金沙柚实生后代四倍体诱导研究

为获得金沙柚四倍体材料,采用不同浓度的秋水仙素、氨磺乐灵和氟乐灵分别对金沙柚种子进行浸种处理、幼芽期诱导处理和幼苗期诱导处理。结果表明,浸种处理以0.3%氨磺乐灵处理24 h效果较好,多倍体诱导率可达8.57%;幼芽期诱导以采用0.05%秋水仙素处理8 h效果较好,多倍体诱导率可达20.83%;幼苗期以0.3%秋水仙素的诱导效果最佳,多倍体诱导率可达58.90%。     

利用二硝基苯胺类除草剂离体诱导西瓜四倍体

 以二倍体西瓜单系Z-A和Z-R为试验材料,采用不同浓度的二硝基苯胺类除草剂——胺磺灵、二甲戊乐灵和氟乐灵处理其离体子叶,并以秋水仙素和不含任何诱导剂的液体培养基为对照,研究诱导西瓜四倍体的效果。结果表明,3种除草剂诱导西瓜四倍体的效果都比秋水仙素好,二甲戊乐灵、胺磺灵、氟乐灵和秋水仙素的四倍体诱导率分别为40.0%、33.3%、26.7%和13.3%。采用子叶直接处理比间接处理的四倍体诱导率高。通过 FDA荧光法对西瓜试管苗叶片表皮保卫细胞叶绿体计数,进行四倍体变异早期鉴定,准确率为90%以上。     

秋石斛同源四倍体诱导与鉴定

 为了创制秋石斛同源四倍体新种质, 以秋石斛同株异花授粉种子为材料, 用组织培养方法,通过种子非共生萌发与原球茎诱导, 在原球茎发育的原胚期, 以低浓度混合诱变剂进行多倍体诱导。结果用0.01%秋水仙素+ 5 mg·L ^{- 1}氨磺灵处理8～10 d, 四倍体(2n = 4X = 76) 诱变率达90%以上, 未发现嵌合体。与二倍体对照比较, 四倍体植株粗壮, 叶色深绿, 叶片宽厚。     

君子兰未成熟胚四倍体诱导及染色体数鉴定

 以君子兰（Clivia miniata Regel.）品种‘胜利’为试材,采用一种新型外植体未成熟胚,利用秋水仙素与组织培养相结合的方法,研究秋水仙素浓度、处理时间和不同胚龄对未成熟胚诱导加倍的影响。结果表明：在MS + NAA 2.0 mg · L-1 + BA 1.5 mg · L-1培养基上,0.01%秋水仙素处理180 d胚龄的未成熟胚20 d诱变效果最佳,四倍体诱变率最高,达30.8%,形态变化率达36.5%,死亡率为34.1%。经0.03%秋水仙素处理120 d胚龄的未成熟胚30 d诱变效果也较好,四倍体诱变率较高,达24.0%,形态变化率达21.1%,死亡率为46.7%。经染色体数观察,加倍处理后代中存在2x、4x和混倍体植株。随机调查了267株加倍处理植株,得到30株四倍体（2n = 4x = 44）、194株二倍体（2n = 2x = 22）和43株混倍体,平均四倍体诱变率为11.2%。秋水仙素处理出现的植株生长缓慢,生根明显较晚,叶片变宽变短等形态变化可以作为加倍的初期有效判断指标。     

不同诱导剂和诱导方法对西瓜单倍体染色体加倍效果的比较研究

为探究不同诱导剂和诱导方法对西瓜单倍体染色体加倍的效果,以西瓜花药离体培养获得的单倍体植株为材料,利用不同质量浓度的秋水仙素和氟乐灵进行培养基加倍、浸芽加倍、滴生长点加倍3种方法研究单倍体植株诱导二倍体植株的效果。结果表明,不同加倍方法对单倍体加倍的诱导率存在很大差异。秋水仙素诱导加倍,植株的存活率均达到100%,氟乐灵诱导加倍,加倍植株的致死率最高达到100%。组培法诱导加倍时,秋水仙素和氟乐灵均在质量浓度为60 mg·L^-1时,加倍诱导率最高,分别是50.00%和41.67%。浸芽法诱导加倍时,600 mg·L^-1秋水仙素浸芽4 h加倍诱导率最高为75.00%;300 mg·L^-1氟乐灵浸芽2 h加倍诱导率最高为50.00%。滴生长点诱导加倍时,600 mg·L^-1秋水仙素诱导的加倍率最高为50.00%;500 mg·L^-1氟乐灵诱导加倍率最高为27.78%。因此,秋水仙素诱导西瓜单倍体植株加倍效果优于氟乐灵,且浸芽法诱导加倍效果最佳。     

火龙果多倍体诱导体系的优化

【目的】探讨适宜的火龙果多倍体诱导技术体系,以期解决火龙果品种单一、遗传相对狭窄的问题。【方法】以2个主栽的火龙果品种‘大红’和‘白水晶’为材料,通过秋水仙素浸渍法和混培法进行多倍体的诱导,比较不同秋水仙素浓度和处理时间的组合后代变异率和死亡率。【结果】随着秋水仙素浓度升高和处理时间的延长,诱导率和死亡率增加;5 g·L~(-1)秋水仙素浸渍萌动种子24～48 h和50 mg·L~(-1)秋水仙素在培养基中与无菌苗共培养3～5 d多倍体诱导效率较高且死亡率适中,混培法30 d表型变异率高于浸渍法,死亡率低于浸渍法。变异株气孔密度和气孔长度分别为对照的81%和115%,变异株染色体数目包括2n=2X=22,2n=4X=44,2n=6X=66等几种不同类型,此外还存在非整倍体。流式细胞仪检测结果发现:5 g·L~(-1)秋水仙素浸渍萌动种子24 h多倍体和同源四倍体诱导效率最高;50 mg·L~(-1)秋水仙素在培养基中与无菌苗共培养5 d多倍体和同源四倍体诱导效率最高,混培法多倍体和同源四倍体诱导效率高于浸渍法。【结论】50 mg·L~(-1)秋水仙素与无菌苗混培养5 d能提高火龙果多倍体诱导效率,火龙果混培法多倍体和同源四倍体诱导效率高于浸渍法,无菌苗与50 mg·L~(-1)秋水仙素混培5 d是火龙果多倍体诱导的最佳组合,本实验为火龙果多倍体新种质创建奠定了技术基础。     

褪黑素对‘无核白’葡萄体细胞胚的诱导作用

以欧洲葡萄‘无核白’（Vitis vinifera‘Thompson Seedless’）未开放的小花蕾为外植体,研究0、1.0、2.0、3.0 mg ? L-1褪黑素（Melatonin）对其体细胞胚的诱导效果。结果表明：‘无核白’小花蕾在 MS + 1.0 ~ 3.0 mg ? L-1 褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 3 g ? L-1植物凝胶的培养基上继代培养30 d时愈伤组织诱导率较好,为73.67% ~ 89.10%,显著高于2,4-D处理,愈伤组织形成所用时间较2,4-D处理缩短了14 d。愈伤组织诱导120 d时,不同浓度褪黑素均出现体细胞胚,其中,以MS + 1.0 mg ? L-1褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖的培养基体细胞胚的发生率最高,180 d时达12.05%。体胚在 MS + 60 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的X6培养基中萌发30 d后,将萌发的子叶胚转移至MS + 0.2 mg ? L-1 6-BA + 0.1 mg ? L-1 NOA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的成苗培养基上,其中,1.0 mg ? L-1褪黑素诱导产生的体胚发育正常的数量较多,为14.84%。不同浓度褪黑素处理的体胚诱导率均于180 d后增长较快,且低浓度的褪黑素有利于体胚萌发与正常发育,2,4-D诱导的愈伤组织无体胚形成。     

秋水仙素和胺磺灵除草剂诱导小型西瓜四倍体研究

用0.2%秋水仙素水溶液和不同浓度胺磺灵除草剂滴苗处理诱导小型西瓜四倍体。结果表明,用秋水仙素处理,诱变频率基因型间差异较大,高的可以达到26.3%,低的仅有1.4%。胺磺灵诱导小型西瓜四倍体有一定的效果,但整体诱导频率不高。     

不同预处理对辣椒小孢子存活率的影响

研究了低温、高温、无碳源、秋水仙素和甘露醇 5种预处理对 5个辣椒品种小孢子离体培养前期存活率的影响 ,结果表明 ,4℃和无碳源处理对提高小孢子存活率作用明显 ,并且对供试品种都有作用。其中无碳源处理 2d对 83- 5 8的诱导效果最理想 ,存活率达 4 3.33% ,较对照提高 7倍多 ,较其它处理平均提高 2倍以上 ;另外75 - 7- 3- 1低温 (4℃ 2d)、秋水仙素 (1mg·L-12d)处理分别较对照提高 15 .5 %和 13.0 %。     

秋水仙素注射大蒜花苞诱导四倍体的研究

为获得染色体加倍的大蒜植株,用0.05%、0.10%、0.15% 和0.20% 的秋水仙素注射苍山糙蒜和金蒜3 号的花苞,并在不同生长调节剂组合的MS 培养基上培养花苞内形成的气生鳞茎,当再生体系建立后,对根尖进行倍性鉴定。结果表明,MS 基本培养基添加0.05 mg·L-1 NAA 和2.0 mg·L-1 KT 能诱导较多的气生鳞茎萌发,直径4～5 mm 的气生鳞茎萌发率最高,且苍山糙蒜气生鳞茎的萌发率整体比金蒜3 号高。秋水仙素注射花苞后,金蒜3 号的花苞死亡率远远高于苍山糙蒜。随着秋水仙素浓度增大,花苞内形成气生鳞茎数不断降低,染色体加倍率升高。苍山糙蒜以0.20% 秋水仙素浓度处理下四倍体诱导率最高,为7.69%;金蒜3 号以0.15% 秋水仙素浓度处理下四倍体诱导率最高,为11.76%。     

寒富苹果叶片离体再生及四倍体诱导

为建立寒富苹果高效的离体再生体系和多倍体诱导体系,以试管苗叶片为外植体,研究了培养基中激素对寒富叶片再生芽的影响及适宜的四倍体诱导方法。结果表明,当培养基中BA质量浓度为0.5mg/L时,再生频率最高达35.7%;当培养基中BA质量浓度为2.5mg/L时,再生频率超过90%,平均再生芽数在4以上。在培养基中附加1.0mg/LTDZ,再生频率达100%,平均再生芽数达19.47。以附加15、30、60、120mg/L秋水仙素的液体再生培养基处理叶片5d,各个质量浓度处理均诱导出四倍体植株,诱变率在5.3%～22.2%之间;寒富苹果叶片在附加50mg/L秋水仙素固体再生培养基上处理5d亦获得了四倍体植株。研究结果表明寒富苹果叶片具有极强的不定芽再生能力,叶片再生过程中进行秋水仙素处理是获得其四倍体的一个有效途径。     

魔芋组培快繁的影响因素

以万源花魔芋顶芽、球茎为外植体,比较不同激素浓度配比对外植体培养的影响,并进一步诱导试管微型芋。结果表明：顶芽是魔芋组培快繁的最佳外植体,腋芽产生频率高、速度快,较球茎分化不定芽的时间提早60 d左右|腋芽分化适宜培养基是MS + BA 2.4 mg?L-1 + NAA 0.1 mg?L-1,腋芽分化率90%|在增殖培养基中腋芽增殖系数达3.58|腋芽在MS + BA 0.5 mg?L-1 + NAA 0.01 mg?L-1 + 蔗糖50 g?L-1培养基中诱导形成微型芋,培养60 d的诱导率达90.9%。     

山核桃间接体细胞胚发生和植株再生

 以山核桃（Carya cathayensis Sarg.）自然授粉后10周的幼胚为外植体,对影响胚性愈伤组织和体胚发生的主导因子（基本培养基、植物生长调节物质等）进行了比较分析;对影响体胚萌发的脱水处理时间进行了比较;并采用石蜡切片法对幼胚脱分化产生胚性愈伤组织及体胚发生发育过程进行了组织细胞学观察。结果表明,幼胚胚轴和子叶接种在基本培养基1/2 MS上,胚性愈伤组织诱导率显著高于其它处理,达45.3%。接种于基本培养基DW中的幼胚体细胞胚诱导率显著高于其它培养基处理,达16.7%。显微镜下可观察到球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚。培养基添加1.0 mg · L-1 6-BA和0.01 mg · L-1 picloram（氨氯吡啶酸）组合时,胚性愈伤组织诱导率最高,为48.6%;而1.0 mg · L-1 6-BA与0.001 mg · L-1 picloram组合,体胚诱导率最高,为23.6%。体细胞胚发生方式属于间接体胚发生。用饱和Ca(NO3)2 · 4H2O对体胚进行脱水处理,脱水处理3 d后萌发率为39.03%,显著高于对照及其余处理。将脱水处理后的体胚接种至WPM基本培养基中,光照条件下培养,10周后可长成具3 ~ 4片真叶的完整植株。     

毛酸浆浸渍法多倍体诱导技术

以毛酸浆露白种子为试验材料,采用浸渍法进行多倍体诱导,研究了秋水仙素浓度和浸渍时间对后代表型变异率和死亡率的影响,以期筛选适合毛酸浆的多倍体诱导技术体系。结果表明:随着秋水仙素浓度升高和处理时间的延长,毛酸浆下胚轴膨大率升高,但过长的处理时间(36 h)会造成下胚轴膨大率下降。变异株气孔变大、密度变小,染色体数目鉴定结果为正常株2n=2x=24条,变异株2n=4x=48条。不同品种对秋水仙素浓度敏感程度不同,"铁把青"对秋水仙素较敏感,最适宜处理组合为100 mg·L^-1秋水仙素处理12 h,30 d表型变异率可达8.67%;"大黄菇娘果"和"粒粒甜小菇娘"最适宜处理组合为200 mg·L^-1秋水仙素处理12 h,30 d表型变异率分别为6.33%和6.67%。流式细胞仪鉴定发现很多表型变异株是混倍体,流式细胞仪可以在早期对变异株的倍性进行准确鉴定,还可以减少混倍体对育种的影响。     

红姜花体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以红姜花（Hedychium coccineum）的花丝和花药为外植体,通过体细胞胚胎发生途径建立了植株再生体系。结果表明：外植体在MS + 4 mg ? L-1 2,4-D + 4 mg ? L-1 NAA + 1 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1 琼脂的培养基上经过120 d诱导出愈伤组织,愈伤组织在MS + 1 mg ? L-1 2,4-D + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0.25 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的培养基上经过继代筛选,获得浅黄色松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + B5维生素+ 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1 脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.02 mg ? L-1 NAA + 0.02 mg ? L-1 TDZ + 0.5 ~ 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 45 g ? L-1蔗糖的培养基中通过3个月的悬浮培养,可得到均质稳定的胚性细胞悬浮系（ECS）。胚性悬浮细胞在SH无机盐 + B5维生素 + 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0 ~ 0.20 mg ? L-1 TDZ + 45 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚诱导培养基中培养10 d,可见到白色半透明体胚发生,20 d后体胚发育成熟。当TDZ浓度为0.15 mg ? L-1时,体胚诱导率高达4 500个 ? mL-1 PCV ECS（PCV：细胞密实体积）。在SH无机盐 + B5维生素 + 0.20 mg ? L-1 IAA + 0.25 ~ 1.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚萌发培养基上,体胚萌发率高达100%。将萌发的体胚转移到1/2MS + 1 g ? L-1活性炭成苗培养基中,进一步发育成正常的再生植株,植株室外栽培成活率达90%。     

秋水仙素诱导新铁炮百合2n花粉方法的优化

以新铁炮百合种子为试材,采用正交实验设计探索利用秋水仙素处理新铁炮百合种子的诱导2n花粉方法和可能性。结果表明:种子萌发处理时间5 d、秋水仙素浓度0.05%或0.2%时新铁炮百合种子出苗的效果最好;经对大花粉率极差分析,秋水仙素处理浓度是诱导大花粉的最主要因子,秋水仙素浓度0.1%、处理时间为24 h,种子萌发处理时间7 d,种子品种富田3号是诱导新铁炮百合大花粉有效方法。     

秋水仙素诱导樱桃矮化砧木'吉塞拉6号'获得六倍体再生植株

 以三倍体樱桃矮化砧木'吉塞拉6号'（Prunus ceransus × P. canescens）的离体叶片为外植体,采用秋水仙素诱导处理再生出六倍体植株。将外植体首先在加有秋水仙素（50 mg. L-1）、生长素（IBA 0.5 mg. L-1）和细胞分裂素（BA 5.0 mg. L-1）的改良WPM液体培养基中培养5 d,再转移到不含秋水仙素（其它成分相同）的固体培养基上继续培养56 d,再生出形态变异明显的新梢。采用流式细胞仪鉴定染色体倍性,确定其为六倍体新梢。六倍体植株与三倍体的'吉塞拉6号'植株形态学上有明显差异。六倍体的试管苗已在大田移栽成活,并已成功高接在甜樱桃大树上。     

利用胺磺灵诱变西瓜四倍体研究

为了给无籽西瓜的选育提供优质亲本材料,以小果型西瓜二倍体自交系A8为试材,采用胺磺灵对幼苗生长点进行剥滴处理,设计不同浓度和处理天数,进行四倍体诱导,并进行形态学鉴定、流式细胞仪分析鉴定、保卫细胞叶绿体计数法鉴定,经3代种植观察和筛选,获得了稳定的四倍体材料。结果表明:不同处理均可诱变产生该材料的四倍体,其中最有效的处理是在播种后第8天剥除心叶,再用100mg/L胺磺灵连续处理裸露的生长点6d,幼苗成活率达100%,最终诱变率达30.59%。     

组织培养结合秋水仙素诱导南瓜多倍体

以‘红栗2号’南瓜子叶为外植体,探讨外植体消毒时间、激素组合和培养基中秋水仙素浓度对芽诱导率的影响,对所得植株的倍性进行鉴定。结果表明:外植体在3%(w)Na Cl O溶液中消毒15 min,污染率为0且外植体活力较高;MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+秋水仙素40 mg·L-1是诱导‘红栗2号’南瓜产生四倍体的最适培养基,诱导率达到25.71%;组培苗形态及根尖染色体有四倍体存在。     

西瓜未受精胚珠的离体培养

以‘西农9号’和‘蜜桂’为供试材料进行了西瓜未受精胚珠的离体培养,研究了供体植株的黑暗热激处理、基因型、不同取样时间、2,4-D浓度和不同激素浓度组合等因素对其芽点诱导率的影响。结果表明:西瓜未受精离体培养以33℃的条件下黑暗热激4 d时效果最佳;CPPU处理3 d的胚珠诱导率最高;‘西农9号’在2.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA的条件下芽点率最高为13.3%,‘蜜桂’在3.5 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.2/0.5 mg·L-1NAA,3.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA的条件下芽点诱导率最高均为6.7%。