利用昆虫表达系统表达新城疫病毒TS09-C耐热株的HN蛋白胞外区

前期研究表明新城疫病毒(NDV)HN蛋白为病毒热稳定性的主要影响因子.为了进一步研究HN蛋白的热稳定性以及影响其热稳定性的结构特征,研究利用杆状病毒表达了NDV TS09-C耐热株的HN蛋白的胞外区,将两个拷贝的TS09-C株HN胞外区基因分别插入到载体pFastBac-dual的PH启动子和p10启动子下游,在HN蛋...     

四种不同灭活剂对新城疫病毒的灭活效果研究

为探索甲醛、β-丙内酯(BPL)、二乙烯亚胺(BEI)和盐酸聚六亚甲基胍(PHMG)对新城疫病毒(NDV)的最佳灭活条件,试验采用不同浓度梯度的甲醛、BPL、BEI和PHMG对NDV进行不同时间的灭活处理,通过血凝(HA)试验、无菌检验和灭活检验确定灭活效果。结果显示,37℃下,NDV的最佳灭活条件为0.1%～0.2%的甲醛灭活22～24h、0.02%～0.025%的BPL灭活9～10h、2%～3%的PHMG灭活16～20h,该研究为筛选规模化生产ND疫苗所需的理想灭活剂提供了依据。     

新城疫油乳剂灭活疫苗病毒含量对免疫效价的影响

本研究选用β-丙内酯对河南新乡市地方株XX08-NDV进行灭活,探索其对该株病毒的最适灭活浓度和时间,并制备不同病毒含量的油乳剂灭活疫苗,接种15日龄健康未免疫麻鸡,免疫后第14、28天分别检测其新城疫抗体效价.结果显示:经0.01％的β-丙内酯37℃灭活2h后的XX08-NDV尿囊液原液,稀释倍数为10倍,免疫注射剂量为0.5 mL/只时,可显著提高麻鸡的新城疫抗体效价.     

鸡胚免疫新城疫疫苗后宿主法氏囊转录组学分析

【目的】通过转录组学分析鸡胚免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)TS09-C株后宿主法氏囊内免疫关键基因及信号通路分子转录差异,探究免疫后宿主法氏囊内免疫相关分子的调控反应。【方法】将60只18胚龄SPF鸡胚随机分为免疫组和对照组,30枚/组,免疫组将NDV TS09-C株通过羊膜腔接种鸡胚,剂量为10^3.0 EID₅₀/枚,注射体积为0.1 mL,对照组以同样的方法接种等体积PBS。检测免疫后不同时间点肺脏、胸腺、脾脏和法氏囊组织的病毒载量。选取病毒载量最高的法氏囊组织进行转录组学测序后,筛选免疫相关差异表达基因并分析其参与的主要功能及通路。【结果】免疫后1 d法氏囊组织中即可监测到病毒,免疫后3 d病毒载量达到最高。将免疫后3 d的法氏囊进行转录组学分析,与对照组相比,免疫组有453个基因上调、98个基因下调,其中免疫相关基因有36个上调、10个下调。免疫相关差异表达基因主要富集于自噬和细胞因子-细胞因子受体相互作用的免疫相关通路。差异表达基因蛋白互作分析显示,自噬通路中富集的BCL2与其他免疫相关基...     

鸭病毒性肝炎鸭胚灭活疫苗的研究

以鸭病毒性肝炎病毒Ⅰ型ATCC毒株接种健康鸭胚,收集致死的全胚组织作制苗材料,用福尔马林灭活,以麸氨酸钠终止其作用。先后试制疫苗11批,在试验室免疫雏鸭71只,经强毒攻击后,总的保护率为90.4％。本疫苗免疫雏鸭3天后可产生较坚强的免疫力,在室温至少可保存11天,在4℃可保存254天。经在江苏、安徽、广东等省推广应用200000头剂,均安全有效,颇受用户欢迎,对控制鸭病毒性肝炎的流行起了重要作用。     

表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组耐热新城疫病毒的构建及免疫原性

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大的经济损失.为研发新型PCV2疫苗,采用反向遗传操作技术,以耐热低毒的新城疫病毒TS09-C株为载体,将PCV2主要免疫原蛋白Cap以单独编码框的方式插入至TS09-C株的基因P和M之间,为增强Cap蛋白在载体内的高效...     

新城疫病毒的分子生物学及应用研究进展

新城疫是当今全球范围内最严重的家禽传染病,特别是对养鸡业可造成重大经济损失。新城疫病毒是一种负链RNA病毒,含有六个主要蛋白,按顺序3′-NP-P-M-F-HN-L-5′排列,其中最主要的糖蛋白是F和HN蛋白,这两个蛋白不仅与病毒的毒力和致病性有关,也是诱导产生保护性抗体的蛋白。许多分子生物学技术已经应用于新城疫的诊断。利用分子生物技术也研究出了很多基因工程疫苗比如基因工程活载体疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗等。近年来反向遗传操作技术的发展,新城疫病毒已经被开发成病毒载体,可以携带外源基因研制新城疫病毒活载体疫苗,表达IBDV和IBV的新城疫活载体疫苗已经研制。     

从鹌鹑分离的一株新城疫病毒的性状研究

自某种鹌鹑场一群爆发新城疫病鹌鹑中,分离到一株新城疫病毒,ICPI和MDT测定结果属强毒力株,能凝集水牛、绵羊和鸡的红细胞,但不凝集驴红细胞;血凝素56℃10min稳定,血凝解脱速度缓慢。另外从该病爆发前2个月的零星散发腹泻病鹌粪便中检出HA价很高的NDV。鹌鹑是近年来发展起来的一种特禽,它可携带或感染一些家禽易感的病原体。国内有关鹌鹑野外感染新城疫病毒而发病的报道仅见到一篇,但研究其病原性状的报道还未见过。本试验为某种鹌鹑场鹌鹑新城疫病毒的分离及其性状的研究,给鹌鹑的病原学及新城疫流行病学提供资料。     

新城疫疫苗研究现状

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性烈性传染病,严重危害养禽业的发展。在疫苗接种免疫压力下,NDV演化出不同的基因型,且各基因型毒株之间不能较好地提供交叉保护,导致临床上多见非典型新城疫与高抗体家禽发生NDV感染。目前,疫苗免疫仍是预防该病的重要措施,随着其病原学与分子生物学技术的发展,研究者研发了不同类型的ND疫苗。论文就新城疫病毒的病原分子特征、传统疫苗及新型基因工程疫苗的研究现状及发展前景进行综述,旨在为我国新城疫的防控及新城疫疫苗的研发提供一定的参考。     

新城疫病毒SXFP株的分离鉴定

从陕西富平某种鸡场发病鸡群中分离出一株流行毒株,经HA—HI试验和动物回归试验,确定分离到的病毒为鸡新城疫病毒（NDV）,命名为SXFP株。经过测定。SXFP株鸡胚半数致死量（ELD50）为10^9.0／0．1mL;鸡胚最小致死量的平均致死时间（MDT）为52．3h,对1日龄SPF雏鸡脑内致病指数（ICPI）为1．92,提示SXFP株为强毒株。血清HI交叉反应试验显示SXFP株和La Sota株存在较小的抗原性差异。     

新城疫病毒在不同的细胞上增殖特性的研究

研究新城疫病毒（Ｎｅｗｓｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ,ＮＤＶ）可,弱毒株在不同的传代细胞的生物学特性。Ｆ４８Ｅ８强毒株在ＢＨＫ、Ｖｅｒｏ和ＣＥＦ中都能增殖并产生细胞病变,而Ｖ４生弱毒株不能在ＢＨＫ和Ｖｅｒｏ中增殖,当ＭＥＭ含１０ｕｇ／ｍＬ胰蛋白酶时,ＮＤＶ弱毒株在Ｖｅｒｏ中能较好地复制,将Ｖ４株在Ｖｅｒｏ中传代培养后,Ｖｅｒｏ中传代的Ｖ４毒株的ＨＡ较低,但毒力增强,ＢＨＫ中传代的Ｖ４毒     

新城疫病毒Lasota株在鸡胚中的繁殖动态研究

用新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｌａｓｏｔａ株尿囊腔接种１０月龄非免疫鸡胚，以血凝（ＨＡ）试验检测接种后２４、４８、７２、９６、１２０、１４４和１６８小时所收集的鸡胚液（尿囊液和羊水），胚体，尿囊膜的ＨＡ价，结果表明，在上述时间内，胚体，尿囊膜的含毒量很低，无收获价值，病毒在鸡胚液中自接种后２４小时繁殖呈线性上升，至１２０小时，胚液中含毒量最高，以后则下降，故此时是收获的最佳时间。     

一株鸽源新城疫病毒的分离鉴定

从广东发病鸽群中采集的拭子样本中分离到1株新城疫病毒,用聚合酶链反应(PCR)、血凝抑制试验(HI)及基因测序等对其进行鉴定。结果表明,此分离株具有血凝活性,且可与新城疫病毒标准阳性血清发生特异性抑制反应;用针对新城疫病毒的F基因及P基因特异性鉴定引物对该分离株进行PCR扩增,可扩增出特异性目的片段;测序及BLAST分析表明,其与美国新城疫病毒分离株Pigeon/US(TX)/98的F基因核苷酸序列相似性高达97%以上。毒株被鉴定为鸽源新城疫病毒,并命名为Pigeon/Guangdong/ZQ-17。     

一株鸽新城疫病毒的分离鉴定

为了对广东地区某鸽场疑似鸽新城疫病毒感染的鸽群进行病原学诊断,试验采用血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)、F基因扩增及序列测定等一系列综合试验对其进行病原学鉴定。结果表明:该分离株具有血凝活性,且这种血凝性可被新城疫病毒(NDV)标准阳性血清抑制,而不能被减蛋综合征病毒(EDSV)、禽流感病毒(AIV)-H5、AIV-H7、AIV-H9阳性血清抑制;用针对NDV F基因设计的特异性鉴定引物对该分离株进行PCR扩增,可扩增出相应的目的片段;该分离株与天津分离株AG/Tianjin/07的核苷酸序列的相似性高达99%。说明该分离株为鸽新城疫病毒,命名为Pigeon/Guangdong/SD54/2006。     

鸡传染性喉气管炎病毒LJS09株致病性的研究

为鉴定鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株(于2009年分离自江苏省)的致病性,本研究将ILTV LJS09以102 EID50的剂量人工感染SPF鸡。结果表明在感染后4 d~6 d(dpi),感染鸡表现出呼吸困难等临床症状;剖检时可见明显的喉气管病变及典型的组织病理学变化;临床指数达到1.4;发病率和死亡率分别为80%和10%;感染鸡血清抗体水平于8 dpi开始转为阳性(30%),20 dpi血清抗体全部转阳(100%)。另外,荧光定量PCR检测结果表明ILTV在感染鸡体内分布广泛,主要嗜性组织为喉头、气管、哈德氏腺、脑、盲肠和腺胃。根据感染鸡的临床指数、发病率和死亡率,表明ILTV LJS09株对鸡具有较强的致病性。     

新城疫基因工程疫苗的研究与应用进展

新城疫是当今世界上最严重的家禽传染病之一，特别是对养鸡业可造成重大经济损失，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的传染病。新城疫的主要防控手段仍是免疫接种，虽然传统的灭活疫苗和弱毒疫苗在疫病的控制中发挥了巨大作用，但存在着毒力返强、散毒和免疫期短等问题，不利于疫病的控制和消灭。论文论述了国内外应用现代分子生物技术对新城疫亚单位疫苗、重组活载体疫苗、DNA疫苗、新城疫病毒载体疫苗的研究和应用情况，展示了基因工程疫苗良好的应用前景。