ELISA和PCR方法在香蕉病原检测中的应用

应用ELISA和PCR方法对香蕉病样进行BBTV、CMV、BCV病原检测。结果表明,病样在ELISA反应中对BBTV和CMV表现为阳性,对BSV表现为阴性;而在PCR反应中,对上述3种病毒均表现为阳性。初步研究认为,该病可能是由BBTV和CMV 2种病毒复合侵染所致。     

PCR和ELISA在食源性致病菌检测中的应用

阐述了PCR和ELISA这两种技术在食源性致病菌检测中的研究,并对这两种方法特点与应用进行了探讨。     

PCR技术在食源性病原微生物检测中的应用

PCR技术具有敏感、专一等特点,不仅可以对病原微生物进行特异性识别,而且可以鉴别同一种类病原微生物的致病性菌株和非致病性菌株,因此应用PCR技术进行病原微生物的检测具有十分独特的优势。本文对PCR技术在食源性病原微生物检测中的研究与应用情况进行了综述。     

PCR相关技术在植物病原细菌检测和鉴定中的应用

PCR及其相关技术用于体外扩增DNA、RNA具有灵敏、快速、简便等优点,已经广泛应用于植物病原细菌的检测.本文综述了real-time fluorescent PCR、REP-PCR、Immuno-RCR、RAPD-PCR、Nested-PCR等技术的原理及其在植物病原细菌检测和鉴定中的应用现状.     

多重PCR技术在动物病原检测中的应用

多重PCR技术是近几年兴起的一项新技术,具有高效快捷、高度特异敏感、实验成本低等优点,能够同时扩增出多个核酸片段,具有普通PCR方法不可比拟的优越性。文章主要论述了多重PCR技术的影响因素、条件优化以及多重PCR技术在动物病毒病原体、细菌病原体、动物产品及寄生虫和微生物耐药性等方面的检测应用,指出当前应用PCR技术对动物疫病病原诊断中存在的问题,并提出了解决问题的方法。     

海南香蕉叶脉坏死病病原检测

应用ELISA和PCR技术对香蕉叶脉坏死病病样进行病原检测。结果显示：病样在ELISA 反应中对BBTV 和CMV 表 现为阳性,对BSV 表现为阴性;而在PCR 反应中,对上述猿种病毒均表现为阳性。初步研究认为袁该病可能是由BBTV 和CMV 两种病毒复合侵染所致。     

应用PCR技术检测柑桔黄龙病病原的研究

应用ＰＣＲ技术检测柑桔黄龙病病原的研究邓晓玲唐伟文（华南农业大学植物保护系，广州，５１０６４２）ＴＨＥＳＴＵＤＩＥＳＯＮＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＣＩＴＲＵＳＨＵＡＮＧＬＯＮＧＢＩＮＰＡＴＨＯＧＥＮＢＹＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥＣＨＡＩＮＲＥＡＣＴＩＯＮＤｅｎ...     

PCR和ELISA法检测畜禽类乙型肝炎病毒的研究

从河南省部分地区收集鸡血清３１２份，猪血清２０４份，奶牛血清２００头份，分别用人乙型肝炎“两对邓ＨＢｓＡｇ，抗－ＨＢｓ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ抗－ＨＢｃ试验盒检测。然后取经”两对半”系统检测有“＋”的鸡血清２６份，猪血清２５头份，奶牛血清２５头份，人血清４份，进行ＰＣＲ扩增，其扩增片断选择以ＨＢＶ－ＤＮＡ相对保守区域，扩增后的产物电泳３０ｍｉｎ，紫外灯下观察６００ｂｐ的片断为阳性，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳     

一步双重PCR检测香蕉枯萎病菌

摘要：通过设计尖孢镰刀菌ITS区特异引物PR1/PR2和SCAR特异引物ST1/ST2,优化检测体系中反应参数,建立了双重PCR检测香蕉枯萎病菌1号生理小种和4号生理小种的方法。结果表明：引物PR1/PR2和ST1/ST2能明确鉴别香蕉枯萎病菌1号生理小种和4号生理小种,检测体系的最佳退火温度为56 ℃,检测灵敏度的最低起始DNA为20 ng。     

PCR法检测香蕉束顶病毒

用3种方法，提取来自漳州的香蕉束顶病病叶组织中的DNA，并以此为模板，用台湾大学及美国夏威夷大学的4种引物进行PCR检测，通过2种反应成分、3种循环参数的选择试验建立了PCR反应体系，并发现用CTAB法提取到的模板DNA无论质量、数量都较高，用于PCR扩增，反应灵敏且效果好，可以从5μg的香蕉病叶组织中检测到BBTV。     

猪圆环病毒病的血清学及病原学检测

为贵州猪圆环病毒病的防治提供参考依据,对贵州省花溪区、息烽县和织金县3个地方3个猪场疑似猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染发病猪进行临床初步诊断,并分别采集6份血清及组织病料,采用ELISA和PCR技术对18份样品进行PCV2的血清学和病原学检测。结果表明:花溪、息烽、织金3个区(县)的PCV2阳性率分别为33.3%、83.3%和66.7%,3个猪场均出现了PCV2病毒感染,猪圆环病毒贵州流行毒株与Shanghai-06株的亲缘关系最近。     

云南香蕉细菌性软腐病病原鉴定

为了明确引起云南香蕉细菌性软腐病的病原菌,为该病害防控提供基础,在植蕉区采集香蕉细菌性软腐病病害标样,对病原菌进行分离、致病性测定、寄主范围测定、形态学观察、生理生化反应及16S rDNA序列分析。结果表明：分离获得的菌株均有致病性,病原菌形态特征、寄主范围、生理生化测定结果与Erwinia chrysanthemi相符。16S rDNA序列分析表明：代表性菌株的测序结果与E.chrysanthemi（序列登录号：GU811708）的同源性达到99%以上,系统发育树分析结果与之一致,表明引起云南香蕉细菌性软腐病的病原菌为菊欧氏杆菌（E.chrysanthemi）,该病害是近年来发生在云南植蕉区的一种新病害。     

ELISA和PCR检测在小麦矮腥黑穗病研究中的应用初探

应用ELISA和PCR方法对小麦腥黑穗病菌进行检测研究。利用HRP酶标记的第二抗体(羊抗兔抗体)与结合抗原的兔抗小麦矮腥抗体相结合,通过显色反应来区别正常小麦与染病小麦。根据Genbank的DNA的序列设计了特异性引物,通过PCR方法区分小麦矮腥黑穗病、光腥黑穗病和网腥黑穗病。     

海南香蕉束顶病和花叶病的PCR检测

用CTAB法从感染束顶病（BBTV）的海南香蕉叶片组织中提取DNA,以此为模板分别用特异引物对BBTV的组分Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ进行扩增并测序,结果得到大小分别为607、490和326bp的特异片断;用CTAB法从感染花叶病（CMV）的病叶组织中提取RNA,反转录成cDNA,以此为模板用特异引物进行扩增测序,结果得到大小为557bp的特异片断。用PCR方法可从相当于100ng的叶片组织中检测到BBTV和CMV。     

甘蔗白条病(Xanthomonas albilineans)PCR,ELISA,DIA检验技术研究(英文)

应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测甘蔗白条病（Ｘ．ａｌｂｉｌｉｎｅａｎｓ）蔗茎无症带菌样品和纯培养及总ＤＮＡ;并以改良半选择性培养基（ｍＸＡＭ）定量．比较了ＰＣＲ,ＥＬＩＳＡ,ＤＩＡ的检测效率和可靠性．表明ＰＣＲ能够特异性检出白条黄单胞包括标准菌株３３９１５ＡＴＣＣ和血清型Ｉ,Ｉ等１９个菌株．但是不能扩增其它５个分离自蔗茎的腐生黄单胞和１３个其它属种的植物细菌．能够检出少至１０ｐｇ靶细菌总ＤＮＡ或２０个活细菌．ＰＣＲ检测灵敏度较ＥＬＩＳＡ和ＤＩＡ高１００～１０００倍．田间样品检测结果与实际发病符合度为９３．４６％．这一分子检测技术适用于国内外甘蔗种质资源交换和口岸检疫以及病害流行学研究     

香蕉细菌性枯萎病菌实时荧光PCR检测方法的建立

根据香蕉细菌性枯萎病菌与其它细菌菌株16SrDNA序列差异，设计并合成一对引物和一条具有稳定点突变特异性探针，建立了对香蕉细菌性枯萎病菌的实时荧光PCR检测方法。除烟草青枯病菌和马铃薯青枯病菌外，还对其它属细菌菌株进行了荧光PCR检测。结果表明，只有香蕉细菌性枯萎病菌产生荧光，其它细菌都没有荧光产生。从而证明此方法特异性强，灵敏度高，适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用。     

甘蔗黑穗病菌DNA提取及PCR检测

本研究利用尿素混合液直接从甘蔗黑穗病菌孢子提取基因组DNA进行PCR检测鉴定,经过反复试验,建立了一种简便、快速的检测鉴定方法。利用建立的方法对12个甘蔗黑穗病样品进行病菌基因组DNA提取,将甘蔗黑穗病菌特异性引物进行PCR检测,均扩增出大小为420 bp的预期DNA片段条带。PCR扩增产物经克隆测序,与GenBank数据库中的甘蔗黑穗病病原菌序列比对,同源性达99%。     

香蕉枯萎病镰刀菌ITS序列的PCR扩增及其分子检测

根据香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)ITS序列设计合成的三条引物:FusF1(5′AACCC CTGTGAACATACCACTTG3′)、FusR1(5′GAGGAACGCGAATTAACGCGAC3′)和FusR2(5′GACGATTACCAGTAGCGAGGGT3′)构成引物对A(FusF1/R1)和B(Fus F1/R2),对尖廉孢菌古巴专化型病菌进行PCR特异扩增试验,结果表明,两对引物对引起香蕉枯萎病的镰刀菌全基因组DNA分别有338bp和408bp的特异扩增产物;在镰刀菌种以上的阶元有较好的分辨力;对目标菌株的检测下限分别是A(100fg)、B(10pg);而且B对香蕉感染枯萎病的病组织有相应的扩增产物,表明该引物对可用于香蕉枯萎病的早期鉴定和病原菌的检测。     

两种鮰爱德华菌ELISA快速检测方法的建立与应用

为了对水产动物致病菌鮰爱德华菌进行早期、快速地检测,以鮰爱德华菌单克隆抗体5D11作为检测抗体,分别建立了间接ELISA和竞争ELISA两种快速检测鮰爱德华菌的方法,并用棋盘滴定法进行了条件的优化。结果显示,间接ELISA实验中采用37℃过夜这种包被方法能有效促进酶标板对细菌的吸附作用,单克隆抗体和二抗的最佳稀释倍数分别为1∶80和1∶1 000,病原菌的检测灵敏度为5×106 cells/mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,并且可用于对鮰爱德华菌标准菌株及其分离株的快速检测;同时采用棋盘滴定法确定了竞争ELISA实验中包被抗原-抗体最佳工作组合为5×108~1∶80、抗体和竞争抗原比例为3∶7,并制作出了相关系数为0.990 1的标准曲线,该方法特异性强,最低检出限106 cells/mL,可在一定范围内对鮰爱德华菌进行定性和定量检测,弥补了间接ELISA的不足。