用一步法和两步法测定口蹄疫病毒TCID_(50)的比较试验

分别用一步法和两步法测定50批病毒液的TCID50,经Bland-Atlman法分析法分析得出,2种方法有较好的一致性.试验结果表明,用一步法与两步法测定口蹄疫病毒时,其TCID50测定结果一致.     

J亚群禽白血病病毒TCID_(50)不同测定方法的比较

为比较不同方法在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)组织细胞半数感染量(TCID50)上的差异,将ALV-J传染性克隆r NX0101株同一病毒保存液以10倍梯度稀释后按照常规方法分别接种已长满DF-1细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,维持7 d后取所有细胞培养上清以ALV-p27抗原检测试剂盒检测p27抗原,细胞固定后以ALV-J特异性单克隆抗体JE9进行间接免疫荧光(IFA)检测,确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算两种方法在两种细胞上的TCID50。结果显示,ELISA法测定该病毒在DF-1细胞和CEF细胞上的TCID50分别为10-5.4TCID50/0.1 m L和10-4.666TCID50/0.1 m L,而IFA法测定该病毒在DF-1和CEF细胞上的TCID50分别为10-6.333TCID50/0.1 m L和10-5.2TCID50/0.1 m L。结果表明,IFA比ELISA具有更高的灵敏度,并且ALV-J在DF-1细胞上复制能力比CEF更强,在DF-1细胞上测定ALV-J的TCID50更为科学。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒超滤浓缩对其TCID_(50)的影响

采用Millipore公司的Mini pellicon超滤系统对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒液进行了浓缩试验,膜堆(PES)的分子量分别为5,8,10,30和50 ku。结果显示,不同孔径的膜堆其浓缩抗原液的TCID50皆随浓缩倍数逐步上升,透过液的TCID50全部为0,截留率为100%。表明采用浓缩工艺对PRRSV细胞培养液进行适当浓缩,可有效提高抗原浓度。     

核酸杂交技术在禽白血病病毒TCID_(50)测定中的应用

为探索核酸杂交技术在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)细胞半数感染量(TCID50)中的可行性,将ALV-J传染性克隆r NX0101株以10倍梯度稀释后按常规方法接种已长满单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,在维持7 d后收集细胞培养上清。上清液部分按照试剂盒说明书进行p27抗原的ELISA检测,另一部分提取RNA后以鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒进行Dot-blot检测,每孔中细胞固定后以ALV-J特异性单克隆抗体进行IFA检测,确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算三种方法测定的TCID50。结果显示ELISA法、IFA法和Dot-blot法在确定病毒感染中能够相互验证和补充,该病毒在CEF的TCID50分别为10-4.7TCID50/0.1 m L、10-5.2TCID50/0.1 m L和10-5.3TCID50/0.1 m L。表明采用Dot-blot法测定ALV-J的TCID50是可行的,不仅能够排除内源性的干扰,并且比ELISA和IFA具有更高的灵敏度。     

用微量细胞培养ELISA测定HCLV TCID_(50)

应用猪瘟兔化弱毒制备的猪瘟兔化疫苗常因为剂量不足而引起免疫失败。究其原因主要是因为兔检(RID)合格的猪瘟兔化苗批间差异较大,质量不稳定。为此建立微量细胞培养ELISA用以测定HCLV TCID50,并获得成功,可以替代RID测毒。     

不同类型消毒剂对口蹄疫病毒杀灭效果的试验

1口蹄疫乳鼠组织毒的制备及稀释 取本实验室保存新复壮的O型口蹄疫强毒（OPMF_14l,LD_50=10^-8.0）,研磨制成1：10的病毒悬液,加双抗置4℃浸毒24h,3000r／min离心10min,取上清液,用PBS做1：500倍稀释,备用。     

不同消毒药对口蹄疫病毒的作用

据法国1978年17卷5期《口蹄疫公报》记载:法国和其他一些官方当局研究许多消毒药剂对口蹄疫病毒的作用。方法是将不同消毒药,按规定的浓度,以1毫升量和1毫升病毒悬液(没有说明浓度)混合均匀后,在室温作用30分钟,然后接种牛甲状腺细胞培养物滴定残余病毒量。结果表明:已经官方审定的消毒药——次亚氯酸钠和氢氧化钠显示对口蹄疫病毒的高效消毒能力。其它被检的消毒药中仅一种酚基化合物和一种碘化物     

实验条件下山羊绒洗净因素对口蹄疫病毒的影响

模拟我国和蒙古国洗净羊绒企业山羊绒洗涤工艺,进行了不同的洗涤水温及作用时间、不同的烘干温度及作用时间对口蹄疫病毒灭活作用的检测。结果表明,水温在64℃以下处理60min不能灭活羊绒中的口蹄疫病毒NM-zg99毒株,65℃处理60min、66℃处理45min、75℃处理10min、80℃处理5min能灭活羊绒中的口蹄疫病毒;高温烘干对羊绒中口蹄疫病毒的灭活与温度和作用时间密切相关,70℃处理约35min、75℃处理约25min能灭活口蹄疫病毒,80～90℃处理20min、95～105℃处理15min、110℃处理10min能使口蹄疫病毒失活。该试验结果为我国制定进口洗净毛、绒检验标准提供了参考数据,并对洗净羊绒企业改进羊毛、绒洗涤工艺具有指导意义。     

用一步法和两步法测定口蹄疫病毒TCID50的比较试验

分别用一步法和两步法测定50批病毒液的TCID50,经Bland-Altman法分析得出,2种方法有较好的一致性。试验结果表明,用一步法与两步法测定口蹄疫病毒时,其TCID50测定结果一致。     

灭菌净对口蹄疫病毒杀灭效果试验

在口蹄疫的防疫工作中,消毒是一项非常重要的措施。疫苗接种加上消毒措施,内外结合使防制口蹄疫形成完整的防疫体系,才能保证家畜不发生此病。消毒必须有消毒效果良好的消毒剂。长期以来口蹄疫的消毒剂是使用甲醛(福尔马     

不同血清型的口蹄疫病毒的特征

<正>不同血清型的口蹄疫病毒的整个基因组的核苷酸序列平均有86%的同源性,但VP1编码区变异性最大,只有约50%~70%的同源性。血清型O、A、C和亚洲1型口蹄疫病毒在VP1编码序列上的变异性更大,同源性最高只能达到15%。因此,O型口蹄疫病毒以VP1编码序列的不同为基础,将世界各地的FMDV分为八个,在基因和地理上不同的基因型称为拓扑型。这八型分别是中东、     

口蹄疫病毒蛋白对先天免疫的影响

正口蹄疫病毒(FMDV)抑制宿主的翻译机制,阻断蛋白质分泌,并裂解与信号转导和先天免疫应答有关的细胞蛋白。FMDV是一种单链阳性RNA病毒,由衣壳和核酸组成,其基因组长度约为8500个碱基,该基因组被一个二十面体衣壳包裹,衣壳由VP1、VP2、VP3和VP4四种结构蛋白各60个拷贝组成(图1)。VP1、VP2、VP3折叠成一个八链的楔形β-折叠形成外层     

高浓度口蹄疫病毒抗原的稀释试验

用预备试验初选的4种稀释剂a、b、c、d，对经浓缩培养法繁殖的牛、猪。型口蹄疫病毒进行稀释，使其与普通毒(对照)浓度相当。然后将其与普通毒一起在不同温度下放置不同时间后，测定TCID50，并对测定结果进行方差分析和多重比较。结果显示，4种稀释剂稀释的病毒TCID50。存在显著差异；a和b稀释的病毒TCID50。之间无显著差异，但均显著高于c和d稀释的病毒TCID50；a和b稀释的病毒与普通对照毒的TCID50。也无显著差异。表明，a和b均可用于稀释口蹄疫病毒抗原，考虑到成本，宜选用b。     

抗口蹄疫病毒血清的制备试验

由于复制口蹄疫病毒(FMDV)须要通过对豚鼠足底垫的适应,故制备口蹄疫病毒分型鉴定用的抗血清被认为是难度很大的工作。这个方法在大多数 FMD 实验室已广为应用。Hyslop和 Morrow 二氏研究了通常用作 FMD 灭活疫苗佐剂的氢氧化铝凝胶。他们的报告指出,这种佐剂的数量是提高疫苗效力的一个重要因素。关于其他细小核糖核酸病毒群的病毒,Kadoi等发现若给豚鼠和兔以适当的加强注射,无佐剂的猪肠病毒能产生较高效价的抗体。这篇科技通讯介绍一种用豚鼠制备抗 FMDV 血清的简易方法:将混于氢氧化铝凝胶中的活 FMDV作为豚鼠接种物。并将其疫苗血清经中和反应与补体结合试验测得的抗体效价,与按常规方法制备的疫苗抗体效价作了比较。     

环氧乙烷对口蹄疫病毒污染毛包的消毒效果试验

环氧乙烷对口蹄疫病毒污染毛包进行了薰蒸消毒试验，并获得了令人满意的效果。该法对原毛无损伤，使用方便，解决了用苛性钠（钾）或甲醛对某些口蹄疫病毒污染物不易消毒的问题。本方法具有较高的推广应用价值。     

口蹄疫病毒衣壳蛋白氨基酸突变对病毒热稳定性的影响

口蹄疫是世界范围内广泛流行的一种偶蹄动物的烈性传染病,其病原为口蹄疫病毒(FMDV),它对热比较敏感,当温度高于30℃时,病毒衣壳容易解离为五聚体亚单位而影响疫苗的免疫保护效果。因此,改善病毒的热稳定性,制备热稳定优良的口蹄疫疫苗具有重大的应用价值。在实验室建立的口蹄疫病毒型内嵌和全长感染性克隆的基础上,在结构蛋白引入1个或2个氨基酸突变,分别构建了2种基因修饰的口蹄疫病毒全长重组质粒。全长质粒经NotⅠ线化后分别转染表达T7RNA聚合酶的BSR/T7细胞以拯救重组病毒。间接免疫荧光和电镜分析表明,成功拯救到2株口蹄疫重组病毒。重组病毒经RT-PCR和序列测定证实只有1株重组病毒所含的耐热突变可以稳定遗传。热失活试验显示,拯救病毒与亲本病毒的耐热特性基本一致。结果表明在结构蛋白上引入V2090A-S2093F-H30568R的突变,并对口蹄疫病毒的热稳定性并没有明显的影响,为未来发展热稳定的口蹄疫疫苗提供了一定的参考。     

强力消毒灵对口蹄疫病毒的杀灭效果试验

以２～３日龄乳鼠为靶动物,以猪口蹄疫病毒及猪水泡病毒感作液给其染毒,观察了强力消毒灵对两种病毒的杀灭效果,并以英国产“农福”作对照,结果表明,两种消毒剂对上述两种病毒均有较强的杀灭作用,但强力消毒灵优于农福,前者的最高稀释倍数为１∶８００,后者为１∶２００。     

几类消毒剂对猪口蹄疫病毒灭杀效果的试验

从市场随机抽取３ 类９ 种消毒剂, 按农业部最新颁发的“兽用消毒剂鉴定技术规范（ 试行）”进行试验, 在１０ ℃条件下对口蹄疫细胞病毒和口蹄疫模拟粪毒分别作用５ ｍｉｎ , ３０ ｍｉｎ , 比较其灭杀效果。试验动物为１ ～２ 日龄乳鼠。还比较了现配现用与配好后暴露于空气中一定时间的灭杀效果。结果表明： 氯制剂类和复合酚类消毒剂对口蹄疫细胞病毒的灭杀效果较好, 同一消毒剂在相同条件下对口蹄疫模拟粪毒灭杀效果比对口蹄疫细胞病毒差, 但在降低稀释度, 延长作用时间时也有较好灭杀效果。而双链季胺盐类消毒剂对口蹄疫细胞病毒和口蹄疫模拟粪毒无灭杀作用。复合酚类消毒剂配好后暴露于空气中的时间越长灭杀效果越差, １５ ｄ 后完全丧失灭杀作用     

影响口蹄疫正向间接血凝试验因素的研究

对影响口蹄疫正向间接血凝试验的血凝反应板,温度,稀释液的pH值及稀释液中兔血清的加入量进行了反复试验,结果表明血凝反应板只能用V型96孔110°血凝反应板,反应温度以20～25℃为宜,稀释液的pH值可控制在7．4～7．8,兔血清加入量以1％～2％为好。