大白菜游离小孢子培养技术研究

游离小孢子培养技术是获得大白菜单倍体植株的有效途径之一。通过对影响大白菜游离小孢子胚胎发生的主要因素一材料基因型、供体母株生长状态、小孢子发育时期、培养方法、培养条件和影响植株再生频率的因素以及小孢子植株的加倍方法等进行了综述。     

大白菜游离小孢子培养研究进展

综述了国内外大白菜游离小孢子培养的最新研究成果。重点讨论了大白菜游离小孢子培养的影响因素:材料的基因型、供体植株的生理状况、小孢子发育时期、分离和培养方法、预处理、培养基及其添加物、胚状体诱导、植株再生和倍性鉴定等。展望了大白菜游离小孢子培养技术的应用前景,同时指出了这一研究领域存在的问题。     

影响大白菜游离小孢子培养的因素

影响大白菜游离小孢子培养的因素主要有遗传基因、温度和培养基,遗传基因对小孢子培养起着决定性的作用,低温预处理花蕾可明显提高小孢子胚状体的诱导率,高温预培养能促进胚状体诱导,NLN-13液体培养基中添加谷氨酰胺、谷胱甘肽、L-丝氨酸可明显促进小孢子胚状体形成.     

大白菜雄性不育系小孢子发生的细胞形态学研究

  采用塑料半薄切片技术, 在光学显微镜下系统地观察了大白菜同质异核、异质同核细胞质雄性不育系、细胞核雄性不育系及其相应保持系花药发育过程的细胞形态学特征。研究结果表明: 细胞核雄性不育系花药败育主要发生在减数分裂期, 花粉母细胞不能发生正常的减数分裂; 细胞质雄性不育系花药败育主要发生在四分体时期或小孢子单核期, 表现为绒毡层细胞异常, 四分体或小孢子败育。     

大白菜游离小孢子培养技术研究进展

综述了影响大白菜小孢子培养的主要因素,阐述了影响大白菜小孢子植株再生的因素,总结了大白菜小孢子胚再生植株的继代与加代技术,提出了该技术存在的问题,并展望了这项技术在研究和生产实践中的应用前景.     

大白菜小孢子培养影响因素研究

以福田50、长快两个大白菜一代杂种为试材,对影响小孢子胚状体形成的几个因素进行了研究。结果表明,0.1~1.0mg·L-1的NAA对大白菜小孢子胚的发生有抑制作用,而且随生长素浓度增高抑制作用加大。2,4-D对小孢子胚的形成有强烈的抑制作用。较低浓度的细胞分裂素能促进胚状体的发生,而较高浓度则产生抑制作用,ZT的最适宜浓度为0.2mg·L-1,6-BA的最适浓度为0.4mg·L-1,且6-BA的作用大于ZT。生长素和细胞分裂素的综合影响是两者影响的叠加。NLN培养基是最适于大白菜游离小孢子培养的基本培养基。活性炭对大白菜小孢子胚的发生有抑制作用。     

大白菜游离小孢子培养技术高效体系的研究

以大白菜吉红82、#534DH 群体及#438 群体为试材，研究了利用细胞破碎仪机械提取小孢子与人工挤压提取小孢子对大白菜游离小孢子活力及提取量的影响。结果表明：机械提取替代人工挤压可在短时间内同时提取多份样品，并可快速调整小孢子的培养浓度。收集40 个适期花蕾于5 mL 离心管内，3 000 r·min-1 破碎10 s，将提取的小孢子定容于25 mL NLN-13 培养基，可确保小孢子浓度在适宜培养范围内，并成功诱导胚胎发生。     

大白菜游离小孢子培养最新研究进展

综述了影响大白菜游离小孢子培养的主要因素:材料的基因型、小孢子发育时期、亲本植株的生理状况、培养技术以及胚状体发生及植株再生等的研究情况.同时也对大白菜游离小孢子培养技术发展前景进行了展望.     

大白菜应用小孢子培养应注意的问题

综述了白菜育种中应用游离小孢子培养技术所应注意的基因型和供体植株的选择、挑选合适大小的花蕾、植株再生以及移栽技术、倍性鉴定等问题,以便提高该技术在白菜育种工作中利用的成功率和效率.     

运用基因枪法进行蛹虫草遗传转化的研究

采用蛹虫草[Cordyceps militaris（L.）Link]野生型菌株CM01为供试材料,以金粉包裹质粒pDHt-gpdA-GFP-bar,运用基因枪法转化,经草铵膦抗性筛选,最终在靶距离6 cm或9 cm,氦气压力7.58 × 106 Pa或8.96 × 106 Pa条件下,获得2个遗传稳定的转化子Gfp2与Gfp3,转化效率为0.4 cfu ? μg-1。PCR鉴定与Southern杂交分析显示,草铵膦抗性基因Bar已经以单拷贝或者多拷贝方式整合到蛹虫草转化子的基因组中。蛹虫草转化子的菌丝在荧光显微镜下可以观测到绿色荧光,表明载体携带的绿色荧光蛋白基因在蛹虫草转化子中得到表达。研究结果表明可以把基因枪法应用于真菌蛹虫草,建立了一种简便有效的遗传转化方法,而转化效率需要通过优化基因枪参数设置、受体材料制备等途径进一步提高。     

基因枪法遗传转化双孢蘑菇菌褶

以双孢蘑菇(Agaricus bisporus)2793为试材,采用基因枪法对其菌褶进行遗传转化,相对转化率为2.69％,转化子经PCR检测表明,外源潮霉素B抗性基因已经被转入到菌丝体中.     

游离小孢子培养育成早熟大白菜新品种‘豫新58’

‘豫新58’是采用游离小孢子培养双单倍体育种技术育成的大白菜一代杂种。该品种早熟,生育期58-60 d。高抗病毒病和软腐病,抗霜霉病和黑斑病;净菜产量67.5 t·hm^-2;叶球矮桩叠包,球形指数1.48。单球质量1.5～2.0 kg。叶质柔嫩,口感略甜,风味佳,生食、熟食皆宜。     

结球甘蓝—大白菜异源三倍体小孢子培养的研究

 为创建结球甘蓝—大白菜异附加系, 以大白菜二倍体(AA, 2n=2x=20) 与结球甘蓝四倍体(CCCC, 2n=4x=36) 杂交获得的8个异源三倍体(ACC, 2n=3x=28) 单株系为试材, 进行游离小孢子培养研究, 获得再生植株, 并对其进行了染色体数目鉴定和性状调查。结果表明, 异源三倍体(ACC) 的小孢子诱导成胚的能力低于双亲; 在NLN中添加15%的蔗糖和0.1 mg·L^-1 6-BA、0.2 mg·L^-1 2, 4-D、0.05 mg·L^-1 KT的培养基上小孢子胚胎发生最高为0.0250个·蕾^-1, 8个株系间有差异, 平均为0.0100个·蕾^-1; 胚胎再生率只有33.3%。小孢子再生植株染色体数在14～27条之间, 田间性状表现多样。     

草菇基因枪法遗传转化体系的建立

 草菇菌株V1308对潮霉素、卡那霉素、遗传霉素、膦丝菌素的抗性测验结果表明, 该菌株对潮霉素敏感, 而对其它三者不敏感。进一步测定结果显示, 潮霉素的最低筛选浓度在PDSA固体培养基上为75 μg·mL ^{- 1} , 在PDSB液体培养基中为50μg·mL ^{- 1}。以含有35S启动子、gus报告基因、潮霉素抗性基因的质粒pCAMB IA1301为表达载体, 采用基因枪法对草菇菌丝体进行遗传转化。结果表明, 基因枪的最佳轰击参数为: 氦气压力1 100 Psi, 真空压力87.88 kPa, 靶距离6 cm, 轰击次数1次。Southern杂交结果显示, gus基因已整合进V1308基因组中。GUS组织化学检测结果证明, gus基因在V1308菌丝体中获得了表达。草菇出菇试验结果显示, 转基因草菇和对照都能正常形成子实体, 子实体组织分离长出的菌丝体经GUS组织化学检测, 证明了外源基因gus能够在转基因草菇的菌丝体中稳定表达。     

利用游离小孢子培养技术育成早熟大白菜新品种‘豫新60’

 ‘豫新60’系采用游离小孢子培养双单倍体育种技术快速育成的大白菜一代杂种。该品种早熟, 生育期60～65 d ; 高抗病毒病( TuMV) 、霜霉病和软腐病; 净菜产量59.9～69.8 t·hm^-2; 叶球矮桩叠抱, 球形指数1.19 , 单球质量1.5～2.0 kg ; 叶质柔嫩, 生食、熟食皆宜; 口感略甜, 风味佳。     

大白菜新品种‘豫新1号’

 摘要：采用游离小孢子培养双单倍体技术育成大白菜一代杂种‘豫新1号’。该品种生育期75 d；抗病毒病、霜霉病、黑斑病及黑腐病；净菜产量81.1—90.7 t/hm ；叶球矮桩叠抱，球形指数1.28，叶球绿白色，整齐，商品性好，耐贮藏；质地柔嫩，生熟食皆宜，口感风味佳。     

通过游离小孢子培养育成的优质大白菜新品种‘豫白菜12号’

 采用游离小孢子培养双单倍体育种技术快速育成的大白菜杂交一代新品种‘豫白菜12号’, 中晚熟, 生育期80~ 85 d; 抗病毒病、霜霉病、黑斑病及黑腐病; 净菜产量96. 5~ 106 t/ hm² ; 半高桩, 叠包类型, 球形指数1. 5, 叶球白色, 整齐, 商品性好, 耐贮藏; 软叶率51. 9 %, 质地柔嫩, 生、熟食皆宜, 口感好, 风味佳。     

利用游离小孢子培养技术育成抗热大白菜新品种‘豫园50’

 采用游离小孢子培养双单倍体育种技术快速育成大白菜一代杂种‘豫园50’。该品种生育期52 d, 高温结球能力强, 单球质量1. 45 kg, 球形指数1. 74 , 抗病毒病、霜霉病、黑斑病和黑腐病等多种病害; 净菜产量52. 6 ~ 58. 7 t.hm^-2, 适合夏季栽培。