一种快速高效提取柑桔样品病原DNA的方法

为从柑桔样品中快速获得高质量的病原DNA,在传统CTAB法基础上,结合热萃取技术,新建立了一种快速提取病原DNA的CTAB简化法。与Solarbio植物基因组DNA提取试剂盒和传统CTAB法相比,该方法所需时间短,1～2 h即可完成整个提取过程,获得的DNA质量高、产量多。采用上述方法提取黄龙病、溃疡病、褪绿矮缩病等3种柑桔病害样品DNA进行PCR检测,CTAB简化法和传统CTAB法的检出结果一致,试剂盒的检出率稍低。新建立的CTAB简化法,适用于柑桔病害大规模DNA检测。     

黄龙病菌在柑橘果实橘络中的分布

黄龙病菌（Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas）可在柑橘果实橘络中大量增殖。为探究其在染病柑橘果实橘络内的增殖与分布规律,以感染黄龙病的沃柑、脐橙、琯溪蜜柚和沙田柚果实为材料,利用RT-qPCR对果实橘络单位片段（每1.5cm长片段）组织中的CLas含量进行定量分析,同时对感染黄龙病的沃柑和脐橙同一果实橘络不同位置片段中的CLas含量进行定量分析。结果表明,4个品种橘络中的CLas数量存在差异,其中沃柑和琯溪蜜柚橘络平均每1.5 cm片段中的CLas数量显著高于脐橙和沙田柚（P <0.05）。沃柑和脐橙果实同一橘络位于中端或中后端片段组织中的平均CLas显著高于前端（P <0.05）,而琯溪蜜柚和沙田柚各部位无差异。CLas在不同品种果实橘络中的丰度差异可能与不同品种橘络中的物质组成有关,而CLas更倾向于在果实橘络中端或中后端组织中增殖的原因可能与营养物质在橘络中的分布有关。     

应应用PCR及Nested-PCR技术检测柑橘黄龙病病原研究

 以采自田间和广东省农业科学院果树研究所防虫隔离网室内嫁接并感染黄龙病的5 个柑橘品种叶片为材料, 以草本指示植物长春花( Catharanthus roseas) 和木本指示植物　柑( Citrus reticulata Blanco) 鉴定为基础, 采用改良的CTAB 法提取总DNA , 在此基础上进行常规PCR 与Nested-PCR 检测, 并对特异目的片段进行克隆、测序。试验证明Nested-PCR 比常规PCR 的灵敏度更高。这两种方法均可以检测出未显症的黄龙病材料, 但Nested-PCR 可以在木本指示植物嫁接后40 d 左右、草本指示植物摩擦接种1 个月左右检测到病原;而常规PCR 在木本植物嫁接后60 d 左右、草本植物摩擦接种近2 个月左右才能检测到病原。常规PCR 所能检测到的最低DNA 的量为pg 数量级; Nested-PCR 检测病原DNA 灵敏度约为常规PCR 的104 倍。     

柑橘黄龙病防治的几项关键技术

柑橘黄龙病是由韧皮部杆菌引起的病害,迄今为止没有很好的防治药剂,是一种毁灭性病害。赣南是柑橘黄龙病区,也是柑橘木虱分布区,因此防治好柑橘黄龙病对赣南脐橙的发展具有重要意义。笔者所工作的柑橘园位于江西省全南县南泾镇,面积80hm2,     

柑橘黄龙病检测方法研究进展

柑橘黄龙病是世界柑橘产区的重要检疫性细菌病害之一,严重阻碍柑橘产业的健康持续发展。因抗性品种和特效药剂的缺乏,目前对柑橘黄龙病以预防为主,因此,加强病害的诊断和检测技术研究就显得尤为重要。本文综述了多年来柑橘黄龙病的检测诊断方法。     

柑橘及近缘属总RNA的有效提取

采用改良的异硫氰酸胍法提取柑橘及其近缘属的总RNA,得到了较高纯度的RNA分子,实验简便、快速。用同位素标记的2个线粒体基因探针杂交国庆1号温州蜜柑的总RNA,分别检测到一条转录本,说明提取的总RNA适合于Northern分析等分子生物学操作。     

适于AFLP分析用的柑橘DNA提取方法

利用改进的CTAB法提取了15个柑橘分类群的基因组DNA,并进行了AFLP分析。结果表明,该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8~2.0,1%琼脂糖胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象。其AFLP分析(引物EcoRI-AAC+MseI-CAC)条带清晰,多态性好,说明此方法完全适于AFLP分析。     

金华市柑橘黄龙病的发生与防治

<正>柑橘黄龙病(Liberobacter asiaticum)又名黄梢病,是一种通过木虱、嫁接在韧皮部传染的柑橘检疫性病害。2006年,金华市确诊发生柑橘黄龙病疫情后,各级政府高度     

基于深度学习的柑橘黄龙病远程诊断技术初探北大核心

为解决柑橘种植过程中黄龙病检测不及时、检测成本较高的问题,初步探寻基于深度学习的柑橘黄龙病远程诊断方法。通过架设在田间的设备采集柑橘植株图像信息,利用深度学习相关算法构建柑橘黄龙病病害识别模型,在柑橘生长过程中实现黄龙病在线实时监测与病害远程诊断。目前已在试验地初步开展柑橘黄龙病远程诊断试验,结果表明,田间远程诊断准确率为77.1%,已初步实现针对柑橘黄龙病的远程病害诊断,提高了实际生产过程中黄龙病的识别效率,降低了黄龙病检测成本,为柑橘黄龙病田间诊断方法研究提供了新思路。     

柑橘组织RNA提取方法研究

从操作耗时、所得RNA产量和质量等方面比较了5种RNA提取方法提取甜橙叶片、幼果、成熟果实果皮和汁囊组织RNA的效果。结果表明,改良Bugos法能从上述4种组织中获得较高产量和质量的RNA。用该方法提取的温州蜜柑成熟果实果皮RNA经RT-PCR扩增成功得到了蔗糖磷酸合成酶cDNA片段。该方法还可适用于猕猴桃、梨、甜瓜、龙眼、苹果和桃果肉RNA的提取。     

金佛手叶黄酮提取工艺的优化

以乙醇为浸提剂,通过单因素和多因素试验,采用响应面试验设计方法对金佛手叶片黄酮最佳提取工艺进行了研究。结果表明,从叶粉中提取黄酮的最佳条件是乙醇浓度85%、提取时间171min、提取温度81℃、料液比1∶20,理论上黄酮得率(m/m)的最大值为1.306%。经验证,此提取条件下,果粉和叶粉的实际黄酮得率分别为0.404%和1.292%。     

柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的二重RT-PCR检测体系的建立与应用

选用柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)和柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)两种病毒外壳蛋白保守序列及内参基因Ubiquitin的特异性引物,优化影响二重RT-PCR反应的Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度和退火温度,建立了针对两种病毒的一步法二重RT-PCR检测体系。二重RT-PCR获得CYVCV、CTV及Ubiquitin的特异性片段大小分别为614、373和194 bp,克隆测序和序列对比结果显示它们与已报道的病毒序列具有较高的同源性。该体系最低能从40 ng·μL~(-1)总核酸中检测出CYVCV,从4 ng·μL~(-1)总核酸中检测出CTV,其灵敏度与单一RT-PCR检测灵敏度一致。利用该体系对33份田间样品进行检测,CYVCV和CTV感染率分别为54.5%和66.7%,复合侵染率高达36.4%。该一步法二重RT-PCR技术体系可用于大量田间样品中CYVCV和CTV的快速同步检测。     

适用于新疆野核桃SSR-PCR的快速提取DNA的方法

以新疆野核桃幼叶为试材,采用活性碳改良的高盐低pH法和常用的改良CTAB法进行DNA提取,并检测提取的DNA.结果表明:快速提取法提取DNA的质量与CTAB法相比无明显差异.除研磨样品的时间外,快速提取法完成一次提取所需时间为35 min左右,约为CTAB法的1/3;提取100个样品所消耗的药品价值为7.8元,与CTAB法相比节省成本约60％.该研究为新疆野核桃遗传多样性的分析奠定了坚实的基础,也为其它大规模研究样品DNA的提取提供了技术支持.     

CTAB法高效提取苹果叶片DNA的研究

为研究CTAB法在正常条件和逆境条件下,从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的苹果树叶片中分离出高质量的基因组DNA,以抗旱能力较强的八棱海棠(Malus micromalusRehd. )和抗旱性较弱的平邑甜茶(Malus hupehensis pamp Reld.)幼苗为试验材料.用20%聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG6000)模拟干旱,采取CTAB提取缓冲液,按一定比例加入PVP和β-巯基乙醇,用Tris平衡酚-氯仿-异戊醇除去蛋白质及杂质,在粗提时用异丙醇沉淀DNA,并用DNA洗液(10 mmol/L醋酸铵,75%乙醇)洗涤DNA,在纯化时用乙醇沉淀DNA,且没有加入RNase去除RNA的方法,分别提取2个品种正常和干旱胁迫的苹果属叶片总DNA,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测.结果表明:此方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,得到高质量、特征带形清晰的大量DNA.并就提取过程中遇到的问题,提出了相应的解决办法.     

辣椒叶片基因组DNA提取方法的研究

本项研究采用SDS法、CTAB1法、CTAB2法及CTAB3法对辣椒叶片基因组DNA进行提取,通过琼脂糖凝胶电泳法与紫外吸收检测法对DNA的纯度进行检测。试验证明几种提取方法均能提取出辣椒叶片的基因组DNA,其中CTAB3法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测得到一条迁移率很低的整齐清晰的DNA条带,所提取DNA的质量和纯...     

响应面法优化超声提取柚皮总黄酮工艺的研究

利用超声波法提取蜜柚果皮中的总黄酮,在单因素试验的基础上,采用响应面法对主要工艺参数进行优化并得到回归模型。结果表明:回归模型较好地反映了黄酮得率与乙醇浓度、提取温度、超声时间的关系;最佳工艺条件为乙醇浓度81%、提取温度61.5℃、超声时间45min。在此工艺条件下,蜜柚果皮黄酮得率为6.667mg/g,与回归模型预测值的相对误差为0.01%。     

一种高质量枇杷基因组DNA提取方法

针对枇杷叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,采用改良CTAB法,通过对抽提液、沉淀液和解离缓冲液进行逐步筛选,对其基因组总DNA进行提取,并对DNA进行电泳检测、含量测定和ISSR分析。结果表明:该方法从‘大五星’枇杷幼叶、成熟叶片、花药、组培苗,与幼果中的胚珠,以及栎叶枇杷的幼叶与成熟叶片7种材料提取的基因组总DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280值均在1.8~2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其ISSR分析条带清晰,多态性好,表明此方法提取的枇杷基因组总DNA质量较高。     

辣椒基因组DNA提取方法研究

本项研究采用SDS法、CTAB法和高盐低pH法对辣椒(CapsicumannuumL.)叶片基因组DNA进行提取;紫外吸收检测法与琼脂糖凝胶电泳法对DNA的纯度进行检测。紫外吸收检测结果表明,SDS法提取的辣椒叶片DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,其A260/A280在1.771～1.912之间。SDS法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测得到一条迁移率很低的整齐清晰的DNA谱带,所提取DNA的质量和产率均较高,用该法提取的辣椒DNA进行RAPD分析,DNA扩增效果较好,带形清晰、整齐,说明SDS法提取的DNA分子较为完整,能用作PCR模板来开展辣椒分子水平的研究。     

草莓ABA 的快速提取方法及超高效液相色谱分析

 采用甲醇︰乙酸乙酯︰甲酸 = 50︰50︰1 的混合液作为提取溶剂,可快速从草莓中提取ABA, 整个提取过程可在0.5 h 内完成,大大提高了ABA 提取效率。建立了一套适合ABA 分析的超高效液相色 谱分析体系,其流动相为甲醇︰乙腈︰0.1%甲酸 ＝ 20︰10︰70,流速0.3 mL · min-1,检测波长265 nm, 柱温30 ℃,进样10 μL。利用建立的快速提取法及超高效液相色谱分析方法,测定了不同发育阶段草莓 果实（青果、白果、粉红果和红果）的ABA 含量,发现其呈上升趋势,至红果期ABA 含量达到最高。