外源茉莉酸对大豆异黄酮的影响

摘下生长8天的大豆子叶,在不同浓度茉莉酸溶液中浸泡一定时间,用甲醇提取大豆异黄酮,经高压液相色谱(HPLC)测定,研究子叶表面伤口、浸泡时间以及茉莉酸浓度对大豆异黄酮的影响.结果显示:在对照组(0.1%乙醇),子叶表面的伤口不影响异黄酮的分配比例;而用茉莉酸浸泡组,健康子叶中几乎不存在游离型的大豆甙元和染料木黄酮;丙二酰大豆甙和丙二酰染料木甙所占比例随着浸泡时间的延长而下降,大豆甙元和染料木黄酮所占比例随浸泡时间的延长而增加,大豆甙和染料木甙所占比例不随浸泡时间而变化;20μM茉莉酸溶液浸泡的子叶中异黄酮总量最低.     

大豆异黄酮甙元对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响

大豆异黄酮通过促进肿瘤细胞凋亡可抑制多种肿瘤细胞的增殖.从大豆提取大豆异黄酮糖甙,再将其部分水解成其甙元,研究大豆异黄酮甙元抑制结肠癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用.采用MTT比色法观察大豆异黄酮甙元对结肠癌HT-29细胞增殖的影响,采用TUNEL染色法检测其对HT-29细胞凋亡的影响,采用免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2和p53的表达.结果表明:大豆异黄酮甙元可在20～80 mg·L-1范围内时间和浓度依赖性地抑制结肠癌HT-29细胞增殖和诱导细胞凋亡.用40 mg·L-1大豆异黄酮甙元作用结肠癌HT-29细胞72 h时,细胞生长抑制率为(57.1±4.9)%,其对肿瘤细胞凋亡率为(20.9±2.1)%.免疫组化结果还显示,大豆异黄酮甙元可显著性增加HT-29细胞凋亡相关基因bax蛋白表达和降低bcl-2表达.提示,大豆异黄酮甙元可通过诱导结肠癌细胞凋亡发挥抗结肠癌作用.     

不同光照条件下大豆体内异黄酮的含量与分布

用ＨＰＬＣ检测了不同光照处理大豆组织中异黄酮的含量。结果显示：幼苗子叶异黄酮含量大大高于叶片和根中的含量;光照处理后,子叶中异黄酮的含量降低,而叶片和根中的异黄酮含量上升;异黄酮含量较低的品种,幼苗光照后子叶中异黄酮含量上升较多。幼苗子叶中的异黄酮以大豆甙和染料木甙及其丙二酰衍生物为主,叶片中主要含有染料木甙及其丙二酰衍生物,根中异黄酮组分以丙二酰大豆甙为主;异黄酮组分因品种不同显示出一定差异。     

高效液相色谱(HPLC)技术检测大豆异黄酮含量

利用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）技术分离并测定了大豆中异黄酮各组分含量，建立了快速、有效的分离、检测异黄酮含量的方法。结果显示，异黄酮的最适提取时间是２－３ｈｒ；最适检测波长为２６０ｎｍ；在一定的浓度范围内，标准样品Ｄａｉｄｚｉｎ和Ｇｅｎｉｓｔｉｎ作为异黄酮的检测标准是准确的；提取和检测温度对异黄酮组合含量有很大影响，在８０℃或更高的温度条件下，丙二酰基结合体可水解为相应的甙或甙元的形式。     

农杆菌介导的大豆子叶节和下胚轴转化方法的比较及优化

以东农50、东农42和黑农44的子叶节和下胚轴为外植体,对农杆菌介导的大豆子叶节和下胚轴2种转化方法进行了比较和优化.结果表明:不同转化方法对大豆的品种要求不同,东农50适合子叶节转化法,而黑农44适合下胚轴转化法.在子叶节转化体系中,卡那霉素的筛选浓度是100 mg·L-1,在下胚轴转化体系中,卡那霉素的筛选浓度是75 mg·L-1,可见下胚轴体系比子叶节体系在卡那霉素筛选过程中表现得更为敏感.在子叶节和下胚轴转化体系中,最适乙酰丁香酮浓度均为200 mol·L-1,最适共培养时间均为3 d.在子叶节转化体系中,5 d苗龄时转化率最高,而下胚轴转化体系中,4～6 d苗龄时转化率均较高,以6 d苗龄最高.     

大豆异黄酮甙元抗脂质过氧化作用的研究

从大豆提取大豆异黄酮糖甙,再将其部分水解成其甙元,研究其体外抗氧化能力.用T-AOC方法测定化学模拟体系中的总抗氧化能力,用八木变法测定过氧化脂质(LOOH)含量,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量,用分光光度法测定红细胞溶血和肝线粒体膨胀程度.结果表明:大豆异黄酮甙元的体外总抗氧化能力较强,可抑制血浆及肝组织脂质过氧化,减少红细胞溶血和减轻肝线粒体膨胀程度.说明大豆异黄酮甙元具有抗脂质过氧化作用.     

大豆异黄酮和皂甙对结肠癌细胞增殖和凋亡的研究

从大豆胚轴提取大豆异黄酮和皂甙,研究大豆异黄酮和皂甙抑制结肠癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用.采用MTT比色法观察大豆异黄酮和皂甙抑制结肠癌细胞增殖,采用流式细胞仪检测大豆异黄酮和皂甙对HT-29细胞周期分布的影响,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2和p53的表达.结果表明:大豆异黄酮和皂甙可时间和浓度依赖性地抑制结肠癌细胞增殖;诱导细胞凋亡和改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于G/2M期;与对照组比较,细胞凋亡率显著增加;用药前后凋亡相关基因bax蛋白表达显著增加,bcl-2表达显著降低.提示,大豆异黄酮和皂甙可通过改变细胞周期分布和诱导结肠癌细胞凋亡,发挥抗结肠癌作用.     

大豆异黄酮的品种间差异分析

直接使用乙醇分离提取大豆异黄酮,并用高效液相色谱技术对8个大豆品种中大豆异黄酮含量进行了品种间差异分析,并对5种异黄酮组分（染料木素、黄豆黄甙、大豆甙、大豆甙元、染料木甙）进行了定量分析。发现品种间的大豆异黄酮和各组分的含量差异显著,黄皮豆的异黄酮含量明显高于其他品种,吉农17异黄酮含量最高,其含量可达6．6‰。     

大豆胚轴体外诱导结肠癌细胞分化的研究

用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原Ki-67和PCNA蛋白表达,分光光度法测定碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA法测定癌胚抗原(CEA)水平,研究了富含大豆异黄酮和皂甙的大豆胚轴提取物(SHE)对结肠癌细胞增殖和分化的影响。结果表明:富含大豆异黄酮和皂甙的大豆胚轴提取物可时间和浓度依赖性地降低结肠癌细胞Ki-67和PCNA表达,增加细胞ALP活性。CEA水平和LDH活性呈增高趋势,但差异不具有统计学意义。表明富含大豆异黄酮和皂甙的大豆胚轴可抑制结肠癌细胞增殖和诱导细胞分化,从而发挥抗结肠癌作用。     

超临界CO2抗溶剂法纯化大豆异黄酮的研究

测定了大豆异黄酮中两种主要成分染料木甙和大豆黄甙的雾点压力。采用有机溶剂提取和超临界CO2抗溶剂技术通过两次膨胀进行大豆异黄酮的精制，得到的产品中大豆异黄酮含量高于90%，异黄酮收率大于78%，该研究为超临界CO2抗溶剂技术在天然极性物质分离纯化中的应用提供了新的思路。     

大豆子叶互生突变体的发现

大豆品种N8855种子浸种后播于消毒土的盆钵内,置于无光照的生长箱内,生长温度为29℃,于第8天发现-株突变体(M0)子叶表现互生现象,而其余植株子叶表现对生(图A)。此株子叶互生突变体(M0)的M1株系置光照培养箱是生长,同N8855一样表现子叶对生;而经暗室诱导子叶表现互生,植株其余性状同于N8855(图B)。M2代表现同M1一致。这一经暗诱导表现子叶互生现象在双子叶植物上是首例报道。 　　大豆正常子叶对生情况下,位于子叶节以下的茎状轴称为下胚轴,子叶节至第一对真叶节部分称为上胚轴;暗诱导的子叶互生突变体,其发育的组织结构变得复杂,正常对生子叶节拉开,两片子叶的节间可能为中胚轴,而中胚轴在禾本科植物中常见、在双子叶植物未见报道     

外源茉莉酸对大豆中异戊烯黄酮Glyceollins及其前体Glycinol累积的影响

以中黄13号大豆种子为材料,取生长8天的健康子叶,在其表面挖出约2×2mm的伤口,将50μl不同浓度的茉莉酸溶液和1mM的硝酸银溶液滴在伤口处,黑暗中(25℃)保温不同时间后取样,经甲醇提取,用高压液相色谱(HPLC)测定其中异戊烯化异黄酮glyceollins及其前体glycinol 的累积情况.结果显示,健康子叶中没有glyceollins和glycinol的累积,1mM硝酸银比茉莉酸具有更强的诱导glyceollins和glycinol累积的能力,glyceollins的累积与茉莉酸浓度呈负相关.在各种处理中,glyceollinⅠ、Ⅱ、Ⅲ所占比例分别为:50%～80%、10%～40%和10%～20%,但是glyceollin三种异构体的比例随保温时间的延长而有所变化,glyceollin Ⅰ比例逐渐下降,glyceollin Ⅱ所占比例逐渐升高,在1mM硝酸银处理的子叶中表现更为明显.     

大豆低亚林酸突变体合成位点MGDG的脂肪酸行为

本文比较了大豆低亚麻突变体（Ａ５）及其诱导有体（Ａ６）亚麻酸合成位点ＭＧＤＧ的脂肪酸变化。研究结果表明低亚麻突变体Ａ５的下胚轴、子叶、上胚轴和真叶中叶体被膜亚麻酸合成位点单半乳糖苷本酯酰（ＭＧＤＧ）上亚麻酸（１８：３）水平均高于Ａ６相应组织。子叶中亚麻酸合成前体磷脂酰胆碱（ＰＣ）配比１８：０／１８：３，８１：１／１８：３以及１８：２／１８：３分别呈主度显著正相关或负相关，Ａ６夫叶中１８：３水平毕高     

微波辅助提取大豆甙元工艺研究

大豆甙元是大豆中一种生理活性物质,挤压技术和微波提取技术对其提取效果影响尚未见报道.本文研究挤压膨化技术对大豆甙元提取的影响,并确定最佳的微波提取条件.在考察液料比、微波时间等单因素对大豆甙元得率影响的基础上,选取微波时间、料液比和浸置时间进行三因素三水平的响应曲面试验,以确定微波辅助提取大豆甙元最佳条件.并以微波辅助提取未经挤压的大豆、挤压处理过的大豆用乙醇作为溶剂提取、未挤压未微波的大豆中大豆甙元得率作为对照.试验结果表明微波辅助提取大豆甙元的最佳条件为乙醇浓度为90%,提取时间为5 min,微波火力为0.6,提取液pH为2,液料比(V/W)为30,提取1次.得率为0.26%,显著高于对照试验.挤压膨化技术处理有利于大豆甙元的提取,微波技术提取大豆甙元效果优于对照.     

抑制大豆胞囊线虫的异黄酮种类研究

为明确外源异黄酮类物质对大豆胞囊线虫的毒性,选取黄豆苷元(daidzein)、黄豆苷(daidzin)、染料木素(genistein)、染料木苷(genistin)、黄豆黄苷(glycitin)和黄豆黄素(glycitein)6种大豆异黄酮,采用贝氏皿法离体测定其对大豆胞囊线虫的卵孵化抑制率和对二龄幼虫(J2)的致死率及其田间防效,以明确对线虫有效的异黄酮种类。结果表明:6种大豆异黄酮对胞囊线虫的卵孵化和J2活性均具有一定的抑制作用,其中100μg/m L染料木素效果最好,处理24h后,对J2校正死亡率可达到45.46%,对卵孵化抑制率为43.48%,且50μg/m L染料木素处理种子后的田间防效显示对胞囊抑制率亦达到49.47%。此外,染料木苷和黄豆苷元对J2和卵孵化也有较明显效果但田间防效较其他异黄酮差;黄豆黄苷和黄豆黄素对J2毒杀作用较弱但对卵孵化抑制作用较强;黄豆苷对J2和卵孵化作用效果最弱,但是其田间防效与染料木素无显著性差异。说明供试的6种异黄酮在不同浓度和条件下均对大豆胞囊线虫有抑制作用,以染料木素的综合效果最好。研究结果为解释大豆抗线虫侵染的机制及利用大豆异黄酮防治线虫病害奠定了理论基础。     

大豆低亚麻酸突变体合成位点MGDG的脂肪酸行为

本文比较了大豆低亚麻突变体（Ａ５）及其诱导前体（Ａ６）亚麻酸合成位点ＭＧＤＧ的脂肪酸变化。研究结果表明低亚麻突变体Ａ５的下胚轴、子叶、上胚轴和真叶中叶绿体被膜亚麻酸合成位点单半乳糖苷二酯酰（ＭＧＤＧ）上亚麻酸（１８∶３）水平均高于Ａ６相应组织。子叶中亚麻酸合成前体磷脂酰胆碱（ＰＣ）配比１８∶０／１８∶３（ｒ１８∶０／１８∶３＝０．８７２＊＊），１８∶１／１８∶３（ｒ１８∶１／１８∶３＝－０．９５８＊＊）以及１８∶２／１８∶３（ｒ１８∶２／１８∶３＝－０．９６５＊＊）分别呈高度显著正相关或负相关。Ａ６真叶中１８∶３水平皆高于上胚轴、子叶、下胚轴和幼根。诸组织中１６∶０、１８∶２和１８∶３水平变化尤为明显，而１８∶０和１８∶１变化较小。幼根中１６∶０和１８∶２水平均高于其他组织，且１８∶２高于１８∶３。     

蓝光连续光照对大豆芽苗菜类黄酮合成的影响

以黑暗培养(D)为对照,阐明了蓝光(B)连续光照对大豆(Glycine max L.Merr.)芽苗菜品种东农690生长和类黄酮合成的影响。结果表明:与对照组相比,蓝光连续光照36 h显著提高了大豆芽苗菜子叶中山奈酚(kaempferol)和黄豆苷元(daidzein)的含量,同时子叶中蓝光光受体基因CRY1、CRY2,类黄酮合成相关基因IFS的表达量也显著提高。处理组中,大豆芽苗菜下胚轴中黄豆苷(daidzin)含量逐渐增加,黄豆苷元(daidzein)、染料木素(genistein)、染料木苷(genistin)和山奈酚(kaempferol)的含量先升高后下降,但在36 h时均显著高于黑暗处理。在蓝光光照6和24 h时,大豆芽苗菜下胚轴中苯丙氨酸解氨酶(PAL)与查尔酮异构酶(CHI)活性与对照组相比均显著提高。类黄酮合成途径相关基因PAL、CHS、ANS、IFS的表达量在蓝光处理下均是先升高后下降,而蓝光光受体基因CRY1与CRY2的表达量随着光照时间延长逐渐升高。     

黑龙江省野生大豆高异黄酮新种质创新利用研究Ⅱ异黄酮含量与大豆品质相关性的分析

通过对225份黑龙江省野生和栽培大豆资源的异黄酮、蛋白质和脂肪含量的检测,分析异黄酮含量和蛋白质及脂肪的相关性,结果表明大豆异黄酮含量与蛋白质含量呈显著的负相关;野生大豆脂肪含量与异黄酮含量呈显著的正相关;野生大豆的异黄酮G/D（染料木甙/大豆甙）平均值略高于栽培大豆的异黄酮G/D,异黄酮G/D比值最大值出现在栽培大豆样品中.     

大豆异黄酮的抑菌作用

以从脱脂豆粕中提取的总大豆异黄酮为实验材料研究其抑菌作用,实验结果表明,大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、单增李氏菌、白色念珠菌、梨头霉菌和米曲霉均有明显的抑制作用,其最低抑细菌浓度(MIC)分别为0.03%、0.09%、0.02%、0.03%、0.03%、0.05%、0.05%、0.05%和0.05%,但对大肠杆菌和酿酒酵母无抑制作用.用本实验室开发的大豆异黄酮糖苷酶将提取的总大豆异黄酮进行酶解,并将酶解后的产物进行分离纯化,得到游离型的苷元.游离型苷元和结合型糖苷的抑菌结果显示,大豆异黄酮中具有抑菌活性的成分是其游离型的苷元.其热稳定性好,经121℃、30min湿热灭菌处理后仍具有较强的抗菌活性.     

废电池液对大豆种子萌发及贮藏物质变化的影响

以石豆1号为材料,通过水培试验,研究了不同浓度(10%、20%、30%和40%)废电池液对大豆种子萌发及贮藏物质变化的影响。结果表明:随着废电池液浓度的上升,大豆种子发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、根长、下胚轴长、贮藏物质消耗率和运转效率都呈下降趋势,根(下胚轴)长抑制指数逐渐增大,其中当废电池液浓度为10%时,大豆萌发期根长和贮藏物质运转效率明显受到抑制,根长抑制指数显著提高;当废电池液浓度为20%时,大豆萌发期下胚轴长显著减少,下胚轴长抑制指数显著增加;当废电池液浓度为30%,大豆种子的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数及贮藏物质消耗率均显著下降。说明本试验中30%废电池液浓度对大豆种子萌发有显著抑制作用。