中国北方番茄主要病毒种类普查及TMV、CMV株系鉴定

1990—1994年,对中国北方15省(市)番茄4种主要病毒种类进行了普查,在3761份样本中,烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的检出率分别为34.5％—65.7％和11.6％—62.6％,马铃薯X病毒(PVX)和马铃薯Y病毒(PVY)的检出率一般为10％—20％。与此同时,也对番茄上的TMV和CMV进行了与抗病毒育种紧密相关的株系分化研究,在333个TMV分离物中鉴定出0、1、2和1.2株系,以0和1株系为主,在绝大多数省(市)中分别占分离物的50％和30％以上;在232个CMV分离物中鉴定出轻花叶、重花叶、坏死和黄化株系,以轻花叶和重花叶株系为主,在绝大多数省(市)中分别占分离物的30％和50％以上,这一研究结果为番茄病毒病的综合防治和抗病毒育种提供了科学依据。     

中国北方六省(市)侵染番茄的烟草花叶病毒株系鉴定

本文引进含有不同抗TMV基因的GCR系统番茄品种(系)作为TMV株系的鉴别寄主,将我国北方6省(市)TMV分离物分成亲缘关系相近的4个株系。并对该株系鉴定方法的特点进行了探讨。     

一种侵染桃树的烟草花叶病毒(TMV)的分离鉴定

 从北京地区具有红叶及叶片侧脉失绿等综合症状的桃病株上分离到一种杆状病毒分离物P-1,初步鉴定为一TMV株系;制备抗血清微量沉淀法测定效价为1:1024,并应用于田间样品检测;提纯P-1分离物回接毛桃实生苗后,在上部叶片出现脉间失绿症状,用P-1抗血清作ELISA检测为阳性,肯定了TMV对桃的侵染及致病作用。     

对一株从国际花展截获的烟草花叶病毒抗原决定簇的分析

从北京国际花展上截获烟草花叶病毒(TMV)仙人指分离物,与仙人掌病毒复合感染仙人指,使原来生长很好的仙人指,短期内发生急性坏死,并导致仙人指死亡。为了解分离物的抗原特性,在用常规血清学方法鉴定的基础上,又采用单克隆抗体进一步与TMV中、日、美六个典型株系进行比较鉴定。结果表明该分离物的抗原性接近中国番茄和日本番茄株系,但在外壳蛋白表面抗原结构上,尚有细微的差异,而与OM株,U_1株,中国普通株及U_2株有较大的差异。     

15种植物的单宁提取物对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用

 测定了15种植物的乙醇粗提物对TMV的体外抑制作用,其中11种具有明显效果,这11种植物粗提物经水/氯仿萃取,水萃取物具有明显抑制TMV效果,而氯仿萃取物抑制效果差。水萃取物用明胶去除单宁后,基本失去抑制TMV的能力,表明单宁在其中起着重要作用。从杠板归与假槟榔种子中提取的总单宁对TMV具有明显的抑制作用;病毒粒体样品在分别加入这2种植物总单宁后,电镜下表现为聚集结合;TMV分别与这2种植物的单宁混合后,通过透析,可恢复大部分侵染力,表明单宁对病毒并无直接毒害作用;TMV外壳蛋白(CP)与单宁混合后,在蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳中表现为结合现象;单宁对TMV体内抑制复制效果不明显;单宁在接种TMV前后施用并没有降低TMV侵染力;这些结果表明这2种植物单宁对TMV抑制作用可能是与TMV-CP结合而引起病毒侵染力下降或影响病毒CP对侵染位点的识别。     

毒株、苗龄及温度对烟草苗期接种TMV试验的影响

 病毒株系、苗龄、接种后培养条件是影响烟草病毒病发生发展的关键因素,为确保烟草接种TMV抗性鉴定和药效生测试验的准确性,在N基因烟草和普通烟草上接种TMV,采用病毒生物学、qRT-PCR和Western blot技术,研究病毒的分离纯化、株系、稀释限点、传导路径、病害症状,以及N基因抗TMV的温敏性。结果显示,TMV为U1株系,在K326上活体保存50~65 d,仍具有较强的致病力,稀释限点为10⁵,接种物浓度以10²稀释为宜。接种后TMV先由接种叶传导到主茎,向下至根、向上至心叶,然后是上部叶,最后传导至下部叶,12~16 d布满全株,21~28 d花叶畸形显著,病情调查宜在2~3周内。温度和苗龄影响N基因烟草对TMV的抗性反应,培养温度应在25℃~27℃,苗龄以6~7叶期为宜。     

广西烟区普通花叶病毒（TMV）的系统发育分析

广西烤烟生产因受到普通花叶病毒（TMV）感染的影响,产量和品质均遭受严重损失。为了掌握广西烟区TMV的多样性,解释其发生规律,本研究在广西壮族自治区贺州市、百色市和河池市的8个地点收集了17个仅感染TMV的烟叶样品。经过总RNA提取和逆转录得到对应的cDNA,针对TMV外壳蛋白区域设计了1对引物,经PCR扩增获得广西烟区17个TMV样品的外壳蛋白完整序列。基于TMV外壳蛋白核苷酸序列的系统发育分析结果表明,广西烟区的TMV存在着不同于我国其他地区的独特类群,在广西不同地区之间,贺州的TMV具有很近的亲缘性,来源相对单一,而百色的TMV则具有很高的多样性,体现了TMV传播途径的差异。研究结果可为广西烟区不同地区TMV的绿色防控提供参考。     

TMV侵染不同抗性番茄品种之后引起的过氧化物酶活性及同工酶的变化

 本文论述了不同抗性番茄品种在接种了TMV之后体内过氧化物酶及其同工酶的变化趋势。不同品种番茄幼苗接种TMV之后30天内病毒含量、过氧化物酶活性及其同工酶的测定结果表明:所有接种的番茄幼苗与健株对照相比均表现酶活性的增强及酶带数目的增多;但不同抗性品种,酶活性交化曲线及同工酶谱带的变化趋势有所不同:感性品种北京早红(+/+)及耐病品种强力米寿接种TMV之后,病毒含量迅速上升,在第15天达到最高峰,同时植株开始显症,其酶活性曲线呈现出1个增值高峰,即酶活性只在显症之后迅速上升于第24天达到最高峰,病株在症状发展过程中产生2条健株所没有的具高迁移率的同工酶谱带A与B。抗性品种Tm-2(Tm-2/+)抑制TMV在体内的增殖,在接种之后30天内植株不表现典型外部症状,其酶活性曲线具有2个增酶高峰,即在接种后第12天达到最高峰,并在第21天有1个新的高峰;在酶活性高峰期,接种植株也产生同工酶谱A与B,与感性品种不同的是谱带A与B形成较早,同时,抗性品种还产生感病品种所没有的1条同工酶谱带F。上述过氧化物酶活性及同工酶的变化趋势可以成为鉴定品种抗性一个有价值的生化指标。     

一种病毒抑制物质NS-83的研制及其对番茄预防TMV初侵染的研究

 本文论述了几种长链醇和长链酸,在番茄上对TMV初侵染的抑制作用。测试了壬醇、癸醇、十一(烷)醇、十二(烷)醇、十四醇、十六醇、十八醇等长链醇。试验的脂肪酸有二十二酸、二十二酸钠、混合脂肪酸和NS-83制剂。菜籽油中的脂肪酸含有1.1%二十二酸、35~36%顺-二十二烯-13酸(芥酸)、11~12%花生酸、12.4~12.7%亚麻酸、12.7~12.9%亚油酸、11~11.3%油酸、2.5%二十四烯酸、2%花生烯酸、4%木焦油酸、1.8~2%硬脂酸和3.1%软脂酸。这些脂肪酸的混合剂对侵染番茄的TMV的抑制作用与纯二十二酸单独的抑制作用相接近。NS-83制剂是由混合脂肪酸制备,防病效果更好,与目前其他一些抑制物质相比较,成本低廉,可用于防治番茄病毒病。此外,这种抑制物质似具有诱导番茄对TMV的初侵染以及对TMV和CMV产生耐病性的能力。其实际效果的机理,有待进一步试验,加以证明。     

引起辣椒黄白花叶、内卷的一个病毒分离物的鉴定

 从新疆石河子地区辣椒病毒病株上分离到一株病毒PV分离物。测定表明能侵染6科34种植物,引起辣椒局部褪绿斑和圆环,系统白色至黄色花叶,内卷和矮化。桃蚜不能传毒;钝化温度65~70℃,稀释限点10^-4~10^-5,体外保毒期3个月以上;病毒颗粒杆状,大小258×16nm;外壳蛋白分子量18.0 KD;琼脂双扩散和交互保护反应测定PV与烟草花叶病毒(TMV)关系密切;电镜下观察到辣椒病组织中含有病毒粒子的集结体、假晶体、叶绿体内的网膜状结构和分散的病毒粒子。初步认为该分离物是TMV,但寄主反应、粒体大小、致死温度和异常内含体与文献报道的TMV各分离物有所不同,可能是TMV普通株系的变异体。     

链霉菌HNS2．2代谢产物对TMV的抑制作用及活性成分分析

为探明链霉菌HNS2．2代谢产物中的抗TMV成分,通过活性跟踪、利用柱色谱分离到其活性成分,然后借助核磁共振和质谱鉴定活性成分的化学结构,并使用半叶枯斑法测定各化合物抗病毒的活性。结果表明,该菌株发酵液粗提物稀释100倍时,对TMV表现出明显的体外抑制作用,在蔓陀罗Daturastramonium上的枯斑抑制率为66．7％。从其代谢产物中共分离鉴定4个化合物,即槲皮素（quercetindehydrate）、对羟基苯丙酸、4’-羟基黄烷酮（4＇-hydroxyflavanone）和3．羟基黄酮（3-hydroxyflavone）。浓度为10mg·mL_的槲皮素对TMV病毒的体外抑制效果最好,在蔓陀罗上枯斑抑制率达到89．12％;其余3个化合物的抑制率分别为19．87％、53．03％和51．20％。     

青蒿中番茄斑萎病毒和烟草花叶病毒的分子鉴定及相关序列分析

番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)和烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)是2种重要的植物病原病毒, 对多种经济作物的产量和品质均造成严重影响。2021年-2022年, 在云南省丽江市烟草种植区不同烟区采集叶片黄化、皱缩以及无症状的青蒿Artemisia caruifolia样品共计14份, 利用免疫金标速测卡和RT-PCR对其病原病毒进行检测。利用免疫金标速测卡检测结果显示, 在所检样品中有9份样品检测出TSWV, 检出率为64.28%, 有3份样品检测出TMV, 检出率为21.43%, 2种病毒复合侵染的检出率同样为21.43%;利用RT-PCR对复合侵染的3份样品进行分子检测, 结果显示, 在3份复合侵染青蒿样品中获得3条TSWV N基因序列、3条TMV cp基因序列和2条TMV RdRp部分序列。TSWV青蒿分离物与分离自云南的TSWV-2分离物相似性最高, 为99.6%;TMV青蒿分离物与分离自辽宁的TMV-Shenyang分离物和分离自云南的TMV-Yongren-1相似性最高, 均大于99.4%。这是首次发现TSWV和TMV 2种不同属病毒复合侵染青蒿。     

耐病毒诱导剂NS-83防治番茄病毒病

烟草花叶病毒(TMV)是番茄病毒病的主要毒原之一,NS-83可钝化TMV,并抑制其侵染,用100倍水稀释后喷定植前后的番茄苗,能诱导激发番茄抗、耐病性增强,和刺激番茄生长。4年来,已在晋、冀、豫、辽、川、内蒙等6省、自治区的10个生产品种上试用,都取得了防病增产效果。     

进境番茄种子中番茄花叶病毒的检测与鉴定

利用双抗夹心 酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)和反转录 聚合酶链式反应（RT-PCR）方法对来自韩国的番茄种子进行种传病毒检测。结果表明,在该批番茄种子中检测到番茄花叶病毒（ToMV）和烟草花叶病毒（TMV）。PCR产物测序结果表明,ToMV特异引物（ToA/ToB）与TMV特异引物（TA/TB）扩增的片段均为ToMV的外壳蛋白（CP）基因及3′非编码区（3′ UTR）,该片段与其他ToMV分离物的核苷酸序列相似性为98.2%~99.9%。本研究利用重新设计合成TMV和ToMV特异引物对该批种子进行RT PCR检测,仅ToMV特异性引物（ToMf1/ToMr1）扩增到670 bp的预期片段,TMV特异引物（TMf1/TMr1）则未出现特异性扩增,表明重新设计的引物可准确区分ToMV和TMV。以上结果证实该批番茄种子仅携带ToMV。     

番茄花叶病毒番茄分离物与烟草花叶病毒蚕豆分离物生物学、血清学比较及PCR特异性检测

 对番茄花叶病毒番茄分离物(ToMV-To-S1)和烟草花叶病毒蚕豆分离物(TMV-B935A)进行了生物学和血清学比较。人工接种6科20种植物,这两个分离物均能侵染其中的3科14种植物,但在普通烟(白肋烟、黄苗榆)上的症状差异较大,前者在这些植物上引起局部症状,后者为系统症状。在琼脂双扩散试验中,两者与ToMV-To-S1抗血清和4种TMV抗血清均形成沉淀线,但沉淀线之间产生刺角,说明ToMV-To-S1和TMV-B935A虽有血清关系,但亦有差异。胶内交叉吸附试验也证明两者之间有血清学差异。根据已报道的ToMV-L株系和TMVU1株系CP基因的3'端非编码区序列设计了ToMV和TMV特异引物,采用PCR方法,这些引物能够特异性的检测区分ToMV-To-S1和TMV-B935A。     

番茄花叶病毒番茄分离物与烟草花叶病毒蚕豆分离物生物学、血清学比较及PCR特异性检测

 对番茄花叶病毒番茄分离物(ToMV-To-S1)和烟草花叶病毒蚕豆分离物(TMV-B935A)进行了生物学和血清学比较。人工接种6科20种植物,这两个分离物均能侵染其中的3科14种植物,但在普通烟(白肋烟、黄苗榆)上的症状差异较大,前者在这些植物上引起局部症状,后者为系统症状。在琼脂双扩散试验中,两者与ToMV-To-S1抗血清和4种TMV抗血清均形成沉淀线,但沉淀线之间产生刺角,说明ToMV-To-S1和TMV-B935A虽有血清关系,但亦有差异。胶内交叉吸附试验也证明两者之间有血清学差异。根据已报道的ToMV-L株系和TMVU1株系CP基因的3'端非编码区序列设计了ToMV和TMV特异引物,采用PCR方法,这些引物能够特异性的检测区分ToMV-To-S1和TMV-B935A。     

烟草花叶病毒六个分离物生物学性状初步研究

 测定了番茄条斑分离物(TMV-L₁)、番茄花叶分离物(TMV-L₂)、小青菜花叶分离物(TMV-B₁)、大白菜灰心病分离物(TMV-B₂)、地黄病毒病分离物(TMV-R)和烟草花叶分离物(TMV-N)在22科82种植物上的反应。六个分离物在心叶烟、曼陀萝等7种植物的接种叶上出现局部枯斑、在番茄,龙葵等9种植物上出现系统花叶,在White Barley烟,青箱等10种植物上反应的症状不同,在测试的十字花科植物、菊科等22种植物上六个分离物的侵染力不一致,部分分离物能够侵染,部分分离物不能侵染。对百合科、大麻科等11个科中的测试植物都没有侵染力。六分分离物中只有TMV-B₁和TMV-B₂寄主范围基本一致,仅症状轻重不同。     

烤烟‘K326’抗TMV防御物质初探

烤烟主栽品种‘K326’在打顶后,随着次生代谢产物的积累,烟草花叶病症状呈减轻趋势。本试验利用半叶枯斑法对‘K326’的全株、根、茎、叶甲醇提取物及根部不同极性溶剂萃取物进行抗烟草普通花叶病毒活性筛选,结果表明:在浓度为1mg/mL时,‘K326’各部位甲醇提取物中,根部甲醇提取物的活性最强,对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制率分别为74.50%、68.82%和47.76%;利用不同极性溶剂对根部甲醇提取物萃取处理后,乙酸乙酯萃取物活性增强明显,对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制率分别为76.81%、78.02%、61.42%;经普通烟‘K326’进一步验证,根部甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物活性最强。综上,‘K326’中抗病毒防御物质可能存在于根部甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物中。     

辽宁番茄花叶病毒株系研究简报

1985—1987年,从辽宁南部及沈阳郊区采集111个番茄花叶病样本,经测定主要为番茄的烟草花叶病毒(TMV,占总调查样本的59.46％);21.62％为TMV与黄瓜花叶病毒(CMV)混合侵染。实验证实:番茄上TMV,其汁液钝化温度90—94°C(10     

侵染广西番茄的番茄黄化曲叶病毒的分子鉴定

番茄黄化曲叶病毒病是番茄生产上的毁灭性病害,严重影响番茄产量及品质。2019年从广西百色市采集疑似番茄黄化曲叶病叶片样品,采用滚环扩增(RCA)及基因克隆等方法,获得了4个烟粉虱传双生病毒的全基因序列,4个分离物的全长序列分别为2 776、2 781、2 752、2 781 bp,均编码6个开放阅读框;核苷酸相似性比较发现,4个分离物彼此间的相似性均在90%以上,与已报道的番茄黄化曲叶病毒Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV)各分离物间的相似性也在91%以上;系统进化分析表明,TYLCV广西分离物BS-2和BS-4与TYLCV-Hunan、BS-1和BS-3与TYLCV-YN6553等分离物处于独立的小分支,说明TYLCV广西分离物与TYLCV-Hunan、TYLCV-YN6553具有较近的亲缘关系。本研究首次报道TYLCV在广西发生。