓度的BHBA对HSL mRNA的表达无显著抑制作用,高浓度(1.2 mmol/L)的BHBA显著下调HSL mRNA的表达,并呈剂量依赖性;低浓度(&lt;0.6mmol/L)的BHBA对ADPN mRNA的表达无明显作用,但高浓度的BHBA(&gt;0.6 mmol/L)对ADPN mRNA的表达具有明显的抑制作用(P&lt;0.05)。结论:代谢中间产物可通过促进ADPN mRNA或抑制HSL mRNA的表达来调节脂肪代谢。     

脂联素对体外培养新生牛脂肪细胞ADPN、HSL mRNA表达的影响

取单层生长状态良好的犊牛脂肪细胞,分别添加0、2.5、5、15、30、50、100 μg/mL外源牛重组脂联素（adiponectin,ADPN）,培养12 h后提取总RNA,采用荧光定量PCR方法检测外源脂联素对脂肪细胞ADPN mRNA和HSL mRNA表达水平的影响。结果显示,随着ADPN添加量的增多,ADPN mRNA相对表达量呈下降趋势;添加ADPN 15 μg/mL时,HSL mRNA的表达量达到峰值,之后呈下降趋势。结果表明体外培养的脂肪细胞中ADPN mRNA表达量受自身的负调节,而添加适量的ADPN可刺激脂肪细胞HSL mRNA的表达。     

围产期酮病奶牛高糖现象的研究

在黑龙江省某集约化奶牛场随机选取产后14、21 d的69头奶牛,旨在调查产后酮病奶牛的高血糖现象。根据血浆β一羟丁酸(BHBA)浓度,将试验牛分成酮病组(K)和健康对照组(C)。在酮病组中将产后14d和21 d都发病的分为病程长组(LTK),否则分为病程短组(STK)。检测所有试验牛血浆中GLU,游离性脂肪酸(NEFA)、BHBA和肝功指标。结果显示,围产期高血糖现象主要集中在STK组中;LTK组BHBA极显著高于STK组和C组。LTK组和STK组NEFA极显著高于C组,而LTK组与STK组之间差异不显著。LTK组GIU显著低于C组和STK组,而STK组与C组之间无显著差异。结论是肝功正常的酮病奶牛病程短,血糖维持正常,具有高糖现象;反之,肝功异常的酮病奶牛病程长,血糖水平低于正常。因此,患病奶牛的病程长短与奶牛血糖的调节能力及肝脏的功能状况密切相关。     

胰岛素、胰高血糖素对体外培养的牛脂肪细胞HSL mRNA和ADPN mRNA丰度的影响

试验在单层培养的新生犊牛脂肪细胞中,分别添加胰岛素（INS）与胰高血糖素（GN）,每个激素设置6个梯度3个重复,通过荧光定量PCR技术,观测2种激素对ADPN mRNA与HSL mRNA丰度的影响。结果表明,胰岛素抑制了脂肪细胞ADPN mRNA与HSL mRNA的表达,胰高血糖素促进了ADPN mRNA与HSL mRNA的表达,且ADPNmRNA与HSL mRNA存在相关性。     

奶牛体况与血浆生化指标对酮病的风险预警

为探究奶牛体况、血浆生化指标与酮病的关系,试验选择黑龙江省某集约化牧场94头围产期奶牛进行跟踪调查,根据血浆β-羟基丁酸(BHBA)浓度分为酮病组(K组)和对照组(C组)。采用GLM模式、皮尔逊相关性、二元Logistic回归模型、受试者工作曲线(ROC)进行数据分析。结果表明:围产期奶牛体况评分(BCS)、血浆BHBA、游离脂肪酸(NEFA)、甘油三酯(TG)与奶牛酮病存在强相关性,奶牛分娩当天BCS3.625、血浆BHBA0.68 mmol/L、血浆NEFA0.78 mmol/L时,奶牛有患酮病的风险。     

Ⅰ型、Ⅱ型酮病对奶牛血液某些理化参数的影响

本试验旨在了解Ⅰ型、Ⅱ型酮病发生时奶牛体内某些理化参数的变化。在某集约化牛场随机选取产后7～28 d、平均胎次为2～3胎的试验奶牛,根据血浆中β-羟丁酸（BHBA）、葡萄糖（Glc）、游离脂肪酸（NEFA）的含量以及临床发病特点分为Ⅰ型酮病组（20头）、Ⅱ型酮病组（20头）和健康对照组（10头）。结果显示,三组间血浆中Glc、BH-BA、NEFA的浓度与体况评分存在显著差异（P＜0.05）,但三组试验奶牛的泌乳量、产后天数、血浆中胰岛素（INS）含量彼此间无显著性差异（P＞0.05）。Ⅰ型酮病、Ⅱ型酮病与健康对照组之间的理化参数存在显著差异,为深入探究奶牛Ⅰ型酮病与Ⅱ型酮临床病理学、早期检测和诊断以及详细的发病机理提供依据,为今后有效地预防奶牛Ⅰ型、Ⅱ型酮病奠定基础。     

酮病、脂肪肝奶牛胰岛素受体mRNA丰度

选择自然发生的酮病奶牛、脂肪肝奶牛和正常围产期荷斯坦奶牛（对照）各5头，通过手术方法采取其肝脏样品，采用半定量RT—PCR方法检测了这3组奶牛肝胜样品胰岛素受体（InsR）mRNA丰度的变化。结果表明，酮痛奶牛InsRmRNA相对表达量低于正常对照奶牛，而高于脂肪肝奶牛；脂肪肝奶牛InsR mRNA相对表达量低于正常对照奶牛和酮病奶牛（P〈0．05）。可见，酮病奶牛InsR mRNA相对表达量下降，提示此有利于酮病奶牛糖异生和脂肪动员，从而缓解能量负平衡；脂肪肝奶牛InsR mRNA相对表达量降低，提示奶牛胰岛素应答显著减弱，此时奶牛可能发生了胰岛素抵抗。     

不同耐药水平大肠杆菌acrA和marA基因转录水平的比较

为阐明大肠杆菌耐药菌株药物敏感性变化与acrA和marA的mRNA水平之间的关系。用定量RT—PCR方法比较了多重耐药菌株、单药耐药菌株以及质控株ATCC25922的actA和marA的mRNA水平。结果。actA mRNA水平。多重耐药菌株SEMR是单药耐药菌株SEICI、SEICH和质控株ATCC25922的16倍；／natA mRNA水平。SEMR是SEICH的4倍、SEICI和ATCC25922的8倍；SEICI和SEICH的actA mRNA、marA mRNA水平与ATCC25922的无明显差异；同一菌株actA mRNA和marA mRNA水平的变化保持了较为稳定的一致性。结论：大肠杆菌多重耐药菌株的actA mRNA和marA mRNA水平与其耐药水平存在相关性。     

鸡传染性支气管炎病毒SC株mRNA5及mRNA6 cDNA分子特征

鸡传染性支气管炎病毒(In fectious bronch itisv irus,IBV)隶属于嵌套病毒目(尼多病毒目)(N i-dov irilaes),为冠状病毒科(Coronav irid ae)冠状病毒属(Coronav irus)代表种。在IBV基因组RNA转录过程中形成5种较短的游离mRNA(由小到大分别命名为mRNA 6、5、4、3、2)和基因组胞     

瘦蛋白(Leptin)对体外培养新生牛脂肪细胞Leptin、HSL基因表达的影响

取单层生长良好的脂肪细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、2.5、5、10、50、100μg/L的外源牛重组瘦蛋白(Leptin),培养12h后提取总RNA,每个处理3个重复(孔),应用半定量PCR方法检测外源Leptin对脂肪细胞Leptin mRNA和HSL mRNA水平的影响.结果表明,Leptin对脂肪细胞内Leptin mRNA表达具有抑制作用,但一定浓度的Leptin能提高脂肪细胞内HSL mRNA水平,其中以5μg/L Leptin的作用最为明显;当Leptin的质量浓度超过5μg/L,HSL mRNA表达水平呈下降趋势.     

反转录差异显示技术及其方法的改进

运用mRNA反转录差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,为研究生命活动过程提供重要信息。文章对差异显示反转录聚合酶链式反应技术的基本原理 ,优点与缺点 ,以及近年来对该技术涉及的RT PCR方法、引物设计、PCR反应参数、电泳及差异条带的显示方法以及杂交方式进行了论述和评价 ,并对其应用前景进行了简单分析。     

乳牛前脂肪细胞原代培养过程中ADPN基因和HSL基因表达水平的检测

选取犊牛大网膜脂肪组织，进行牛前脂肪细胞的单层贴壁培养，在细胞接种后第4、6、8、10、12、14、16d分别提取细胞总RNA，采用实时荧光定量RT—PCR方法，检测了体外培养的犊牛前脂肪细胞不同时期ADPN基因mRNA和HSL基因mRNA的表达情况。结果表明，单层培养的脂肪细胞在第4、6、8、10、12、14、16d，ADPN基因mRNA的表达水平呈先下降后升高的趋势，而HSL基因mRNA的表达水平则呈下降趋势。     

日粮类型对猪肌肉组织HSL mRNA和Obese mRNA基因表达的影响

选用20 kg左右的"杜×长×大"外三元杂交仔猪20头,随机分为2组,分别饲喂豆粕型和杂粕(双低菜籽粕+豆粕)型2种不同类型的日粮,饲养猪至体重达到100 kg左右时屠宰测定瘦肉率,取背最长肌肌肉组织,采用RT-PCR技术检测分析HSL mRNA和Obese mRNA表达情况,以探索出日粮类型与基因表达的关系。结果显示,杂粕日粮较豆粕日粮可显著增加HSL mRNA表达量、减少Obese mRNA表达量(P<0.05),2种日粮类型虽对猪瘦肉率无显著性影响,但是从实际值来看,杂粕日粮表现出提高趋势,较豆粕日粮提高3.5%(P>0.05)。