安徽省姜青枯假单胞菌生物型鉴定初报

根据海沃德制订鉴定青枯假单胞菌生物型的方法,对舒城、铜陵、桐城、临泉、阜阳、全椒、巢县、屯溪和休宁等9县市分得的32个菌株进行鉴定。其中4个菌株SC78、SC710、SC81和SC93能利用乳糖、麦芽糖和纤维二糖,不能利用甘露醇、山梨醇和甜醇,属生物型Ⅲ;其它28个菌株则相反,属生物型Ⅳ。生物型Ⅲ的4个菌株是由前作番茄、辣椒和茄子田中的姜瘟病株上分得的;它对姜株致病力较生物型Ⅳ弱。     

姜瘟病发生规律调查及防治建议

通过对舒城、铜陵、临泉、体宁等主要栽姜区姜瘟病发生规律的调查、病原菌鉴定和防治研究,明确了引起姜瘟病的病原菌为姜青枯假单胞菌,除少数菌株属生物型Ⅲ外都为生物型Ⅳ。新栽姜区的菌原主要来自带病种姜,而老姜区土壤带菌和带病种姜都是主要侵染源。病害发生与轮作、种姜处理、气候、姜田管理、土质、施肥等关系密切。采取轮作、选留无病种姜建立留种田、种姜处理、加强田间管理等,结合大田期药物防治能有效的控制病害。     

安徽省姜瘟病菌鉴定

从安徽省舒城、临泉、全椒、铜陵和桐城等县取得十个分离菌,以南京农大提供的姜瘟茵(Pseudomonas solanacearum,ZO 12)菌株为对照,进行致病性、生理生化试验和血清学测验,鉴定结果均属于青枯假单孢菌Pseudomonas solanacearum生物型Ⅳ。姜瘟是我省姜区生产上的严重病害。据1984—1986年对我省主要栽姜区舒城、铜陵、临泉等县市调查,由于姜瘟病为害,常年减产达20—30%,重病年达50—70%,个别区块受害率甚至更高。姜瘟为害,不仅引起减产,且降低品质,影响加工外销,严重挫伤姜农生产积极性。本试验目的为明确我省姜瘟病病原,以期为今后制订防治措施提供参考。故对从舒城、铜陵、临泉、全椒、桐城等五县市分得的菌株进行了鉴定。因任欣正等(1981),吕庆凤等(1983),夏德鑫等(1984),分别对江苏、山东、浙江等地姜瘟病菌进行鉴定,证明均为青枯假单孢菌Pseudomonas Solanacearum (Smith) Smith。故本试验亦为明确我省姜瘟病菌是否和上述三者相同。     

山东姜瘟病病原菌的研究

1998－2000年从山东省莱芜、泰安、滕州和安丘等6个地（市）县采集姜瘟病株，室内分离纯化获得107个菌株，从中选出部分菌株，对病原细菌形态、培养性状、染色反应、生理生化反应和致病性等性状进行测定，并与番茄青枯病菌Tm2和烟草青枯病菌P.s3作了比较研究。结果表明：上述菌株均属于青枯假单胞杆菌（Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith）。根据对其6种糖和醇的作用以及脱氮作用。明确山东姜瘟病菌有Ⅱ和Ⅲ两个生物型，比例分别为42．31和57．69％。不同地区间生物型有一定差异。     

福州地区植物青枯病菌生理分化的研究

从福建省福州市的3个郊县(区)采集分离茄科作物青枯病菌青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanace arum)菌株17个。对其中具代表性的7株用剪叶法接种鉴别寄主的结果表明,来自番茄、茄 子、生姜和辣椒的青枯雷尔氏菌均属于生理小种1。对17个菌株根据其对乳糖、麦芽糖、纤维二糖和 甘露醇、山梨醇、卫茅醇的利用能力以及对硝酸盐还原作用的测定结果表明:5个菌株属于生化型Ⅰ, 占29．4％;分别有1个菌株属于生化型Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ;另有9个菌株不完全符合Hayward(1964)和何礼 远(1983)的5个生化型标准,其中2株菌株能利用3种双糖和甘露醇及山梨醇而不能利用甜醇,暂定 为生化型Ⅲ-1。在供试的12个番茄青枯雷尔氏菌株中,4个为生化型Ⅰ,2个为生化型Ⅲ-1,1个为生 化型Ⅳ,其余5个不符合生化型标准;供试的1个生姜青枯雷尔氏菌株不符合生化型标准;供试的2 个茄子青枯雷尔氏菌株分别属于生化型Ⅱ和Ⅲ;供试的2个辣椒青枯雷尔氏菌株中,1个为生化型 Ⅰ,1个不符合生化型标准。     

广东省烟草青枯菌的菌系和遗传多样性

从广东省韶关和梅州2个烟草产区采集了来自8个县市的共38个烟草青枯菌菌株,对病菌的生物型、致病型和遗传多样性进行了测定,结果表明广东烟草青枯菌全部为生物型Ⅲ。通过在红花大金元,K326,岩烟97和系3等4个烟草鉴别品种上的致病性反应,将广东烟草青枯菌分为强致病力、中等致病力和弱致病力3种致病型,其中以中等致病力菌株为主,占78.9%;强致病力菌株占13.2%;弱致病力菌株占7.9%。从116个RAPD通用引物中筛选出10条引物,用于对38个烟草青枯菌株DNA的RAPD分析,扩增条带表现出明显的多态性,条带主要聚集在0.3～4.0 kb之间。聚类分析这38个菌株可分为2个组群,即组群A和组群B。组群A中又可以分为7个亚组(A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7);组群B也含有4个亚组(B1、B2、B3、B4)。研究结果还表明,广东烟草青枯菌菌株RAPD组群的划分与菌株的寄主来源有一定的相关性,但与地理区域、生物型和致病型没有明显的相关性;生物型不能反映烟草青枯菌菌系的差异。     

赣南地区番茄青枯菌菌系多样性分析

【目的】分离鉴定赣南地区番茄青枯病菌,明确菌系分化,为当地番茄抗青枯病育种和病害防治奠定基础。【方法】从江西省赣南地区采集番茄青枯病病株,经选择性平板分离、纯化和分子鉴定,获得不同地理来源的青枯菌Ralstonia solanacearum菌株。通过生理生化测定和接种番茄试验,鉴定青枯菌的生化变种和致病类型。PCR扩增内切葡聚糖酶基因egl序列,明确青枯菌的演化型和序列变种。双层平板培养法测定其对8个不同噬菌体的敏感性。【结果】获得了来自赣南地区9个市(县)的番茄青枯菌菌株44个,其中,41个菌株为生化变种Ⅲ,3个菌株为生化变种Ⅳ;致病力测定结果聚为I、II和III类,其致病力分别为强、中和弱,其中,强致病力菌株占65.9%。所有菌株属于亚洲分支演化型(Ⅰ),并进一步划分为Sequevar13、14、15、17、18、34、44和48等8个序列变种。大部分菌株对供试的8个噬菌体敏感。【结论】赣南地区番茄青枯菌以生化变种III和强致病力菌株为主,对噬菌体较敏感,存在8个序列变种,具有明显的菌系分化现象和遗传多样性。     

姜瘟致病菌青枯罗尔斯顿氏菌的分离鉴定

[目的]从姜瘟病姜中分离青枯罗尔斯顿氏菌,并进行药敏试验,可为防治姜瘟病提供理论依据。[方法]采用枸橼酸盐利用试验、生化试验、底物利用试验和纸片法药敏试验。[结果]分离鉴定的10株菌的底物利用、生化试验结果符合青枯罗尔斯顿氏菌基本特性。[结论]该试验方法能鉴定青枯罗尔斯顿氏菌。     

姜瘟病原菌田间自然群体毒力及不同接种方法的比较研究

[目的]为姜瘟病病原菌自然群体毒力组成的监测提供参考。[方法]从同一个姜瘟病田的不同区域分离获得26个菌株,观察其细胞学性状,测定其生物型,从灌根法、注射法、剪叶法中筛选姜瘟病病原菌适宜的接种方法。[结果]分离获得的26个菌株的形态、培养性状、染色反应及生理生化特性和对照菌株L2、G2表现完全一致,确定其是青枯假单胞杆菌Pseudomonas solanacearum Smith),即姜瘟病病原菌,其中7株为Ⅱ型,占总菌株数的27%,19株为Ⅲ型,占总菌株数的73%。在田间进行姜瘟病病原菌接种时,建议使用茎基部注射法。[结论]从1块有代表性的病田的不同病株上分离25个以上的菌株的致病力的测定结果是该地区姜瘟病病病菌自然群体毒力组成系统监测的重要参考。     

青枯雷尔氏菌致病机制及其相关基因的研究进展

阐述青枯雷尔氏菌致病基因以及它们之间的相互调节。由于青枯雷尔氏菌的复杂性,进而发展了许多青枯雷尔氏菌分子鉴定技术,并且对青枯雷尔氏菌的鉴定逐渐走向快速、便捷和灵敏高的趋势。青枯雷尔氏菌基因组约5.8Mb,具有高(G+C)含量和约5 120个可能的编码基因;它是由3.7Mb的染色体和2.1Mb的大质粒所组成,主要的致病因子有Ⅲ型hrp分泌系统产物、胞外多糖、细胞壁降解酶(包括果胶质酶以及纤维素酶等),其涉及的基因主要包括hrp基因簇、avr基因、毒性基因;青枯雷尔氏菌通过Ⅲ型分泌系统(T3SS)、II型分泌系统(T2SS)等分泌系统将多种毒性因子输送到胞外使寄主植物致病。同时,T3SS和T2SS之间也是相互影响的。上述致病因子的协调作用是由一个复杂的网络调节系统控制的,并以PhcA调节基因的启动和转录为核心,自动而精密地调节有关致病基因的表达及关闭,从而控制细菌的生长状态。     

广西百色烟区烟草青枯病菌的遗传多样性分析

[目的]分析广西百色烟区烟草青枯病菌的遗传多样性,为了解该烟区青枯病的发生流行规律和该病原菌的致病机制提供参考.[方法]通过致病力测定、生化型鉴定及BOX-PCR对69株来源于广西烟草主产区百色烟区的青枯菌株的遗传多样性进行系统分析.[结果]供试菌株存在明显的致病力分化,强致病力菌株、中等致病力菌株和弱致病力菌株出现频率分别为17.39%、62.32%和20.29%,其中以中等致病力菌群为优势菌群;供试菌株的生化型复杂,其中37株属于生化型III或生化亚型III-1、III-3和III-4,23株属于生化型Ⅰ,1株属于生化型Ⅱ,另有8株属于非标准生化型;BOX-PCR分析结果表明百色烟草青枯病菌存在丰富的遗传多样性,聚类分析结果显示菌株的遗传多态性与菌株的地理来源、致病力、生化型具有一定的相关性,但并无明显的地理种群、生化型种群或致病力一致的种群聚在一起.[结论]广西百色烟区烟草青枯病菌具有丰富的遗传多样性和复杂的生化型,可能是该烟区烟草青枯病为害逐年加重的重要原因之一.     

葡萄根癌病病原菌的筛选及鉴定

[目的]为明确引起济南南部山区葡萄根癌病的病原菌种类,为病害防治提供科学依据。[方法]以形态学为基础,结合生理生化及分子生物学方法对赤霞珠葡萄根癌病样品进行分离鉴定。[结果]结果表明,从根部肿瘤组织中利用MW选择性培养基分离纯化了12株类似于根癌土壤杆菌的细菌。形态学和16SrDNA检测表明12株菌均为根癌土壤杆菌属。其中生化Ⅰ型5株、生化Ⅱ型4株、生化Ⅲ型3株。采用针刺涂抹法接种胡萝卜圆盘,向日葵、葡萄幼苗,确定了两株强毒性菌株JC02、JC05。两株菌均为生化Ⅲ型菌株。质粒生物学鉴定表明JC02、JC05菌株含有Ti质粒,为章鱼碱类型。[结论]研究表明,为害济南南部山区赤霞珠葡萄根癌病的病原菌为葡萄土壤杆菌（Agrobacterium vitis）。     

福建省花生青枯病菌致病型及生物型的测定

从采自福建 10个县 (市 )花生青枯病株标样中 ,分离出花生青枯病原菌菌株 72个 .对其中有代表性的15个菌株进行致病型测定 ,2 9个菌株进行生理生化测定 .供试菌株在鉴别寄主上的致病反应表明 ,福建省的花生青枯病菌属于致病型 和 ,其中以致病型 为主 .对乳糖、麦芽糖、纤维二糖、甘露醇、山梨醇和甜醇的利用能力以及对硝酸盐的还原作用表明 ,除晋江菌株的硝酸盐还原作用不产生气泡 ,定为生物型 - 4 ,同安菌株由于不利用三糖而利用三醇定为生物型 外 ,供测的其他菌株都属于生物型     

攀西地区葛藤根瘤菌的RFLP遗传多样性

利用16S rDNA PCR-RFLP和16-23S IGS PCR-RFLP技术对分离自四川攀枝花的43株葛藤根瘤菌进行了遗传多样性研究。供试菌株的16S rDNA用HaeⅢ、MspⅠ、HinfⅠ和TaqⅠ酶切后具有16种遗传图谱类型。16S-23S rDNA IGS PCR-RFLP分析结果表明,在53%的相似性水平上,供试菌株与参比菌株分为两个分支,在81%的相似水平上所有菌株分为13个群。     

野大豆等宿主根瘤菌表型及16S rDNA PCR-RFLP研究

采用数值分类和16S rDNAPCR-RFLP对分离自北京部分地区野大豆(Glycine soja sieb)、大豆(Glycine max)、菜豆(Phaselous vulgaris)和长萼鸡眼草(Kummerowiae stipulacea)等宿主的60株菌及10株根瘤菌参比菌株进行了研究。数值分类结果表明,在70.5%相似性水平上,所有的菌株可分为3群:群Ⅰ为未知菌群,群Ⅱ为快生和中慢生菌,群Ⅲ为慢生菌群。依据16S rDNA PCR-RFLP分析建立的树状图,在69%的相似性水平上所有的供试菌株可以分为9个系统发育分支。分支Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ没有参比菌,数值分类中群Ⅰ的供试菌株基本上都处于这些分支。分支Ⅱ为Sinorhizobium-Mesorhizobium-Rhizobium,分支Ⅲ为Agrobacterium分支,分支Ⅳ为Bradyrhizobium分支。     

安徽望江棉区棉枯萎病生理型测定

从望江棉区分得5个菌株（系）,经寄主致病性测定,结果表明：菌株WJF03、WJF04属生理型Ⅰ,致病力强,与对照菌株陕F13－1相似;菌株WJF01、WJF02和WJF05属生理型Ⅱ,致病力中度,与另一对照菌株苏宁相似。     

大樱桃根癌病原细菌分类地位鉴定

从烟台地区采集13份大樱桃根癌病样本,分离纯化出26个菌株,致病性测定表明23个菌株在指示寄主番茄上具有致病性;进一步经生理生化反应、碳源利用、选择性培养基等试验鉴定出16个根癌病菌菌株为Agrobacterium tumefaciens生物型2,占69.57%,为优势种群,其余7个菌株为生物型1.对大樱桃根癌病菌分类地位的确定为今后病原菌的系统研究和病害防治提供了理论基础.     

甘肃省啤酒花根癌病病原鉴定

从甘肃省啤酒花主产区调查采集的根癌病瘿瘤上和病土壤中分离获得１５个细菌菌株。经接种啤酒花、番茄、甜菜、向日葵等植物进行致病性测定，其中有４个菌株均能诱致典型的根癌症状，且菌株间致病力无明显差异。用此致病菌株进行细菌染色反应、形态观察、培养性状、生理生化反应等测定，基本确定甘肃省啤酒花根癌病的病原细菌为根癌土壤秆菌生物型Ⅰ。     

思茅松毛虫6龄幼虫肠道细菌的ARDRA分析与鉴定

从自然种群的思茅松毛虫(Dendrolimus kikuchii Matsumura)6龄幼虫肠道环境中分离、纯化、培养获得了6株细菌.以细菌基因组DNA为模板进行PCR扩增,用2种双酶组合Hae Ⅲ和Hin d Ⅲ、HinfⅠ和TaqⅠ对PCR产物进行核糖体DNA扩增片段限制性内切酶分析(ARDRA),得到了3个操作分类单元(OTUs).对每个操作分类单元(OTU)的代表菌株进行16 S rDNA序列测定,序列分析结果表明,分离到的6株肠道细菌中,6N01、6N02、6N03、6N04和6N05属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.),6N06属于克雷伯氏杆菌属(Klebsiella sp.).