卡那霉素对棉花下胚轴愈伤组织生长的影响

以三个具有不同特点的棉花新品系为试材的研究表明，卡那霉素对棉花下胚轴的愈伤组织形成和增殖均有明显的抑制作用，随其浓度的增加，愈伤组织形成的频率降低，增殖的倍数减少；当浓度增加到１００ｍｇ·Ｌ－１时，愈伤组织严重褐化，其正常生长受到完全抑制；下胚轴形态学上端切段较下端切段更易受卡那霉素的影响     

卡那霉素对棉花胚性愈伤组织生长发育的影响

卡那霉素对棉花胚性愈伤组织的增殖、胚胎发生及发育均有一定的抑制作用,但不同浓度的卡那霉素对棉花胚性愈伤组织的生长发育作用程度不同,低浓度较弱,高浓度较强;胚性愈伤与体细胞胚生长发育的不同阶段对卡那霉素的敏感性有所不同。在棉花遗传转化过程中,卡那霉素浓度不能低于５０ｍｇ·Ｌ－１,胚性愈伤的继代培养时间应控制在３０ｄ左右。     

不同抗生素对韭菜根愈伤组织诱导及再生的影响

本研究以汉中冬韭韭菜品种为试验材料,研究了韭菜根尖及愈伤组织对抑菌性和选择性抗生素的抗性。研究结果表明,选择性抗生素对韭菜再生的影响极显著,以PPT作为选择抗生素时,愈伤生长及不定芽分化阶段PPT适宜浓度为1mg/L,而生根阶段PPT最适浓度为0.5mg/L。当潮霉素浓度为1mg/L时,根尖愈伤组织分化率达到了8%,而浓度为2mg/L时根尖已不能分化,以1mg/LHyg为最佳浓度。用头孢霉素作为抑菌剂时,愈伤生长及不定芽分化阶段,最适浓度为400mg/L,而生根阶段适宜浓度为200mg/L;以Timentin作为抑菌剂时,最适浓度在400mg/L以内,韭菜外植体的分化没有受到影响,随着浓度的增加抑制作用越来越明显,以400mg/LTimentin为最适抑菌抗生素浓度,这为农杆菌介导韭菜遗传转化奠定基础。     

盐胁迫对棉花胚性愈伤组织增殖、胚胎发生及发育的影响

不同盐浓度对棉花胚性愈伤组织增殖、胚胎发生及发育均具有一定的抑制作用；但不同盐浓度对棉花胚性愈伤组织增殖、胚胎发生和发育的影响不同，低浓度时抑制作用软弱，高浓度时抑制作用较强，甚至低浓度的盐对棉花胚胎发生还具有某些促进作用，不同基因型对盐胁迫的反应不同，泗棉３号对盐胁迫的忍耐力较强，其它３个品种较弱。     

甘蔗耐盐愈伤组织的离体筛选及鉴定

以甘蔗心叶为外植体,MS+2,4-D2mg/L为基本培养基,在25±2℃、光照强度24~30μmol/m².s、每天光照10h条件下进行耐盐愈伤组织的离体筛选和鉴定。结果表明,甘蔗愈伤组织的半致死和致死盐浓度分别为0.5%、1.5%NaCl,其愈伤组织诱导率分别为57.5%、0,极显著低于对照;在最高筛选盐浓度(1.0%NaCl)胁迫下,耐盐愈伤组织的相对生长量(2.363%)极显著低于对照(3.162%);耐盐植株的脯氨酸含量(527.19ug/g)极显著高于对照(185.06ug/g),相对电导率(32.3)极显著低于对照(49.0)。     

苦马豆抗盐愈伤组织突变系的筛选

本文以子叶外植体在MS培养基添加1.79 mg/L 2,4-D和1.15mg/L Kt诱导的愈伤组织为材料,添加不同浓度NaCl（100,200,280 mmol/L）下,经过不同时间（0,3,6,9天）胁迫处理,测定其可溶性蛋白含量、SOD和POD活性及丙二醛与脯氨酸含量,通过分析比较,筛选获得突变系的适宜盐浓度为200mmol/L NaCl。验证性试验表明, 200mmol/L NaCl胁迫下比100 mmol/L胁迫获得的抗性愈伤组织的数量多,而280 mmol/L胁迫下无抗性愈伤组织产生。本实验结果为获得抗盐再生植株及研究苦马豆的抗性机理奠定了基础。     

水稻愈伤组织生长速率研究

通过对水稻愈伤组织生长速率的研究,发现水稻愈伤组织生长速率因培养条件的不同和外质体的不同有很大差异,培养温度对愈伤组织生长速率影响较大,较小的温度降低可以使水稻愈伤组织生长速率降低很多,水稻愈伤组织生长速率与连续继代培养时是否改变2,4-D浓度有一定关系,一般表现为在较低温度下改变2,4-D浓度进行继代,可以促进水稻愈伤组织生长;在较高温度下改变2,4-D浓度进行继代,对水稻愈伤组织生长速率影响不大。在23~25℃培养条件下,“中花11”水稻花药培养的单倍体愈伤组织,比其成熟胚诱导的二倍体愈伤组织生长速率快一倍左右。继代时的初始接种量的多少对水稻愈伤组织生长速率也有关系。     

水分胁迫对冬小麦愈伤组织的影响

利用抗旱性不同的32个冬小麦品种的成熟胚、幼穗和幼胚产生的愈伤组织作为供试材料,以聚乙二醇(PEG)诱导的渗透压模拟水分胁迫,测定了游离脯氨酸含量、相对含水量、组织活性及渗透势值。实验结果表明,在水分胁迫下,供试愈伤组织的游离脯氨酸含量增加,相对含水量、组织活性及渗透势值表现下降。聚类分析的结果表明,冬小麦在整株水平与细胞水平之间对于水分胁迫存在着一致性。     

胚轴切断法诱导棉花对棉铃虫抗性的研究

诱导抗虫棉株对棉铃虫[Helicoverpaarmigera(Hubner)]发生动态的影响表明,在田间累积卵量无明显差异的情况下,胚轴切断结合假单胞杆菌(PseudomonasfluorescensP303-1)诱导处理的棉株上棉铃虫二代、三代、四代幼虫发生量分别比在自然生长棉株上的幼虫量减少44.79％、37.98％和29.70％;而只用胚轴切断法处理的棉株上二代、三代棉铃虫幼虫发生量减少25％和8.53％,四代幼虫发生量与自然生长棉株相近。棉铃虫幼虫在菌诱导棉株和无菌诱导棉株上的死亡率分别是自然生长棉株上的4.7l倍和3.01倍。诱导棉株对棉铃虫幼虫的生长发育亦有影响,菌处理和无菌处理的棉株饲喂棉铃虫幼虫,其发育历期分别比对照延长17.17％和7.80％,虫重分别降低25.28％和15.63％,化蛹率分别降低14.94％和9.97％,蛹重分别降低19.80％和8.68％。菌处理和无菌处理后棉株体内多元酚和萜烯类物质均比对照有不同程度的提高,菌处理的增幅要高于无菌处理。     

大田棉花真叶叶柄组织培养特性研究

 利用已建立的叶柄组织培养体系,对大田棉株不同发育时期、不同部位的叶柄进行组织培养研究。叶柄和无菌苗下胚轴愈伤组织诱导培养基为MSB+IAA 0.1 mg·L^-1+KT 0.1  mg·L^-1+2,4-D 0.1 mg·L^-1+Glucose 30 g·L^-1+Gel 2 g·L^-1(pH 5.8);叶柄愈伤组织分化培养基为MSB+IAA 0.05 mg·L^-1+KT 0.05 mg·L^-1+Glucose 30 g·L^-1+Gel 2 g·L^-1(pH 6.5);无菌苗愈伤组织分化培养基为MSB+IAA 0.02 mg·L^-1+KT 0.04 mg·L^-1+Glucose 30 g·L^-1+Gel 2 g·L^-1(pH 6.5)。研究发现棉花主茎叶叶柄、果枝叶叶柄、营养枝叶叶柄在愈伤组织生长速度方面有一定差异,在愈伤组织诱导和分化方面,除严重衰老叶片的叶柄外,其它部位差异不显著。不同来源的胚性愈伤组织在MSB+6-BA 0.05 mg·L^-1+KT 0.02 mg·L^-1+Sucrose 30 g·L^-1+Gel 2 g·L^-1（pH 6.5）培养基上,均能得到胚状体,并获得再生植株。可见棉花叶柄是优良的组织培养外植体。     

棉花农杆菌介导转化体系中影响抗性愈伤组织诱导率的因素

 以冀无2031为材料,采用正交设计方法,研究了农杆菌介导的棉花下胚轴遗传转化过程中菌液浓度、侵染时间、共培养时间和共培养温度对抗性愈伤转化效率的影响。结果表明,4个因素均对抗性愈伤的诱导率有极显著影响,其诱导效应依次是共培养温度>菌液OD值>侵染时间>共培养时间。按照正交设计的原则,最终得到农杆菌介导转化棉花下胚轴的最佳条件是：菌液OD值为0.3,侵染15 min,24 ℃共培养24 h,下胚轴抗性愈伤的转化效率最高。用珂312、中521和农大94-7对所选出的最佳组合进行了进一步验证,结果3个品种在优选组合下的抗性愈伤组织诱导率都很高,分别为93.85%、86.72%和85.83%。     

珂字201胚性愈伤组织cDNA文库的构建和分析

用经过改进的胍盐法提取了陆地棉品种珂字201胚性愈伤组织的总RNA,进而分离了mR-NA,合成了全长cDNA,并将其克隆到λTriplEx载体中,进行体外包装后,成功地获得了cDNA文库.该文库的滴度为2.02×107pfu·ml-1,重组效率在90%以上,插入片段大小范围也符合cDNA文库构建的要求.     

抗生素对白菜型油菜愈伤组织诱导的影响

以白菜型油菜（Brassica rapa）的亚种菜心（Brassica parachinensis）的子叶和下胚轴为外植体,研究了卡那霉素、潮霉素、羧苄青霉素和头孢霉素4种抗生素对菜心子叶和下胚轴愈伤组织诱导和生长的影响,以及羧苄青霉素和头孢霉素对农杆菌LBA4404的抑制效果。结果表明：卡那霉素、潮霉素对菜心子叶和下胚轴愈伤组织的诱导有较强的抑制作用,卡那霉素作为抗性筛选剂,子叶的筛选浓度为10 mg/L,下胚轴的筛选浓度为15 mg/L,潮霉素作为筛选剂,子叶的筛选浓度为8 mg/L,下胚轴的筛选浓度为6 mg/L;羧苄青霉素、头孢霉素对菜心子叶和下胚轴的愈伤组织的诱导影响较小,对农杆菌LBA4404有较强的抑菌作用,作为抑菌剂羧苄青霉素、头孢霉素的浓度以200~400 mg/L为宜。     

降低棉花胚性愈伤褐化研究

在棉花组织培养中,诱导出的胚性愈伤组织转到继代培养基上时,经常出现褐化现象,需要经过3~4次继代培养才能诱导出正常绿色胚状体。实验通过激素和氮源对诱导绿色胚状体的效应研究,认为氮源配比不合适是褐化现象的主要诱因,与KT、6-BA、IAA等激素关系不明显;经过对MS培养基的改良,一次继代就可以获得绿色胚状体,从而缩短了组织培养周期近2个月。