转新疆野生樱桃李psoRPM1基因烟草抵抗南方根结线虫

正从新疆野生樱桃李(Prunus sogdiana)抗南方根结线虫单株中分离克隆得到一个能响应南方根结线虫侵染的抗病基因psoRPM1,利用农杆菌介导方法将其导入烟草中,并对其抗性进行了鉴定。结果显示,构建的pCAMBA1305.1表达载体能成功地将psoRPM1基因导入高度感病的烟草‘W38'中,并获得了9株转基因单株。对转基因单株进行抗性鉴定,结果显示转入psoRPM1基因后使烟草‘W38'对南方根结     

抗南方根结线虫新疆野生樱桃李巨细胞的发育及CCS52B基因的作用

以对南方根结线虫（Meloidogyne incognita）表现感病和抗病的新疆野生樱桃李（Prunus sogdiana Vassilcz.）绿枝扦插苗为材料,观察接种南方根结线虫（Meloidogyne incognita）后在侵染数量、巨细胞发育以及CCS52B基因表达方面的差异。结果显示：在感病植株中南方根结线虫的侵染数量明显高于抗病植株。感病植株接种5 d时已可观察到大量线虫建立了取食位点,到21 d线虫已经成熟、产卵并完成其生活史。而在抗病植株中,接种7 d后仅在少数植株中观察到线虫建立了取食位点,到21 d时观察到大量线虫发育停滞,个别线虫到接种后35 d才发育成雌虫。感病植株的巨细胞面积和细胞核面积明显大于抗病植株。CCS52是一类核内周期激活因子,对于核内复制以及依赖于染色体加倍的细胞膨大至关重要。在樱桃李中,CCS52B基因在感病和抗病植株中都只在巨细胞中表达,并且感病植株中早期表达强于抗病植株,说明在感病植株中线虫容易建立取食位点并完成生活史,是由于CCS52B基因参与了巨细胞形成与发育,其早期的高表达提高了巨细胞中的核内复制,促进了细胞核倍性增加,进而促进巨细胞发育从而有利于线虫发育,导致植株感病。     

新疆野生樱桃李SSR体系的建立及应用

为建立适宜新疆野生樱桃李的SSR分子标记技术体系,通过对PCR反应程序、反应体系(DNA模板量、引物浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶用量)以及退火温度进行了探索,建立了适宜野生樱桃李的SSR-PCR反应体系。结果表明:在25μL反应体系中,Mg2+1.0 mmol/L、引物0.5μmol/L、dNTPs 0.20 mmol/L、TaqDNA聚合酶1.0 U、模板DNA 30 ng、退火温度为60℃。SSR扩增程序:94℃预变性5 min,35个循环(94℃30 s,60℃1 min,72℃1 min),72℃延伸10 min,可筛选出稳定性好、多态性高的SSR引物。     

中国葡萄抗南方根结线虫野生资源的筛选

在１４种中国葡萄野生资源上接种南方根结线虫,以根结指数和根际根结线虫数为指标,筛选出华东葡萄、福建葡萄、毛葡萄、万县野葡萄和蛇葡萄属的乌头叶葡萄为抗性资源,燕山葡萄、华北葡萄、山葡萄、刺葡萄、复叶葡萄为病资源,小果野葡萄、同时对其侵染后根组织结构的变化进行了观察,对根系活力,Ｐｒｏ含量及ＰＯＤ活性进行了测定。     

辣椒CaSn 基因超表达增强转基因烟草对南方根结线虫的抗性

 CaSn 基因是在辣椒（Capsicum annuum）‘Santaka’中发现的新型抗菌肽Snakin 家族基因。 通过RT-PCR,将CaSn 基因从辣椒中分离并构建到pBI-121 植物表达载体,通过农杆菌EHA105 介导转 化白肋烟（Nicotiana tabacum‘White burley’）,筛选到10 个独立的转基因株系,并对T1 代植株进行抗 南方根结线虫（Meloidogyne incognita）鉴定及靶标基因表达分析。结果表明CaSn 已转入白肋烟,能够进 行超量表达,并且转CaSn 基因白肋烟上的根结数量比转空载体对照和非转基因对照减少70%,同时不同 转基因烟草株系间对南方根结线虫的抗性也存在着一定差别。通过试验证明了辣椒中的抗菌肽基因CaSn 具有抗南方根结线虫作用,对于植物抗线虫资源的挖掘及利用提供了重要理论依据。     

植物抗根结线虫转基因育种研究进展

对当前植物抗根结线虫转基因育种中所采用基因的特点和育种策略进行了详细的综述.根结线虫是全世界范围内危害经济作物最为严重的病原性线虫,约1 700种作物受到根结线虫的危害,而南方根结线虫是4种主要根结线虫中危害最严重的一种.利用转基因技术进行抗根结线虫育种是一种有希望的途径,因为它具有过程简单、费用小和不造成环境污染等优点.     

4个甜瓜野生近缘种对南方根结线虫的抗性评价

为了确定4个甜瓜野生近缘种抗南方根结线虫的水平,采用盆栽幼苗人工接种的方法,测定了南方根结线虫侵染后幼苗各器官相对生长量及相关抗性指标,并进行了聚类分析和隶属函数分析。结果表明,南方根结线虫侵染后幼苗不同器官的相对生长量、抗性指标及其变异系数不同。利用变异系数较大的根结指数进行聚类分析,结果与4个抗性指标聚类分析的结果一致。通过综合鉴定评价,将4个甜瓜野生近缘种分为中抗和低抗2个类群,抗性由强到弱依次为:角瓜、西印度瓜、刺瓜、无花果叶瓜。     

4个甜瓜野生近缘种对南方根结线虫的抗性评价

为了确定4个甜瓜野生近缘种抗南方根结线虫的水平,采用盆栽幼苗人工接种的方法,测定了南方根结线虫侵染后幼苗各器官相对生长量及相关抗性指标,并进行了聚类分析和隶属函数分析。结果表明,南方根结线虫侵染后幼苗不同器官的相对生长量、抗性指标及其变异系数不同。利用变异系数较大的根结指数进行聚类分析,结果与4个抗性指标聚类分析的结果一致。通过综合鉴定评价,将4个甜瓜野生近缘种分为中抗和低抗2个类群,抗性由强到弱依次为：角瓜、西印度瓜、刺瓜、无花果叶瓜。     

樱桃李鲜食新品种‘森果佳人’

 樱桃李新品种‘森果佳人’是从新疆野生樱桃李（Prunus cerasifera Ehrh.）种质资源迁地保存圃（山东胶州）自然授粉实生后代中选育而来。果实近圆形,平均单果质量15.5 g,最大18.0 g。果实底色黄色,果面着红色,有果粉。果肉黄色,细腻多汁,可溶性固形物含量16.3%,总糖166.4 mg · g^-1 FW,总酸2.42 mg · g^-1 FW,甜酸适口,风味浓。果核小,离核。树体开张,早实丰产。在青岛胶州地区7月下旬果实成熟,果实发育期95 d。     

南方根结线虫Mi-flp-16基因的克隆及原位杂交分析

以南方根结线虫2龄幼虫为材料,根据已知南方根结线虫flp基因的EST序列设计引物,利用末端快速扩增法（RACE）获得FLP基因Mi-flp-16的cDNA全长(GenBank登录号为EU549831)。该基因全长690 bp,包括一个528 bp的完整开放阅读框（ORF）,编码一条176个氨基酸残基的多肽。序列分析表明Mi-flp-16编码3个FLP肽,即2个AQTFVRF和1个GQTFVRF。原位杂交结果显示此基因表达位置在围喉神经环。     

抗根结线虫番茄新品种‘莱红1号’

 ‘莱红1号’属无限生长类型番茄一代杂种,生长势强,叶色浓绿,果穗总状,果实圆形,大红色,每穗果实成熟比较集中,单果质量250～300 g,产量较高,耐贮运,高抗根结线虫,对其它病害也具有良好的抗性,比较适合早春保护地栽培。     

抗根结线虫病番茄新品种‘牟番1号’

‘牟番1号’为无限生长类型番茄杂交新品种。8~9节左右着生第一花序,果实大小均匀,亮粉红色,无青肩,圆形,硬果型,平均单果质量155.1 g,抗裂果,耐贮运;可溶性固形物含量4.7%,维生素C含量0.2316 mg·g-1,糖酸比为7.5;早熟、优质、高产稳产;高抗根结线虫病,抗花叶病毒病,抗叶霉病,综合性状表现优良。     

甘肃桃抗南方根结线虫性状的SRAP标记

以桃野生近缘种红根甘肃桃（Prunus kansuensis）与贝蕾[P. persica（L.）Batsch.]杂交的BC1代190株后代为试材,采用SRAP分子标记进行遗传分析。通过筛选在亲本中扩增稳定且多态性丰富的53对SRAP引物进行后代分析,获得来自红根甘肃桃且符合1︰1分离比例的标记115个。应用Mapmaker/Exp 3.0分析软件构建了红根甘肃桃的SRAP分子连锁图谱。该图谱共8个连锁群,包含103个标记,其中102个SRAP标记、1个抗南方根结线虫（Meloidogyne incognita）标记,总图距994.2 cM,每个连锁群的平均长度为124.3 cM,标记间平均图距为9.6 cM。抗南方根结线虫标记Mi-redkansu位于第5连锁群,并获得与其紧密连锁的SRAP标记,其遗传距离为2.1 cM。以36株F2代群体作为验证,检验标记的准确性为91.7%。     

番茄育种后代Mi抗性基冈植株的筛选

根据已报道的番茄抗根结线虫病Mi基因的CAP标记设计引物,通过微量DNA提取方法提取番茄叶片的DNA.在优化DNA提取方法和PCR反应条件的基础上,对番茄育种后代共306株试材进行抗性标记筛选鉴定。其中264株无PCR扩增产物,即无抗根结线虫病基因位点,其余42株均产生了750 bp的特异片段,即具有抗根结线虫病基因的位点。利用CAP标记,经TaqI酶酶切,有3株产生了570 bp和160 bp二条特异带,为抗性纯合体;8株产生了750 bp,570 bp,160 bp三条特异带,为抗性杂合体。31株不能被TaqI酶消解,只有未消解前750 bp一条带,为感病植株。     

利用植物性添加物防治烟草根结线虫病的研究

调查了河南省多种经济作物根结线虫病的发生情况,对其采样进行了种类鉴定研究。针对烟草根结线虫分别进行盆栽试验、田间小区试验和田间示范应用,系统考察了一种由多种中草药材料混合而成的新型植物源线虫速杀剂对烟草根结线虫病的防治效果,为研发低毒性、低残留杀线剂、提高农产品的质量安全性提供科学依据。     

大功率微波防治大棚甜瓜及盆栽黄瓜根结线 虫研究

尝试通过物理方式防治蔬菜根结线虫,设计制造了功率20 kW,频率为915 MHz 的大功率土
壤微波处理机,并进行了田间试验,结果表明：大棚土壤经微波60 s 照射能够显著降低甜瓜根结数和根结
指数,盆栽试验只需处理10 s 即可显著防治黄瓜根结线虫。大棚微波处理对甜瓜株高、根径及果实糖度、
硬度和果形指数的影响与无微波处理的对照差异不显著。大功率微波对大棚蔬菜根结线虫有显著防治效果,
但同时存在耗能高的缺陷,有待进一步降低能耗,提高效率。     

抗南方根结线虫黄瓜砧木的筛选

搜集国内外黄瓜嫁接砧木资源108份,对其抗南方根结线虫能力进行鉴定,筛选抗或耐南方根结线虫的砧木品种,探讨用抗根结线虫的瓜类野生种作砧木的可能性。结果表明,以野生瓜棘瓜为砧木的黄瓜嫁接苗在嫁接亲和性、抗南方根结线虫能力、产量、株高和果实品质等方面,优于目前生产上大面积推广的以黑籽南瓜和火凤凰为砧木的黄瓜嫁接苗。     

野生番茄LA2157中热稳定抗根结线虫基因Mi-9候选基因的分离与过表达载体构建

根结线虫是番茄上的重要土传病害,选育抗根结线虫品种是最有效的防治方法,但是目前转育到栽培番茄中的抗根结线虫基因Mi-1在土温高于28℃时就丧失了抗性。本试验利用热稳定抗根结线虫野生番茄材料LA2157,根据Mi-1基因的序列信息,对其中热稳定抗根结线虫Mi-9基因进行同源克隆,在LA2157中共获得2个候选基因片段;通过In-Fusion克隆技术,将候选基因与过表达载体p BI121进行连接,经电泳检测和测序分析,最终构建Mi-9候选基因的过表达重组载体。     

辣椒抗根结线虫基因Me3的精细定位

 以含Me3基因的抗根结线虫辣椒自交系‘HDA149’为父本,感根结线虫辣椒自交系‘8214’为母本,构建了一个2 133株的F2作图群体。采用群体分离分析法（Bulked Segregant Analysis,BSA）,构建抗、感病两个DNA池,对由两亲本筛选出来的285对引物进行扩增分析,发现引物SSCP_B322和EPMS658在抗、感池间具有稳定的多态性。继续用这两对引物对F2单株进行扩增,以JoinMap 3.0软件分析发现SSCP_B322和EPMS658标记位于Me3基因两侧,遗传图距分别为0.56 cM和1.33 cM。运用回交群体BC1和F3群体验证实了这两个标记,可有效用于辣椒抗线虫分子标记辅助育种,也为图位克隆Me3基因奠定了基础。