诱发小麦抗根腐病突变体的研究 Ⅱ 影响小麦根腐菌致病毒素作用的因素与生物测定初报

试验比较了来自东北、华北等地小麦根腐病菌共30个菌株,从中已筛选出毒力强而稳定的菌株(002号)。初步明确采用改良Fries加小麦健叶汁的液体培养基培养根腐茵,每天振荡4次,每次20min,培养15d后的培养物滤液,在5℃下可保存2个月,用15磅高压灭菌30min及煮沸浓缩均不影响毒素的作用。在几种Hs—毒素制剂中,以粗提物制剂的毒素作用最强,病叶提取液和培养滤液次之。应用根冠细胞测定法评价Hs—毒素的作用比用抑制种子根伸长的种苗“萌发包”法更为灵敏,精确,快速。测定小麦离体:浪冠细胞的最佳条件是:黑暗25℃下处理6h;根冠细胞浓度为500—1000个/ml;粗提毒素稀释液pH6—7。     

水稻污点病菌毒素的初步研究

水稻污点病菌(Cladosporium cladosporioides)在改良Fries 3号培养液上最易产生毒素,且以25 ℃,振荡培养20 d产毒量最高。该毒素对水稻幼苗有明显致病作用。毒素滤液及粗提物的毒性均随浓度的升高而增强。且粗提物的毒性明显高于同一浓度滤液毒性。     

玉米小斑病菌O小种毒素的生物活性测定

中国玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)小种培养滤液含有活性较强的生理活性物质,对供试15个自交系种子根生长具有明显的抑制作用;可诱导幼苗和离体叶片产生典型的小斑病症状,自交系对培养滤液致病作用的抵抗性与幼苗对病菌的致病性密切相关;O小种培养滤液对玉米根冠细胞具有强烈的致死作用,根冠细胞对培养滤液的敏感性与幼苗对病菌的感病性间存在明显的正相关。据此,初步认为O小种滤液中的生理活性物质为O毒素。     

影响玉米离体根冠细胞对Hm—毒素敏感性的因素

在Hm—毒素——根冠细胞测定法中,处理的温度,离体根冠细胞的浓度,毒素制剂的pH值和光照等都不同程度地影响玉米根冠细胞的存活和Hm—毒素诱致根冠细胞死亡的结果。试验证明:在低温,有光照和偏酸性的基质下获得的测定结果不理想,而黑暗25℃下处理12个小时,离体根冠细胞浓度为1000个/ml,毒素制剂的pH值为7.0左右时测定最宜。试验还发现,虽然改良Fries培养基中的酒石酸铵,NH_4NO_3和NaCl诸组分会影响玉米根冠细胞的存活,但用这种培养基制备的培养物滤液诱致的玉米根冠细胞死亡仍比病叶提取液强。此外,不同玉米自交系的根冠细胞其自然存活率的差异也很大;测定的时间须控制在12小时以内。可见,进行定量的Hm—毒素生物测定,严格地控制上述条件是非常重要的。     

玉米小斑病菌T小种毒素诱导对玉米叶片苯丙氨酸解氨酶活性的影响

分别采用低浓度玉米小斑病菌Hel minthospolium maydis T小种毒素(HMT毒素)和玉米小斑病菌T小种培养滤液中的提取蛋白及菌丝细胞壁的提取液,预处理不同玉米品种3叶期叶片后再接种高浓度HMT毒素,在无菌条件下培养5 d后测量叶片病斑大小,并测定玉米叶片内苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性变化。结果表明:只有纯化的低浓度HMT毒素能够作为激发子诱导玉米获得系统性广谱抗性,但不同玉米品种所需的最适合浓度有差异;TC103以质量浓度0.025μg/mL毒素预处理效果最好,PAL活性最高;TB37和TMo17 2个自交系,以质量浓度分别为0.025μg/mL和0.050μg/mL的毒素预处理效果最好。     

玉米小斑病菌O小种毒素的生活性测定

中国玉米小斑病菌小种培养滤液含有活性较强的生理活性物质，对供试１５个自交系种子根生长具有明显的抑制作用；可诱导纪苗和离体叶片产生产生典型的小斑病症状，自交系对培养滤液致病作用的抵抗性与幼苗对病菌的致病性密切相关；Ｏ小种培养滤液对玉米根冠细胞具有强烈的残致死作用，根冠细胞对培养滤液的敏感性与幼苗对病菌的感病性间存在明显的正相关。据此，初步认为Ｏ小种滤液中的生理活性物质为Ｏ毒素。     

HMC毒素对雄花不育及正常细胞质玉米根冠活细胞的影响

玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)对玉米的致病作用,主要是病菌所产生的毒素(Patho-toxin)引起的。本文分析了三套(C、S、N)和20对(C、N)同核异质系玉米根冠细胞经小斑病菌C小种毒素(HMC)溶液处理后细胞的死亡率。实验结果表明:在25℃条件下,用稀释30倍的毒素过滤液处理3小时,采用WF9,B73、B37三种基因型的T、C、S、N四种细胞质试材,其根冠细胞死亡率的平均值分别为:14.57±4.07;43.95±3.98;21.20±3.99、15.60     

几种植物病原真菌致病毒素的初步研究（I）

试验明确了玉米大斑病、小斑病、圆斑病、小麦根腐病、赤霉病病菌毒素的基本特性，病原菌培养滤液的致病作用，制备方法，影响毒素作用的因素，稳定性以主评定毒素测定的生物测定方法，为保证毒素作用的稳定性，制定出了一磁系统的规范估的毒素制备程序。     

几种植物病原真菌致病毒素的初步研究（Ⅰ）

试验明确了玉米大斑病、小斑病、圆斑病，小麦根腐病、赤霉病病菌毒素的基本特性，病原菌培养滤液的致病作用，制备方法，影响毒素作用的因素，稳定性以及评定毒素测定的生物测定方法，为保证毒素作用的隐定性，制定出了一套系统的规范化的毒素制备程序。     

几种植物致病镰刀菌毒素滤液的生物测定

于1985—1986年采集了西瓜枯萎病菌(F. Oxysporum f. sp. niveum)等8种致病镰刀菌,经分离、接种、再分离、纯化,获得纯培养,经鉴别培养基鉴别后,又对几种尖孢菌进行交互接种试验,证明其为不同专化型。分别做液体振荡培养,用毒素滤液漫苗法,观察幼苗的病状表现,从而确定毒素的有无。结果证明,西瓜枯萎病菌等六种致病镰刀菌均能产生毒素。     

玉米黄斑病研究：Ⅲ.病原菌Curvularia lunata致病毒素初探

用玉米黄斑病菌Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｌｕｎａｔａ无菌培养滤液进行生物测定的结果表明，无菌培养滤液处理的，离体叶圆片四周有较大范围的褪绿区；活体植株叶片上产生水渍状褪绿晕斑，与病原菌所致的症状相同；种子根的伸长受到明显抑制，证明Ｃ．ｌｕｎａｔａ在人工培养过程中可以产生致病毒素。这种毒素是对热稳定的物质。关于Ｃ．ｌｕｎａｔａ致病毒素尚属首次报道，作者将其命名为Ｃ１毒素。     

玉米大斑菌致病毒素及其应用的初步研究

用大斑菌接种玉米幼苗和用大斑菌的培养滤液处理玉米根冠细胞的试验证明,大斑菌无论在体内或体外均能产生致病毒素。大斑菌不同菌株,1号和2号生理小种所产生的毒素作用强弱不同。在不含Ht_1基因的玉米1号小种(真16号菌株)的毒力明显强于2号小种(260号菌株)。大斑菌毒素制剂以病叶提取液的毒素作用最强。毒素的生物测定以根冠细胞测定法精确度高。用大斑菌接种玉米幼苗后形成的病斑大小和其毒素处理玉米离体根冠细胞的死亡率呈正相关,接种和处理含Ht_1基因的RB37Ht_1自交系的结果也相同。可见,应用大斑菌毒素可以代替大斑菌分生孢子接种玉米鉴别1号和2号生理小种和自交系的抗病性。     

棉花枯萎病抗病性鉴定方法的探讨

用棉花枯萎病菌培养的毒素滤液,只有耐高温、耐稀释的特点。100℃处理15分钟,萎蔫指数72.3;5%的稀释度尚能致萎,最适浸苗浓度15～25%,最高产毒期14～16天,pH5的稀释液效果最好,pH5低于5或大于7致萎力都有影响。硫酸锌能鈍化毒素滤液的活性,在0.1ppm～1.5ppm之间随浓度增加而致萎力漸降。致病力不同的培养滤液,其致萎指数及最高致萎百分率有明显差異。用15%毒素滤液浸苗48小时,对棉花不同品种致萎力的差異结果与田间抗性相近。另外,用不同品种的棉籽仁丙酮浸提液与0.2%兔血稀释液混合,在显微镜下观察血球凝集情况,结果证明,凝集力愈强則品种抗性愈强,与田间抗性表现亦近似。     

玉米大斑病菌Ht－毒素在玉米品种抗病性鉴定中的应用

玉米大斑病菌在活体外产生的致病毒素（Ｈｔ－毒素）不仅能抑制玉米幼苗根和芽的生长，而且对玉米离体根冠细胞也有明显的致死作用。试验发现，玉米大斑菌菌株的致病力与其培养滤液对玉米幼苗根生长的抑制率呈正相关（ｒ＝０．８４），玉米品种的感病性也与毒素处理后根冠细胞的死亡率呈正相关（ｒ＝０．８２）。结论指出，用玉米大班菌Ｈｉ－毒素鉴定玉米品种的抗病性是可行的。     

玉米大斑病菌Ht－毒素在玉米品种抗病性鉴定中的应用

玉米大斑病菌在活体外产生的致病毒素（Ｈｔ－毒素）不仅能抑制玉米幼苗根和芽的生长，而且对玉米离体根冠细胞也有明显的致死作用。试验发现，玉米大斑菌菌株的致病力与其培养滤液对玉米幼苗根生长的抑制率呈正相关（ｒ＝０．８４），玉米品种的感病性也与毒素处理后根冠细胞的死亡率呈正相关（ｒ＝０．８２）。结论指出，用玉米大班菌Ｈｉ－毒素鉴定玉米品种的抗病性是可行的。     

玉米灰斑病菌粗毒素对玉米胚根保护酶活性的影响

选用Fries培养液培养,采用浓缩浸提的方法提取玉米灰斑病菌粗毒素,利用紫外可见分光光度计和比色法测定了处理不同时间和不同浓度玉米灰斑病菌粗毒素对玉米胚根保护酶(过氧化物酶、超氧化物歧化酶、苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶)活性的影响,结果表明:毒素处理后,玉米种子胚根过氧化物酶、超氧化物歧化酶、苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶等保护酶活性明显降低,为对照组的7.97%～51.44%,说明毒素对寄主保护酶起抑制作用.该研究为进一步揭示玉米灰斑病菌的致病机理奠定了基础.     

应用组织培养方法诱发小麦抗赤霉菌毒素突变体研究初报

本研究从不同来源的小麦赤霉菌中选出了致病力强而毒素作用稳定的菌株的毒素作为筛选剂，以幼穗愈伤组织为材料，研究诱变剂EMS对诱发小麦抗赤霉菌毒素突变体的作用，并且比较了一步往往筛选与多步筛选体系的效果，研究结果指出，以小麦赤霉菌培养物滤液的粗提制剂作为筛选剂，可以有效地诱导出具有抗性的愈伤组织和分化再生苗，通过利用较大群体和接近细胞致死浓度的高选择压力的多步筛选体系可以在较短时间内有效地诱发抗毒素的突变体。试验明确了在诱发小麦抗赤霉病突变体中不宜用EMS诱变剂作预处理。     

立枯丝核菌毒素的产生及与致病力的关系

立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)培养滤液经活性炭吸附、甲醇洗脱、旋转蒸发浓缩获得粗毒素。生物活性测定表明：该粗毒素能诱发水稻叶片产生似纹枯病的典型症状，明显抑制水稻胚根生长，致使水稻幼苗萎蔫；粗毒素浓度越高，作用越强，当稀释至200倍时仍具有一定生物活性；不同菌株产毒能力差异明显，且与致病力呈显著正相关。这些结果显示毒素在病菌致病过程中起重要作用。病菌最佳产毒条件为：菌丝在改良Richard培养液(pH7)中，25～30℃下黑暗培养15-20d，每隔6或12h人工振荡1次。水稻不同抗(特青和J-85)、感(LMNT)品种的胚根和幼苗对粗毒素的敏感性有较大差异，预示毒素可用于水稻品种抗纹枯病的初步鉴定。     

麦根腐长蠕孢毒素对小麦种子萌发和幼苗生长的影响

为探讨小麦品种对根腐病的抗感性是否与种子萌发和幼苗生长对毒素处理的反应一致,从而简化抗病性鉴定程序,提高抗病性鉴定效率,特开展了如下研究. 从抗病品种Jup 73 Atd“S”叶片发病部位分离根腐病菌(Bipolaris sorokinlana),纯化后用Fries培养液在25℃半振荡培养21d,滤液用2种方法提取毒素,一种是Sommereyns& Closset(1978)乙醚提取法(方法I),另一种是在此法基础上略加改动即滤液蒸发至     

Hm—毒素在玉米大,小斑病菌相互关系中的作用

玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)所产生的致病毒素(Hmtoxin)能抑制玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)的生长和降低产孢量。在PDA培养基上、当小斑菌存在时,也象Hm—毒素一样,使大斑菌的生长受到抑制,而且凡是有利于小斑菌产生毒素的培养条件都能使小斑菌对大斑菌的抑制作用更加强烈。在幼苗上,Hm—毒素象小斑菌一样使大斑病的病斑少而小。据此,本文进一步明确了在小斑病常发区大斑病一般不易流行,从而大大减轻了在小斑病常发区防治大斑病的压力。