金属离子对水稻纹枯病菌菌生长和菌核形成的影响

研究了12种金属离子对水稻纹枯病菌菌丝生长和菌核形成的影响,按其对菌丝生长和菌核形成有抑制作用的浓度范围不同分为3类(1)对病菌有抑制作用的浓度最高,在2 500μg/mL时,仍有菌丝生长和菌核形成,属于这一类的有Mg2+、Ba2+、Ca2+和Mn2+4种金属离子;值得一提的是,Mg2+在100～2 5μg/mL范围内促进菌丝生长和增加菌核干质量.(2)对病菌有抑制作用的浓度较高,在500或1000μg/mL时可严重抑制菌丝生长和菌核形成,属于这一类的有Fe2+、e3+、Cu2+、Pb2+和Zn2+5种金属离子.(3)在浓度为10或50μg/mL时严重抑制菌丝生长和菌核形成,属于这一类的有Ag+、Hg2+和Cd2+3种金属离子.     

培养基对水稻纹枯病菌菌丝生长和菌核形成的影响

研究了12种培养基对水稻纹枯病菌菌丝生长、菌核形成数量和质量的影响。结果表明：在菌丝生长方面，水稻纹枯病菌在稻草煎液琼脂、水琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂和麦芽糖琼脂培养基上的生长速率最快，而在牛肉胨琼脂培养基上的生长最差；在菌核形成方面，理查琼脂培养基最有利于菌核的形成，表现为菌核数量最多，质量最大。     

化学肥料对水稻纹枯病菌菌丝生长和菌核形成的影响

立枯丝核菌 (ＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉＡＧ - 1ＩＡ)引起的纹枯病是水稻三大病害之一 ,关于化学肥料影响水稻纹枯病发生发展的报道很多 ,但化学肥料体外对病原菌的影响则很少报道 .本试验研究了氮、磷、钾对病菌菌丝生长和菌核形成的影响 .1　材料与方法　　水稻纹枯病菌 (ＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉＡＧ - 1ＩＡ)保存于华南农业大学资环学院真菌研究室 .采用Ｃｚａｐｅｋ培养基及培养液 .氮肥为ＣＯ(ＮＨ2 ) 2 (北京南尚乐化工厂 )和 (ＮＨ4) 2 ＳＯ4(武汉制药厂 ) ;磷肥是ＮａＨ2 ＰＯ4·2Ｈ2 Ｏ(哈尔滨市新春化工厂 …     

水稻纹枯病菌菌丝生长的化学抑制

用生长速率法测定不同药剂对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solaniKühn)菌丝生长的抑制作用。结果表明,以爱苗和百菌清的抑制能力较强,其毒力回归式分别为:y=4.0265 0.7881x,EC50=17.19μL/L;y=4.4765 0.4238x,EC50=17.19μL/L。     

湖北省水稻纹枯病菌菌丝融合群鉴定

用采自湖北省44个县、市的62个水稻纹枯病菌菌株与Rhizoctonia solani的菌丝融合群国际标准株AG-1IA、AG-1IB、AG-1IC、AG-4和AG-5进行了菌丝融合试验。结果证明,供试的62个菌株均能与AG-1IA株融合,其中有60株也能与AG-1IC株融合。比较而言,供试株与AG-1IA的融合率高于与AG-1IC的融合率。据此,供试菌株应归于R.Solani AG-1IA。     

水稻纹枯病菌菌核形成过程中特异基因的表达与分析

以水稻纹枯病GD-118菌株菌丝形成期的mRNA为驱赶子(driver),以菌核形成期的mRNA为检测子(tester),采用抑制消减杂交(SSH)结合虚拟Northern杂交筛选,构建了水稻纹枯病菌菌核形成过程中特异表达产生的差减cDNA文库;进一步用PCR筛选显示克隆中插入的片段主要分布在200～500bp之间;随机挑取克隆应用虚拟Northern技术以菌丝、菌核cDNA为探针来验证消减有效性,经测序和同源性检测剔除重复序列之后,获得了从菌丝到菌核形成相关的28条特异表达的基因片段;所筛选的特异表达序列主要涉及胁迫响应、转录调控、信号传导、合成代谢等.这为进一步分析水稻纹枯病菌菌核形成过程的相关基因提供了科学线索.     

井冈霉素对水稻纹枯病菌生长发育的影响 

以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani Kühn)强致病菌株GD-118为供试菌株,在室内观察了井冈霉素(Jinggangmycin)对其生长发育的影响。结果表明:井冈霉素对水稻纹枯病菌的毒力回归方程为y=3.360 3+1.320 4x,相关系数r=0.962 6,理论抑制菌丝生长的EC50为70.2μg/mL,EC95为6 341.5μg/mL。与不加井冈霉素的空白对照相比,用井冈霉素处理后水稻纹枯病菌的菌落边缘明显凹凸不平,边缘菌丝更密集、颜色加深,并且随着井冈霉素处理浓度的增加,菌丝的干质量逐渐降低,但菌落表面菌丝的密集程度有所增加、颜色更深;空白对照的菌核呈颗粒状、褐色,散生于菌落表面,边缘较多而中间较少;用井冈霉素处理后的菌核多数为粉状、浅褐色,部分菌核会连在一起呈块状,分布在菌落外围呈明显的双环形,具不规则的凹凸型菌落边缘,并且随着井冈霉素处理浓度的增加,菌核的干质量有所增加,菌核出现时间比空白对照提前约24h。另外,随着井冈霉素处理浓度的增加,水稻纹枯病菌的菌丝细胞核平均数目和分布范围均有不正常增多的趋势。     

在水稻纹枯病菌菌核形成中5个基因的表达差异分析

以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1IA)菌株GD118不同生长时期的总RNA为材料,以18SrRNA作为内参基因,根据实验室抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)已获得的立枯丝核菌基因片段的表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)设计引物,采用实时定量RT-PCR检测A、B、C、E、F基因(分别为双组分反应调节子、激活巨噬细胞糖蛋白、胞外金属弹力蛋白酶、亲环蛋白、内质网囊泡蛋白ERV29)的表达,以期找到水稻纹枯病菌菌核形成中的差异表达基因。结果表明:从菌核开始形成到菌核成熟的过程中,这5个基因的表达量逐渐降低,且菌核在成熟时表达量最低,但成熟后这些基因的表达量迅速恢复到之前的水平,之后表达量基本保持不变。提示这5个基因在水稻纹枯病菌菌核形成的不同时期的表达有显著差异,说明这5个基因可能受菌核形成过程中胁迫条件的诱导表达。     

10种除草剂对水稻纹枯病菌的影响

在实验室条件下,就10种稻田除草剂对水稻纹枯病菌的影响进行研究。结果表明:在PSA培养基上,乙氧氟草醚、丁草胺、乙草胺、恶庚草烷和恶草灵能显著抑制水稻纹枯病菌菌丝的生长,其IC50分别为2.01、4.16、8.12、11.97和22.01mg·L-1;而灭草松、苄嘧磺隆、环胺磺隆对菌丝生长抑制作用不明显。在100mg·L-1浓度下,乙氧氟草醚、乙草胺、恶庚草烷、恶草灵、丁草胺对水稻纹枯病菌菌核的萌发有一定的抑制作用。盆栽试验结果表明:二氯喹啉酸、乙氧氟草醚、恶草灵、丁草胺和恶庚草烷对水稻纹枯病的发生有抑制作用;而灭草松、苄嘧磺隆、乙草胺则有加重病害发生的趋势。     

化学物质对水稻纹枯病菌黑色素形成的影响

【目的】水稻纹枯病是由立枯丝核菌Rhizoctonia solani AG-1 IA融合群引起的真菌病害,本研究旨在明确外界培养条件与水稻纹枯病菌黑色素形成的关系。【方法】采用菌丝生长速率法和紫外分光光度法,测定化学肥料[500μg/mL K_2SO_4、NaH_2PO_4、CO(NH_2)_2]、金属离子(5μg/mL CuSO_4、FeSO_4、ZnSO_4)、抗氧化剂(5μg/mL槲皮素、桑色素、抗坏血酸)和对照(300μg/mL莨菪碱、50μg/mL儿茶酚、水)对水稻纹枯病菌菌丝生长速率、菌核数量、菌核鲜质量和干质量以及黑色素含量的影响。【结果】500μg/mL K_2SO_4、NaH_2PO_4和CO(NH_2)_2,5μg/mL CuSO_4和ZnSO_4,5μg/mL槲皮素、桑色素和抗坏血酸以及50μg/mL儿茶酚溶液对水稻纹枯病菌黑色素的形成均有促进作用。其中,500μg/mL的CO(NH_2)_2处理下,水稻纹枯病菌产生黑色素最多,为113.2 mg;而300μg/mL的莨菪碱处理下,水稻纹枯病菌产生黑色素最少,为37.4 mg。【结论】水稻纹枯病菌黑色素的产生与菌丝生长速率和菌核发育没有必然的联系,即抑制菌丝生长和菌核发育的化学物质,不一定能够抑制黑色素的形成。本研究结果可为水稻纹枯病防控机理的研究提供依据。     

我国南方六省(区)水稻纹枯病菌遗传多样性的研究

对来自海南、福建、广西、云南、湖南和广东等我国南方6个代表性省（区）的72个水稻纹枯病菌菌株进行了RAPD聚类分析及致病力测定。结果表明，供试菌株存在丰富的遗传多样性。通过使用10个随机引物对该病菌基因组DNA进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，共获得210条DNA谱带，其中5条为特征带，205条为多态带，条带多态率为98％。在0.54左右的相似性系数水平，所有供试菌株被划分为6个类群，所有来自同一省（区）的菌株均聚类为同一类群或亚类群。DNA条带的多态性与地理来源呈现明显的相关性，但与致病力的强弱无明显的相关性。     

不同品种水稻纹枯病菌遗传多样性及致病力分化

运用RAPD分子标记技术分析了从6个水稻品种上采集的40个水稻纹枯病菌菌株的遗传多样性，筛选出的10条引物共扩增出98条RAPD谱带，其中81条具有多态性，多态率为82.65%，菌株间的遗传相似性系数（以Nei‘s基因一致度表示）变幅为0.5644-0.9307，用UPGMA法可以将供试菌株分成4个RAPD聚类组群（Ⅰ、Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ），相同寄主来源的菌株基本上聚集在同一组群内，表明同一寄主来源的菌株间具有较近的亲缘关系，在温室条件下，致病力测定结果表明所有菌株对Tetep都有致病性，病电表 指数变幅在0.40-1183之间，分析结果表明，纹枯病菌群体存在丰富的遗传多样性，不同寄主上的水稻纹枯病性，病情指数变幅在0.40-11.83之间，分析结果表明，纹枯病菌群体存在丰富的遗传多样性，不同寄主上的水稻纹枯病菌群体间发生了很大的遗传分化（FST=0.632)。这种遗传差异与寄主的选择作用有一定的关系，RAPD聚类组群的划分和菌株的寄主来源有一定的相关性，但致病力差异与菌株的寄主来源及RAPD组群没有直接相关性。     

环境因子对马铃薯致病立枯丝核菌AG-3融合群生长的影响

[目的]研究环境因子对马铃薯致病立枯丝核菌AG-3融合群生长状况的影响,以明确黑龙江省马铃薯立枯丝核菌的环境适应性,为该病害的防治提供理论依据。[方法]采用生长速率法对立枯丝核菌菌丝在不同温度、p H、光暗条件下的生长状况进行测定。[结果]菌丝在4℃条件下不能生长,适宜温度为19~25℃,全暗和全光条件下最适生长温度分别为22和25℃,黑暗条件有利于菌丝生长;在p H 4~11时菌丝均能生长,以p H 6~7时菌丝生长速度较快;当热激20 min以上时,其致死温度为50℃。[结论]综合评价了环境因子对立枯丝核菌AG-3融合群生长的影响,同时耐热性测定表明短暂热激对菌丝生长有一定的促进作用,但当时间过长或温度过高时会严重抑制菌丝的生长。     

外源环腺苷酸对水稻纹枯病菌生长的影响研究初报

初步探讨了外源环腺苷酸(cAMP)对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solaniAG-1 IA)生长的影响。研究结果显示,外源cAMP能显著抑制该病原菌的径向生长,在终浓度达到10 mmoL/L时产生的强烈抑制作用还导致了菌丝的扭曲和产生大量非正常分枝,菌核形成的时间也被推迟。该结果证明了水稻纹枯病菌菌丝生长对外源cAMP的敏感性。这为进一步研究该病原菌相关的生长因子提供了有用的参考。     

Population Dynamics and Survival of Rhizoctonia solani AG-1 in Field Soil Under Rice-Wheat Rotation

A field under rice-wheat rotation was selected near Chengdu, China, to study the population of Rhizoctonia solani anastomosis group 1 (AG-l), pathogen causing rice sheath blight disease, in natural soil ecosystem. Inocula of the fungus recovered from the field were divided into three types, i.e., sclerotia, free mycelium retained in the soil passed through a 0.355mm sieve, and colonized plant debris which was subdivided into small colonized debris retained between 2.00 and 0.355mm sieves and large colonized debris retained on 2.00mm sieve after wet screening. Quantitative estimation of the three types of inocula in one year indicated that small colonized debris was the dominant inoculum type for most of the time. The population peaked in March and September at 1 210and 480 colonized debris 100 g-1 air-dry soil respectively, and fell down in December and August to 0 and 177 colonized debris 100 g-1 air-dry soil respectively. Free mycelium was only detectable in March, September and October with 1 209, 7.9 and 14.5 μg fresh wt myceliumg-1 air-dry soil respectively, which corresponded to the two peaks and the second highest level of small debris density in the year. Viable sclerotia and large colonized debris were rare with populations ranging from 0 to 3 for sclerotia and 0 to 14 for large colonized debris 100 g-1 air-dry soil, but were the main structures to survive over winter. It was expected that soil temperature was the main factor determining population dynamics of R.solani AG-1 in natural soil. Optimum temperature for population increasing is predicted to be around 15℃, with a range from 10 to 25℃. Viability tests indicated that 60.9% sclerotia could survive after 265 d being buried in natural sandy loam in field conditions in Beijing, while colonized rice straw debris (0.5 - 1.0 cm long) could not yield the fungus on medium plates after 88d of being buried under the same conditions.     

立枯丝核菌AG-1 IB引起白菜、薄荷、莴苣叶腐病的研究*

 云南省西双版纳地区白菜、薄荷、莴苣叶腐病频繁发生,从有叶腐症状的病害组织中分离到立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）菌株。根据培养性状、菌丝直径、细胞核数目、融合群反应、5.8 s rDNA片段序列分析及致病性测定,结果表明引起白菜、薄荷、莴苣叶腐病的病原菌为立枯丝核菌AG-1 IB菌丝融合群。     

中国南方八省（自治区）水稻纹枯病菌群体遗传结构的SSR分析

【目的】明确中国南方水稻纹枯病菌不同地理群体的遗传结构,为研究该病害的流行规律提供信息。【方法】采用8个SSR荧光标记对收集自中国南方8省（自治区）的188个水稻纹枯病菌进行检测。利用POPGENE version 1.31软件计算各项遗传多样性参数,近交系数由FSTAT 2.9.3软件估算。基于马尔可夫链模型,采用GENEPOP 4.2软件以卡方检验估计Hardy-Weinberg平衡。应用Arlequin 3.1软件进行分子方差变异分析,并通过遗传分化系数计算基因流。基于Nei’s遗传距离,利用MEGA5.0软件构建UPGMA树状图。使用STRUCTURE 2.3.3软件的贝叶斯聚类法进行群体遗传结构分析,并估计群体间遗传混杂程度。采用Mantel test检测遗传距离与地理距离的相关性。【结果】8个地理群体的平均观测等位基因数和有效等位基因数分别为4.025和2.071。Shannon’s信息指数为0.659-1.088,平均为0.859。等位基因丰富度为2.500-5.152,平均为3.858。观测杂合度为0.425-0.619,平均为0.506。期望杂合度为0.399-0.546,平均为0.472。总群体水平的近交系数（F_IS = -0.069）为负值,表明总群体内杂合子过剩（纯合子缺失）。Hardy-Weinberg平衡检验表明,在6个群体中存在因杂合子的缺失或过剩引起的平衡偏离,暗示了水稻纹枯病菌同时具有克隆生长和有性繁殖,两种繁殖方式间的平衡因群体而异。AMOVA分析结果显示,有88.14%的遗传变异来自群体内部的个体间,表明遗传变异主要发生在群体内。Mantel检测发现,遗传距离与其地理距离之间呈显著正相关（r=0.422,P=0.025）。UPGMA聚类表明,所有群体可被划分为遗传分化明显的两个亚群（F_ST =0.209-0.624）,其中位于珠江沿岸的广宁和长塘群体为一个组群,而位于长江沿岸的6个群体为另一组群,与遗传结构分析结果一致。位于长江沿岸的群体遗传混杂明显,基因交流水平高（Nm=2.525-8.447）,群体分化程度较低（F_ST=0.029-0.094）。【结论】中国南方水稻纹枯病菌分布范围广泛、可能的混合繁殖模式以及菌核或菌丝具有远距离传播特性,是导致其遗传多样性水平较高的原因。长江亚群内部个体在不同群体之间的迁移所形成的基因流动,在一定程度上阻止了群体间的遗传分化。而长江亚群和珠江亚群之间存在明显的遗传分化,推测病原菌有限的长距离迁移可能是群体遗传变异空间结构形成的主要原因。