小花棘豆中毒和田羊丘脑-垂体-睾丸轴的病理学观察

以小花棘豆中毒和田羊为研究对象,屠宰后采集试验羊的丘脑、垂体和睾丸组织,测定其脏器指数后检测其显微及超微结构的变化。探讨小花棘豆中毒对雄性和田羊丘脑-垂体-睾丸轴(hypothalamus-pituitary-testis axis,HPTA)形态学的影响,进一步探讨小花棘豆的中毒机理。结果显示,小花棘豆中毒可导致和田羊丘脑、垂体和睾丸指数极显著升高(P0.01),HE染色表明丘脑神经元细胞固缩、浓染;垂体中细胞核变形、浓染,胞浆减少;睾丸曲精细管细胞排列紊乱,管壁变薄,管腔内精子数量减少,睾丸支持细胞和间质细胞均出现明显空泡。透射电镜结果显示,小花棘豆中毒和田羊丘脑中神经元细胞核染色质聚集,线粒体嵴断裂,神经髓鞘端板层离散;垂体中促性腺激素细胞核染色质聚集,线粒体肿胀呈空泡状,内质网扩张;睾丸中精原细胞和精母细胞胞质内线粒体肿胀形成空泡,精子细胞核膜破裂,胞质内线粒体肿胀形成空泡,嵴断裂,部分精子细胞缺少顶体颗粒。小花棘豆中毒可造成雄性和田羊丘脑、垂体及睾丸组织显微和超微结构的改变,表明小花棘豆可通过HPTA影响雄性生殖系统。     

Ⅳ型胶原蛋白在成年牦牛生精小管的定位及分布特征

采用H.E和Masson特殊染色以及免疫组织化学法结合形态计量学统计分析,对成年牦牛(5~7岁)生精小管中的Ⅳ型胶原蛋白进行定位,研究其分布特征.结果表明:睾丸生精上皮结构清晰,有4~8层细胞,胶原纤维分布于生精小管固有膜和间质血管壁上;免疫组织化学染色观察Ⅳ型胶原蛋白在sertoli细胞、各级生精细胞及精子上呈强阳性表达,血管内皮细胞有阳性表达,生精小管基膜及管周肌样细胞为弱阳性表达,而leydig细胞几乎无表达;Ⅳ型胶原蛋白的相对表达量在sertoli细胞及各级生精细胞显著高于在leydig细胞和管周肌样细胞中(P0.05),但在固有膜和管周肌样细胞之间的相对表达量无显著差异(P0.01).Ⅳ型胶原蛋白在成年牦牛睾丸中的分布特征与胶原纤维分布相一致,sertoli细胞和管周肌样细胞在合成及分泌Ⅳ型胶原蛋白中发挥作用.     

乌苏里貉睾丸组织学结构研究

用普通组织学方法,研究了乌苏里貉睾丸一般组织形态学结构、精子发生各个阶段的划分和生精细胞效率。发现乌苏里貉睾丸组织由曲精小管和间质两部分组成。曲精小管部分可见各个发育时期的生精细胞,包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子。生殖细胞位于支持细胞周围,支持细胞发育成熟,血睾屏障明显。曲精小管外包管周肌样细胞,曲精小管之间的间质中可见大而胞质呈嗜酸性的间质细胞。对乌苏里貉睾丸精子发生过程阶段的观察研究发现,乌苏里貉精子发生根据各种生殖细胞形态和精子发生的周期状态,可以划分为8个阶段。支持细胞生精效率低于獭兔和大鼠的,但高于人睾丸支持细胞效率。本研究首次报道了乌苏里貉睾丸一般组织学结构,并对其睾丸的精子发生阶段进行了划分,为研究乌苏里貉雄性生殖机理提供了组织形态学依据。     

中国美利奴羊睾丸生精过程的季节性变化规律研究

用组织学方法对中国美利奴公羊四季睾丸的生精过程研究结果表明,公羊的各级生精细胞数量、精子发生率以及精子日产量等均呈季节性变化,秋季最高,冬春季最低(仅为秋季的60%～70%);繁殖季节与非繁殖季节差异极显着(p<0.001);睾丸中曲细精管直径、生精上皮高度以及生精细胞、内分泌细胞的数密度呈现明显的季节性规律变化。     

间接免疫荧光方法检测小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达

采用间接免疫荧光方法对小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达进行检测.结果表明,小鼠睾丸组织Hsp70呈极强的表达(+++),并且在各级生精细胞及支持细胞都呈极强表达;小鼠附睾头、附睾体、附睾尾的Hsp70呈现极强表达(+++),主要在附睾上皮细胞,而管腔内精子偶见阳性染色.说明间接免疫荧光方法能够特异性、原位地检测小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达,而且操作简单,适用于研究Hsp70在精子发生和成熟过程的作用.     

LN在不同繁殖期蓝狐睾丸组织分布比较

【目的】比较睾丸细胞外基质的重要成分LN在不同繁殖季节蓝狐睾丸中的分布及变化特点.【方法】采用H.E染色法、组织化学法、免疫荧光技术结合IPP形态计量比较分析.【结果】H.E染色表明繁殖间期与繁殖期蓝狐睾丸生精小管内部结构有明显不同,繁殖期蓝狐睾丸生精上皮细胞层数明显多于繁殖间期,精子发育良好,繁殖间期生精小管内无成熟精子.免疫组织化学密度表明,LN在蓝狐不同繁殖期睾丸间质细胞,小血管壁均呈强阳性表达,管周肌样细胞中等表达,阴性对照无表达.免疫荧光表达显示,LN主要表达于间质细胞及管周肌样细胞,平均吸光度统计结果表明,繁殖期较繁殖间期表达显著增高.【结论】蓝狐睾丸LN在生精小管基膜的表达在不同繁殖期变化不明显,但在间质细胞及支持细胞的表达差异显著与季节性繁殖有一定关系,提示LN可能参与间质细胞分泌雄性激素的调节.     

小花棘豆中毒对家兔睾丸生精细胞凋亡的影响

研究小花棘豆中毒对家兔睾丸生精细胞凋亡的影响,进一步探讨小花棘豆的中毒机理。将24只雄性家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30 mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60 mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90 mg/kg)的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂苜蓿干草,试验期70 d。分别于攻毒后第14、35、70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过TUNEL法定位,Hoechst 33258荧光染色细胞核,流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期。从第35天开始,试验组家兔生精细胞凋亡率均极显著升高(P﹤0.01),表现为细胞膜下陷,细胞器浓缩,细胞核碎裂等,并出现凋亡小体。试验组家兔睾丸单倍体细胞和二倍体细胞凋亡率均极显著升高(P﹤0.01),但四倍体细胞数量无显著变化。与对照组相比,中毒家兔睾丸生精细胞G0/G1期数量升高,S期细胞数量降低,而且G1期与S期细胞数量呈显著的负相关。小花棘豆中毒可导致家兔睾丸组织生精细胞凋亡,且与小花棘豆毒性成分呈现一定的时间-剂量效应。     

鲤鱼精子染色方法学研究

用龙胆紫、碱性复红、吉姆萨、甲基绿、苏木精-伊红Y、伊红Y-乙醇、伊红Y-水、伊红Y-苯胺黑等染液对鲤鱼精子进行染色,筛选适宜的鲤鱼精子染色方法.结果表明:采用不干燥固定直接伊红Y-乙醇压片染色的效果最好,染色清晰,精子头尾结构完整;自然干燥固定后再染色,可使鲤鱼精子头膜破裂细胞质漏出,致使精子染色形态模糊不清;4%的甲醛固定后再经自然干燥染色,可以有效避免鲤鱼精子头膜破裂;用1%的NaCl稀释的精液染色后,可清楚地观察到精子形态并区分出畸形精子,用水稀释的精液染色后可观察精子尾膜的完整性;体外活体伊红Y-苯胺黑染色法可以观察出精子头膜的完整性以及精子的损伤程度.     

雌二醇及其受体在北方山溪鲵精巢中的周期性分布

用免疫组织化学方法检测雌二醇(estradiol)及其受体(estrogen receptor)在北方山溪鲵(Batrachuperus tibetanus)精巢发育周期中的表达变化。结果表明,在4~5月,雌二醇及受体在精原细胞的胞质中强表达;6月,雌二醇在精母细胞的胞质中表达较弱,其受体在精母细胞的核质中有较强表达;7月,雌二醇及受体在精子细胞的胞质中表达;8月,雌二醇及受体在精原细胞的胞质中和变态后的精子头部有弱表达;9-11月,两者均在精原细胞的胞质中及精子头部有较强表达。说明雌二醇及其受体存在于整个精巢周期中,二者在生精细胞中的强弱变化基本一致,其变化规律与精子发育周期密切相关;雌激素受体多存在于生精细胞的胞质中,雌激素可能以非基因组效应调控细胞的增殖,并与精子的发育成熟密切相关。     

北方山溪鲵精巢中性类固醇激素的免疫细胞化学研究

探讨3种性类固醇激素在北方山溪鲵精子发育过程中的调控作用.用免疫细胞化学方法对3种激素在山溪鲵精子发生周期不同时期在精巢中的细胞定位进行检测.结果表明雄激素分布在精原细胞的胞质中,尔后转移到精母细胞及精子细胞的核中;雌激素一直存在于生精细胞的胞质及核膜周围;孕激素分布在精原细胞及精母细胞的胞质中,随后在精子细胞的核质中有表达.雄激素在早期的精子发生和转型中起作用,而雌激素主要以非基因组效应参与生精细胞的增殖,孕激素在精子发育后期精子细胞的变态中起作用.3种激素以不同的方式调控精子的发生.     

奶牛乳腺上皮细胞的原代培养

1材料与方法 1．1材料 1．1．1乳腺组织。从屠宰场选取健康的泌乳期奶牛,无菌手术切取乳腺实质组织,置于DMEM／F12完全培养液（含10％胎牛血清、100IU／ml青霉素和链霉素）中,尽快运回实验室。     

“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验”方法的改进与研究

连续3d给小鼠腹腔注射淀粉液,诱导并激活巨噬细胞,使用鱼红细胞为吞噬物,替代细胞实验教材所用的鸡红细胞、羊红细胞,探索和改进实验方法,以便更清晰、有效地观察小鼠腹腔巨噬细胞对外来异物的吞噬作用。取鼠腹腔液制备涂片并固定,用Giemsa染色法进行染色,显微观察巨噬细胞对鱼红细胞的吞噬作用。结果显示,采用鱼红细胞作为吞噬物,细胞染色清晰,吞噬结果明显,可清晰显示大量吞噬鱼红细胞的巨噬细胞,吞噬百分率高,便于实验观察和计数,有助于学生对巨噬细胞吞噬作用的理解和掌握。     

速生杨愈伤组织染色体制片技术

[目的]探索速生杨愈伤组织染色体制片的可行措施。[方法]以中林46号速生杨愈伤组织为材料,取2 mm3左右生长旺盛的愈伤组织块,采用不同的预处理方法、解离及染色方法制备永久封片,对比不同方法的制片效果。[结果]在5种预处理方法中,愈伤组织用4℃冰水预处理24 h或用0.05%秋水仙素在8~16℃条件下预处理6 h时,制片效果较好;在2种解离方法中,酸解和酶解愈伤组织效果相当,较理想;在3种染色方法中愈伤组织用吉姆萨染色2 h左右效果较好,改良苯酚品红染色2 h效果次之,醋酸洋红染色较浅,其显微摄影效果不理想。[结论]用4℃冰水或0.05%秋水仙素预处理、用盐酸或含果胶酶、纤维素酶的甘露醇溶液解离、用吉姆萨染色时,速生杨愈伤组织染色体制片效果较好。     

Androgenesis conditioned by a mutation in maize

A maize embryo having the nuclear constitution of a reduced gametophyte cell is produced in 3 percent of the embryo sacs of inbred strain Wisconsin-23 that carry the mutant indeterminate gametophyte (ig). The nucleus of most monoploid sporophytes so derived is paternal. Such androgenetic monoploids may originate from a sperm nucleus acting in conjunction with the cytoplasm of a maternal cell from which the nucleus has been functionally displaced.     

镉对中间球海胆精子发生的影响

研究了不同浓度镉离子(0.005、0.1、0.5、1.0 mg/L)对中间球海胆Strongylocentrotus interm edius精子发生的影响。结果显示:在光镜下观察,染毒第6、18 d后,各浓度组中间球海胆滤泡结构完好,生殖细胞发育情况同对照组基本一样;染毒第42 d后,0.5、1.0 mg/L Cd2 浓度组生精细胞排列混乱,滤泡膜破损;染毒第54 d后,各浓度组海胆性腺均出现滤泡解体现象。对染Cd2 54 d的0.5、1.0 mg/L组海胆精巢进行超薄切片观察,可见各级生精细胞亚显微结构变化明显,主要表现为核染色质异常凝集,核膜结构损伤,线粒体空泡化,精子形态畸形等。说明镉能影响中间球海胆的精子发生,导致精子质量下降。     

马氏珠母贝精子质量形态评定中不同染色法染色效果的比较

为筛选出适宜于马氏珠母贝Pinctada martensii精子形态分析的染色方法,采用曙红Y和结晶紫染液对不同方法制作的马氏珠母贝精液抹片进行染色,并通过显微镜观察比较染色效果。结果表明：1）采用将精液先抹片后染色（0.8 mg/mL曙红Y染液）的方法时,精子头部着色不完全,染色效果不随染色时间的延长而改善,精子形态特征不明显,故该方法不适于精子形态检测;2）将精液与20 mg/mL的曙红Y染液等体积混合后抹片,精子头部着深红色,尾部着浅红色,精子各部分结构清晰,形态特征明显,背景干净,对比明显;3）用5 mg/mL的结晶紫染液对精液进行渗透染色时,精子形态染色特征明显,头部着深紫色,尾部着浅紫色,背景干净,可较准确地判断精子的形态特征;4）依精子形态对马氏珠母贝精子进行分类,并确定了主要的畸形类型及其特点,马氏珠母贝精子畸形主要集中在精子的颈部和尾部,头部畸形情况较少;5）采用两种染色方法判定的正常精子率之间无显著差异（P〈0.05）,数据稳定,因此,这两种染色方法均可用于马氏珠母贝精子形态的评价中。     

Motility of macrogamonts of Eimeria magna (Coccidia) in cell culture

Amoeboid movement of spheroid or ovoid immature or mature macrogamonts within cultured Madin-Darby bovine cells usually began with the formation of a pseudopodium-like protrusion at the margin of the gamont. The protrusion enlarged as the gamont cytoplasm and nucleus moved into the protruded area. During movement, macrogamonts had an elongate shape. The body of the gamont was constricted as it moved through the cell cytoplasm or from one cell to an adjacent one. After movement had ceased, the gamont resumed its ovoid or spheroidal shape.     

多倍体西瓜染色体制片技术改良及其核型分析

[目的]改良多倍体西瓜染色体标本制片技术,比较多倍体西瓜常规核型分析与荧光核型分析结果,为西瓜细胞遗传学研究及辅助构建西瓜物理遗传图谱提供参考依据.[方法]以多倍体西瓜为材料,以传统染色体制片方法去壁—低渗火焰干燥法为基础,去掉其前低渗和后低渗两个步骤,合并其再固定与火焰涂片两个步骤,用吉姆萨染色剂和荧光染料DAPI分别对多倍体西瓜染色体进行常规染色和荧光染色,并进行核型分析.[结果]使用改良型酶解去壁火焰干燥法进行多倍体西瓜染色体制片,比传统去壁—低渗火焰干燥法简化了用KCl溶液前低渗、后低渗及用卡诺固定液再固定3个步骤,可缩短制片时间1.0~2.0 h,提高制片效率,获得的染色体样本数目齐全、分散良好、形态清晰.用DAPI染色比用吉姆萨染色更容易检测到细胞中期分裂相,每张玻片可缩短检测时间0.5~1.5 h;染色体的着丝点、长臂及短臂形态更清晰.[结论]采用改良染色体制片方法可提高多倍体西瓜染色体的制片效率,对该制片进行荧光核型分析比常规核型分析更准确,效率更高.     

猪颗粒细胞中Ran的定位及作用

试验成功地培养了猪颗粒细胞,并采用激光共聚焦显微技术研究细胞有丝分裂过程中Ran的定位变化。结果表明,猪间期颗粒细胞中,Ran主要分布于细胞核内,核仁内没有Ran分布,细胞质中Ran浓度极低。核膜破裂,细胞进入有丝分裂,Ran分布到整个细胞,但在染色体周围浓集;在有丝分裂中期,浓集区形态和纺锤体的形态一致;在有丝分裂后期和末期,Ran的浓集区随纺锤体的拉长而分布于被分开的两组染色体之间;有丝分裂结束后,随着细胞核的形成,Ran在染色体周围浓集,核膜形成后又浓集于细胞核内,在整个有丝分裂中,Ran在细胞分裂区的细胞膜下未见特殊分布。这些分布与Ran在细胞周期中的作用是一致的。