健康鸡猪体内大肠杆菌对四环素的耐药性及耐药基因分布

【目的】四环素作为人类和动物临床上广泛使用的广谱抗生素,其耐药性问题一直为全球所关注。健康动物体内的共生性大肠杆菌作为耐药指示菌和耐药基因的贮存库,了解其对四环素的耐药性及耐药机制对于疾病的防控具有重要意义。【方法】从健康鸡、猪体内分离大肠杆菌,用微量肉汤法检测其对四环素的耐药性,并用PCR方法对耐药菌株中8种四环素耐药基因的携带情况进行调查,运用统计学方法分析鸡、猪体内大肠杆菌分离株的耐药性和耐药基因分布情况的差异。【结果】总共分离鉴定出大肠杆菌269株,其中86.2%的菌株对四环素产生了耐药性,健康猪体内大肠杆菌分离株的耐药性明显高于健康鸡体内分离株(P0.05)。tet(A)、tet(B)和tet(M)3种四环素耐药基因广泛存在于健康鸡、猪体内的共生大肠杆菌中,所携带比例分别为87.9%、28.4%和15.5%;所有对四环素耐药的大肠杆菌均携带tet(A)或tet(B)基因,其中25.0%和2.6%的耐药菌株分别携带有2种和3种耐药基因,tet(M)基因与tet(A)或tet(A)+tet(B)基因共存于对四环素耐药的大肠杆菌中;健康鸡、猪体内耐药性大肠杆菌在tet(A)+tet(M)基因携带率方面的差异具有统计学意义(P0.01)。【结论】健康鸡、猪体内的大肠杆菌分离株普遍对四环素耐药,四环素耐药基因广泛分布于大肠杆菌分离株中,大肠杆菌对四环素的耐药机制以主动外排作用为主,核糖体保护基因在大肠杆菌对四环素耐药机制方面的作用尚待进一步的研究。     

动物、环境及饲养员多重耐药大肠杆菌的PFGE分型研究

【目的】了解养殖场多重耐药大肠杆菌耐药性的传播机制，探讨人、动物与环境间耐药菌垂直克隆传播的可能性。【方法】采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法对分离自养殖场动物、环境和饲养员的86株耐药谱相近多重耐药大肠杆菌进行DNA指纹图谱分型，比较菌株之间的亲缘关系。【结果】37株鸡场来源大肠杆菌可分为20种PFGE分型；49株猪场来源大肠杆菌可分为24种PFGE分型；同一动物、环境或饲养员采样点分离菌株PFGE指纹图谱相同者较多；同一养殖场不同动物个体、养殖场环境不同采样点、动物和环境以及饲养员和环境都存在PFGE指纹图谱完全相同菌株；鸡场和猪场都发现有属同一PFGE分型的来自动物、饲养员和环境的菌株；86株菌全部对环丙沙星、氨苄西林、链霉素、四环素、多西环素和复方新诺明耐药，相同PFGE分型的菌株其耐药谱型不一定相同。【结论】养殖场动物、环境及饲养员之间存在多重耐药大肠杆菌的克隆传播。     

广东省禽源大肠杆菌分离株的耐药性调查

[目的]了解广东省不同地区禽源大肠杆菌的耐药情况。[方法]采用纸片扩散法对不同养禽场分离的229株大肠杆菌进行28种抗菌药物的耐药性试验。[结果]229株大肠杆菌对四环素、复方磺胺甲噁唑、阿莫西林和氨苄西林的耐药率较高,分别为89.1%、80.0%、76.9%和75.5%,其次是多西环素和链霉素(74.7%和68.6%),但阿米卡星耐药率最低(8.3%)。229株大肠杆菌存在多重耐药性,其中6株大肠杆菌可耐26种药物。[结论]广东省禽源大肠杆菌分离株耐药情况严重,存在多重耐药现象。养殖场应合理使用药物,加强细菌耐药性监测,研究结果为养殖场选用合适药物、控制细菌耐药性的产生和扩散提供了有效的理论依据。     

新乡地区部分鸡场鸡大肠杆菌分离鉴定和药敏试验

鸡大肠杆菌病现今在我国养殖业内非常普遍,且高死亡率给养殖业带来了巨大的损失,由于抗生素使用不当,导致细菌耐药性问题形势严峻。试验采集新乡地区部分鸡场疑似大肠杆菌病鸡样品26份,检测结果均阳性。随机选择9株菌株进行耐药性检测,结果显示此地区大肠杆菌对卡那霉素、多粘菌素、庆大霉素、磺胺甲噁唑耐药率均为100%,对其余8种药物均表现出高敏感性。试验为新乡地区养殖鸡时的临床用药提供了理论依据,提高了疗效,减少了耐药性的产生。     

氮磷营养盐对大肠杆菌四环素耐药性的影响

根据临床和实验室标准协会（clinical and laboratory standards institute, CLSI）推荐的微量肉汤稀释法检测泥样中大肠杆菌对四环素的敏感性,并应用PCR法检测四环素耐药基因tetA,tetB,探讨氮磷营养盐对大肠杆菌四环素耐药性影响的可能机制。结果表明：添加不同剂量氮磷营养盐能够导致大肠杆菌对四环素产生耐药性,但大肠杆菌的耐药率与剂量间无明显相关性。37株高耐药率大肠杆菌tetA基因的阳性率为100%,66株低耐药率大肠杆菌tetA基因的阳性率为16.67%,而16株对药物敏感的大肠杆菌未检测到tetA基因;但供试大肠杆菌均未检测到tetB基因。这表明,氮磷营养盐诱导的大肠杆菌四环素耐药性与tetA基因有关。     

河南部分地区17株禽源大肠杆菌的耐药性分析

[目的]研究河南地区禽源大肠杆菌耐药性的变化,为临床药物使用提供参考。[方法]从河南省部分地区鸡场有大肠杆菌病典型症状的病例（鸡）采集病料,分离出禽源性大肠杆菌17株,检测其对24种抗生素的耐药性。[结果]24种药物中有21种药物的耐药率〉70％,其中链霉素、青霉素、阿奇霉素万古霉素、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、四环素、泰乐菌素10种药物的耐药性达90％,青霉素、阿奇霉素、氯霉素、泰乐菌素4种药物的耐药性达100％。[结论]河南省部分地区禽源大肠杆菌对常见抗生素耐药性增强,抗性增加。     

132株临床分离仔猪大肠杆菌的耐药性分析

为了解吉林省不同地区猪场仔猪大肠杆菌的耐药性情况,实验采用Kirby-Bauer氏法(K-B法)测定了临床分离的132株致病性大肠杆菌对22种抗菌药物的耐药性,继而通过平皿二倍稀释法测定了其中的40株多重耐药性大肠杆菌对6种常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明,132株大肠杆菌均表现出不同程度的耐药,并且多数为多重耐药株,其中的40株多重耐药大肠杆菌对6种常用抗菌素的耐药率在31.3%~93.8%之间。这些结果为临床大肠杆菌病的诊断和治疗提供理论依据。     

山西省鸡源大肠杆菌耐药性的监测

从山西省发生大肠杆菌病的鸡场采集了雏鸡病料,进行大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性试验。结果表明,在分离出的37株大肠杆菌中,采用纸片法分别用14种抗菌药物进行了敏感性检测,发现除了丁胺卡那霉素对所有菌株敏感外,其他药物均呈不同程度耐药性,磷霉素耐药率最高,其次为磺胺二甲基嘧啶,对喹诺酮类药物有交叉耐药现象;采用试管稀释法对6种抗菌药物进行敏感性试验,发现同种药物对不同菌株的最小抑菌浓度有较大的差别,其中差别最大是恩诺沙星。     

湖南省常德地区鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

从湖南省常德地区的3个不同鸡场采集105份病料,通过细菌分离和生化鉴定共分离得到75株鸡源性大肠杆菌,其中60株为致病性大肠杆菌。对分离得到的75株鸡大肠杆菌进行30种抗生素的敏感性试验表明,分离菌株对30种抗菌药物均有不同程度的耐药性,且多重耐药现象普遍;在30种受试药物中,高敏的药物分别为头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶、头孢唑啉、头孢噻肟、丁胺卡那霉素等6种。     

河南地区鸡猪源大肠杆菌的耐药性监测

从河南中北部地区多个规模化鸡场和猪场采集病料,经大肠杆菌显色培养基鉴定,共分离保存157株鸡源大肠杆菌和92株猪源大肠杆菌,采用二倍肉汤稀释法对23种抗菌药物进行了药物敏感性测定。耐药性监测结果表明,鸡源大肠杆菌对阿莫西林／克拉维酸、头孢噻呋和阿米卡星相对较为敏感,耐药率分别为40．8％、59．9％和56．7％,对氨苄西林、卡那霉素、四环素、磺胺异恶唑、磺胺甲恶唑、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、多粘菌素E等高度耐药;猪源大肠杆菌对阿米卡星最为敏感,耐药率仅为2．0％,其次是阿莫西林／克拉维酸、头孢噻呋和安普霉素,耐药率分别为56．5％、60．9％和65．2％,对氨苄西林、头孢唑啉、链霉素、卡那霉素、大观霉素、四环素、氯霉素、环丙沙星、达氟沙星等则高度耐药。多数菌株普遍呈多重耐药,以17～23耐药株为主。这些数据为本地区的用药提供了参考,同时也显示本地区鸡、猪源大肠杆菌的耐药性极其严重,有必要对本地区进行细菌耐药性的跟踪监测。     

大肠埃希菌Ⅰ类整合子与多重耐药的相关性分析

采用从粪便中分离并鉴定出的40株鸡源大肠埃希氏菌,用K-B法测定大肠杆菌多重耐药性,通过PCR法扩增Ⅰ类整合子,电泳检测扩增产物。结果表明,40株大肠杆菌对10类18种抗菌药物的耐药率,最高为S,C,SMX,SXT 100%,最低为PB,CTX 0%,多重耐药率(耐3种以上药物)为100%。Ⅰ类整合子阳性菌株35株,阳性率87.5%。Ⅰ类整合子对大肠杆菌多重耐药性的产生和传播起着重要作用,应加强基因水平耐药监测。     

我国部分地区鸡致病性大肠杆菌的耐药性检测与分析

用氟苯尼考、氧氟沙星等12种抗菌药物对从东北、河北、山东、华东等地部分鸡场分离的21株鸡致病性大肠杆菌进行药物敏感性测定。结果表明,分离菌对阿莫西林的耐药性最高,为100%,余下依次为四环素95.24%、诺氟沙星85.71%、多西环素66.67%、氧氟沙星61.9%、硫酸链霉素61.9%、环丙沙星57.14%、氟苯尼考57.14%、红霉素38.1%、硫酸庆大霉素23.89%、新霉素19.05%、阿米卡星19.05%。分离菌表现出多重耐药性,7重耐药菌株最多,达6株(28.57%),4重、5重、6重耐药各3株(14.29%),8重、11重耐药的各2株(9.52%),9重、10重耐药的各1株(4.76%)。     

临床分离鸡源大肠杆菌耐药性的测定

目的 了解河北张家口地区鸡场感染大肠杆菌的情况及其耐药程度．方法 无菌采集临床疑似大肠杆菌病鸡的心、肝、脾进行细菌学检验,鉴定出大肠杆菌9株,血清型鉴定并对其中鉴定出血清型的3株菌进行药敏试验．结果 血清型主要为O1,O148,O78;三个菌株表现出对利福平、多黏菌素B、头孢类药物相似的药物敏感性,对盐酸大观霉素、头孢喹肟、阿奠西林耐药（头孢喹肟、阿奠西林的MIC≥512g／L）．结论血清型存在多重分布,耐药性广泛．     

鸭源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的流行调查

[目的]了解我国部分地区鸭源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR在临床菌株中的流行情况。[方法]采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的肉汤微量稀释法测定22株鸭大肠杆菌对氟苯尼考等9种药物的敏感性,并应用PCR方法检测氟苯尼考耐药基因floR。[结果]22株鸭源大肠杆菌对氟苯尼考和四环素全部耐药,耐药率达100%,呈现多重耐药性特点;其氟苯尼考耐药基因floR检出率为90.9%,与耐药表型基本一致。[结论]氟苯尼考在我国部分地区呈现高耐药性,对其耐药基因的监测为临床抗菌药物的合理使用提供了理论依据。     

辽宁锦州地区三种家禽大肠杆菌耐药性研究

分别从健康和患病鸡、鸭、鹅分离出302株大肠杆菌,采用微量稀释法测定菌株对12种抗菌药物的敏感性。结果表明,302株大肠杆菌除对阿米卡星和多粘菌素B较敏感,对其他抗菌药物呈现不同程度的耐药且多重耐药现象严重。鹅源大肠杆菌和鸭源大肠杆菌对氨苄西林、氯霉素和环丙沙星耐药性较高,鸡源大肠杆菌对其他抗菌药物耐药率较高。同时,患病组家禽分离的大肠杆菌对氨苄西林以外的其他11种抗菌药物的耐药率明显高于健康组大肠杆菌。结果显示,辽宁锦州地区鸡、鸭、鹅三种家禽大肠杆菌对不同抗菌药物的耐药性存在差异,三种家禽对抗菌药物的整体耐药性较强,应加强耐药性监测,为指导兽医临床合理使用抗菌药物提供指导。     

新疆奶牛子宫内膜炎大肠杆菌进化分群及耐药特性研究

为了探究新疆地区奶牛子宫内膜炎大肠杆菌进化分群及耐药特性,对新疆奶牛子宫内膜炎临床样品进行大肠杆菌的分离,采用PCR技术对大肠杆菌分离株进行种系分群、耐药基因检测,测定分离株对抗菌药物的敏感性,并对产ESBLs菌株携带质粒进行了分析。结果显示,从奶牛临床样品中成功分离到210株大肠杆菌;种群分析表明,B1群(48.1%)分布最多,其次分别是A群(28.6%)、C群(12.9%)、E群(6.7%)、D群(3.8%)。210株分离株对16种抗菌药物呈现出不同程度的耐药性,其中对红霉素的耐药率最高,为95.2%,其次是氨苄西林(83.3%)、庆大霉素(73.8%)、头孢氨苄(71.9%),而对诺氟沙星耐药率最低,为6.2%,然后是复方新诺明(6.7%)、氯霉素(10.0%)、多西环素(10.5%)。所有的分离株对不同的抗菌药物耐药,其中多重耐药性主要集中在4~10耐,且耐药表型与基因型基本一致。对产ESBLs菌株携带质粒分析表明,同一质粒可以携带多种耐药基因,这些质粒可介导菌株的多重耐药。提示新疆地区奶牛子宫内膜炎大肠杆菌流行株已经对多种临床常用药物产生了较严重的耐药性,且分离株的耐药性与耐药质粒的转移密切相关。     

肉鸡大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的检测与药敏分析

采用全自动微生物鉴定系统(Vitek-32)鉴定了5株肉鸡致病菌,并对分离菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测和对11种抗菌药、4种复方药物的敏感性测定。结果显示,分离的5株菌均为大肠杆菌,其中一株产ES-BLs。药敏试验结果表明该鸡场分离的大肠杆菌对兽医临床中常用的β-内酰胺类抗生素、氟喹诺酮类、氯霉素类、氨基糖苷类均产生耐药,对四环素类中介或耐药,显示出严重的多重耐药性。β-内酰胺类药物与酶抑制剂联用能使药物对细菌的最低抑菌浓度(MICs)降低,因此复方β-内酰胺类药物仍是防治鸡致病菌感染的有效措施之一,但联用效果因不同β-内酰胺类抗生素而有差异。     

鸡源大肠杆菌CRISPR特征及其与耐药性的关系

【目的】研究鸡源大肠杆菌成簇间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)与耐药性的关系,并对CRISPR进行生物信息学分析,为进一步研究CRISPR功能及其对细菌耐药的影响奠定基础。【方法】对从安徽省合肥地区养鸡场分离鉴定的130株鸡源大肠杆菌进行耐药性(16种抗菌药物)和CRISPR检测,分析CRISPR与鸡源大肠杆菌多重耐药的关系。挑选扩增出片段长度不同的12株大肠杆菌,对其CRISPR PCR产物进行测序,通过BLAST进行二级结构预测,用CRISPRTarget等对其重复序列和间隔序列进行生物信息学分析。【结果】130株鸡源大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药率为2.3%~97.7%,118株大肠杆菌对3种及3种以上药物耐药;共有39株菌检测到CRISPR,阳性率为30%;CRISPR阳性菌株均为多重耐药菌株,其耐药率(100%)显著高于CRISPR阴性菌株(87%),CRISPR序列差异性与耐药性之间无直接相关性。CRISPR序列同源性较低的12株大肠杆菌均包含2条(11号菌除外)长度为29bp的重复序列,这些序列可分为5类,其RNA二级结构都能形成回文结构,但茎环大小有差异。从这12株大肠杆菌中共发现间隔序列168条,其中77条为新发现序列;同源性比对发现,在112条有比对结果的间隔序列中,72.3%来源于质粒,25.0%来源于噬菌体,2.7%来源于细菌和病毒。【结论】携带CRISPR的鸡源大肠杆菌广泛存在,CRISPR可能与大肠杆菌耐药表型相关,明确了CRISPR的结构特征。     

规模化猪场仔猪断奶腹泻大肠杆菌耐药性监测

采用WHO推荐的Kirby-Bauer法,以分离自浙江省10个规模化猪场的60株病原性大肠杆菌为材料,开展了对兽医临床上常用的21种抗菌药物的耐药性监测.结果表明,60株病原性大肠杆菌对抗菌药物已发生普遍的耐药性,其中对复方新诺明(88.3%)、氯霉素(81.0%)、链霉素(78.3%)、痢菌净(77.3%)、痢特灵(75.0%)、喹乙醇(75.0%)等的耐药性最强.对单诺沙星、环丙沙星及诺氟沙星的耐药率也很高,其耐药率分别高达78.8%、59.3%和56.7%.60株大肠杆菌共有57种耐药谱型,绝大多数为多重耐药,其中有4株可同时耐受14种抗菌药物.受检菌株中除1株外,59株均对2种或多种抗菌药物耐药:对1～3种,4～6种,7～9种,10～12种及13～15种抗菌药物耐药的分别有6株(10.0%)、11株(18.3%)、17株(28.3%)、17株(28.3%)和9株(15.0%);对8种抗菌药物耐药的菌株占比例最大(16.7%),其次是对10种抗菌药物耐药(15.0%)和对6种抗菌药物耐药(11.7%)的菌株;不同地区、不同规模化猪场的大肠杆菌菌株的耐药性存在一定差异.临床上应用时间不长的氟苯尼考耐药率已达60.9%,值得关注.     

不同养殖模式鸭肠道大肠杆菌耐药性分析

为对比不同养殖模式下,鸭大肠杆菌的耐药性,本文针对传统平养与网床圈养2种不同养殖模式下的临床健康鸭群,分离鉴定出47株大肠杆菌,选用20种抗生素对其进行耐药性测定分析。结果显示,传统平养的鸭场其耐药性、耐药普均较网床圈养严重的多,在20种抗生素中,传统平养对3种药物敏感,网床圈养对7种药物敏感;对其他药物的耐药率,除链霉素的耐药率外,传统平养的鸭场均高于网床圈养;多重耐药方面,传统平养的24株菌中有2株对所有20种受试抗菌药物均敏感,网床圈养的23株菌中有6株对所有20种受试抗菌药物均敏感,网床圈养有2R、4R、6R、8R;传统平养的耐药普较广,2R-12R均存在,在两种模式中,3R以上菌株网床圈养占34.78%,传统平养的79.17%。结果表明:网床圈养养殖可以减缓耐药性产生。