矮化杉木蛋白质组的差异凝胶电泳分析

建立具有高分辨率和稳定性的矮化杉木Cunninghamia lanceolata叶片蛋白质的双向电泳图谱,研究杉木矮化突变的机理。取同一生长环境下的野生型杉木及矮化突变型杉木新梢顶端的叶片,液氮研磨成粉末后用改良TCA-丙酮沉淀法提取总蛋白,分别用CY2和CY3标记,用DIGE技术进行分析。与野生型杉木相比,在矮化突变型杉木的叶片组织中,有14个蛋白质表达水平显著增加,另外15个蛋白质表达水平显著下降。所得的29个差异蛋白质可能与杉木矮化突变的发生有关。图3表3参9     

小鼠胚胎发育不同阶段肝脏差异蛋白质组分析

利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离胎龄12,13,14,16,18d的胎鼠及成鼠肝脏总蛋白,考染显色．PDQuest2DE软件分析获得6个不同发育时期的蛋白质表达谱。从总体看,14,16,18d胎鼠与成鼠肝脏的蛋白质表达谱较为一致,而12d和13d的肝脏蛋白质表达谱则与它们有较明显的差异,其蛋白质表达量显著降低,许多蛋白甚至缺失。以18d的胎肝图谱为参考,14,16d与其匹配率分别为57％,61％,成鼠与其匹配率为69％。与18d胎肝图谱相比,14d表达上调3倍以上的点有27个,16d表达上调3倍以上的点有13个,成鼠表达上调3倍以上的点有15个。并应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对14个差异蛋白质进行分析鉴定,经数据库查询,其中6个蛋白点获得了有意义的结果,分别为细胞周期依赖激酶调节亚基1、凡科尼蛋白、酪氨酸蛋白激酶BLK、通用转录因子3C多肽4、TBC1家族因子13、巨噬细胞受体MARCO。研究结果表明,在小鼠胚胎发育过程中,肝脏合成蛋白的种类和数量均迅速增加,并且细胞的增殖和生长、免疫功能的发育和完善以及蛋白质与核酸的合成和运输在其胎肝发育过程中起着非常重要的作用。     

中华蜜蜂与意大利蜜蜂雄蜂胚胎发育差异蛋白质组 与磷酸化蛋白质组分析

【目的】通过对中华蜜蜂（中蜂）和意大利蜜蜂（意蜂）雄蜂胚胎发育期3个日龄差异蛋白质组和磷酸化蛋白质组进行分析,以探明中蜂、意蜂雄蜂胚胎发育特征并了解雄蜂胚胎发育生物学,为蜜蜂遗传改良提供理论依据。【方法】采用双向电泳方法建立中蜂、意蜂雄蜂胚胎发育3个日龄的蛋白质组及磷酸化蛋白质组表达谱,获得图谱中蛋白质的分子量、等电点和表达量等信息,并对部分差异蛋白质进行质谱分析、功能鉴定和生物信息学分析。【结果】在雄蜂胚胎发育的第1、2、3日龄,中蜂表达332、362、340个蛋白质,其中111、117、112个蛋白质发生了磷酸化修饰;意蜂表达302、331、311个蛋白质,其中有107、110、106个发生了磷酸化修饰。各日龄中蜂、意蜂雄蜂胚胎共同表达的蛋白质分别为214、239和220个。对30个差异表达蛋白质鉴定结果表明这些蛋白主要与碳水化合物代谢和能量生产、蛋白折叠、发育、调控以及骨架蛋白相关。【结论】中蜂雄蜂胚胎3个日龄所表达的全蛋白质、磷酸化蛋白质均多于意蜂,说明中蜂雄蜂胚胎发育较意蜂需要更多的蛋白质参与调控。中蜂、意蜂雄蜂胚胎各日龄约1/3的蛋白质发生了磷酸化修饰,这可能与胚胎发育过程中信号传导、细胞增殖分化等活动有关。意蜂较中蜂胚胎表达较多比例的管家蛋白质,说明意蜂较中蜂悠久的进化史使其胚胎形成了更为保守的发育特点。对差异蛋白功能分析表明,中蜂、意蜂雄蜂在长期进化过程中不仅形成了具有各自生物学特征的胚胎发育方式,而且各自不同生物学特征如中蜂善于利用零星蜜粉源、抗胡蜂和意蜂的高采蜜量、产浆量等性状已在各自蛋白质组中得到体现。     

用于蛋白质组分析的两种马铃薯块茎蛋白质提取方法的比较

【目的】进行两种提取方法下马铃薯块茎蛋白质组结果差异分析,并确定最佳马铃薯块茎蛋白质提取方法.【方法】采用酚提取法和三氯乙酸/丙酮沉淀与乙酸铵/甲醇沉淀相结合的两步沉淀法提取马铃薯块茎蛋白质,进行2-DE分离,对差异表达蛋白质进行MALDI-TOF-MS质谱鉴定.【结果】两步沉淀法提取的马铃薯块茎蛋白质较酚提取法获得蛋白质纯度和浓度及蛋白质点数目均明显增加,双向电泳凝胶图谱分辨率较高.质谱鉴定结果表明,两步沉淀法中鉴定的差异表达蛋白质丰度均显著高于酚提取法,并鉴定到一些新出现的蛋白质包括假定的线粒体NAD依赖的苹果酸脱氢酶、酸性磷酸酶类似物和蛋白酶抑制剂II前体类型B.【结论】提取马铃薯块茎蛋白质时两步沉淀法优于酚提取法.     

小鼠胚胎发育不同阶段肝脏差异蛋白质组分析

利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离胎龄12,13,14,16,18 d的胎鼠及成鼠肝脏总蛋白,考染显色,PDQuest 2 DE软件分析获得6个不同发育时期的蛋白质表达谱.从总体看,14,16,18 d胎鼠与成鼠肝脏的蛋白质表达谱较为一致,而12 d和13 d的肝脏蛋白质表达谱则与它们有较明显的差异,其蛋白质表达量显著降低,许多蛋白甚至缺失.以18 d的胎肝图谱为参考,14,16 d与其匹配率分别为57%,61%,成鼠与其匹配率为69%.与18 d胎肝图谱相比,14 d表达上调3倍以上的点有27个,16 d表达上调3倍以上的点有13个,成鼠表达上调3倍以上的点有15个.并应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对14个差异蛋白质进行分析鉴定,经数据库查询,其中6个蛋白点获得了有意义的结果,分别为细胞周期依赖激酶调节亚基1、凡科尼蛋白、酪氨酸蛋白激酶BLK、通用转录因子3 C多肽4、TBC 1家族因子13、巨噬细胞受体MARCO.研究结果表明,在小鼠胚胎发育过程中,肝脏合成蛋白的种类和数量均迅速增加,并且细胞的增殖和生长、免疫功能的发育和完善以及蛋白质与核酸的合成和运输在其胎肝发育过程中起着非常重要的作用.     

丝状真菌蛋白质组分析

试验建立液氮冷冻研磨、蜗牛酶消化破壁、尿素裂解、同时结合硫酸铵沉淀预分离的方法研究丝状真菌蛋白质组,得到的肽片段混合物通过二维液相色谱分离检测,进行蛋白质组分析。本方法提高了蛋白的分离效率和提取数量,特别是对于那些功能重要但丰度低的蛋白,适合于丝状真菌蛋白组学研究中目的蛋白的提取。试验共鉴定了396个蛋白,包括了参与各种细胞生理过程的蛋白,为进一步开展动物丝状真菌蛋白质组学研究打下了良好的基础。     

性成熟雄蜂与外勤工蜂触角差异蛋白质组分析

【目的】通过对性成熟雄蜂与外勤工蜂差异蛋白质组进行定量及定性的分析,以期探明雄蜂与工蜂触角发挥生理功能的分子基础。【方法】将性成熟雄蜂与外勤工蜂的触角蛋白质进行双向凝胶电泳以获得蛋白质的分子量、等电点和表达量信息,利用MALDI-TOF质谱以及MASCOT软件对部分表达量有差异的蛋白质进行鉴定,并对其进行表达量的聚类分析。【结果】性成熟雄蜂和外勤工蜂的触角各表达了484、479个蛋白质,其中共有蛋白质416个。在表达的蛋白质中,有102个蛋白质在雄蜂触角中高表达,有80个蛋白质在工蜂触角中高表达。9个已鉴定的差异蛋白质在功能上主要参与转运、激素代谢和能量代谢。雄蜂触角中高表达的有气味结合蛋白质14、脂肪酸结合蛋白质(2个)、保幼激素酯酶(2个)、酰基辅酶A脱氢酶、bellwether异构体1以及CG31974-PA;在工蜂触角中高表达的仅有触角特异蛋白质2。【结论】性成熟雄蜂与外勤工蜂表达的总蛋白质的数量没有明显的差异,且大部分为共有蛋白质,说明工蜂与雄蜂触角的分子进化过程是较为保守的。在雄蜂触角中高表达的参与转运以及代谢的蛋白质,可能是为了使雄蜂婚飞过程中能够更灵敏的接受蜂王的性信息素,准确发现并找到蜂王进行交尾;而在工蜂触角中高表达的触角特异蛋白质2,可能在快速准确寻找蜜粉源、接受巢内外信息素以识别同伴的过程中起着重要作用。     

番荔枝花发育不同阶段的差异蛋白质组分析

【目的】从蛋白质组学的角度研究番荔枝花发育不同阶段差异表达的蛋白质,分析相关信号通路,为揭示番荔枝花发育的分子机制提供理论基础。【方法】以番荔枝不同发育阶段的花为材料,采用双向电泳技术（Two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）分离获得花芽（1 mm＜花芽＜2 mm）、花蕾（5 mm＜花蕾＜6 mm）、开花前期（花瓣轻微张开）及开花期（花瓣张开）等不同阶段表达丰度不同的蛋白点,利用MALDI-TOF-MS质谱鉴定技术分析相关差异蛋白质,并对其进行功能注释。【结果】通过蛋白图谱比较分析发现,番荔枝花双向电泳图谱中的每张凝胶图谱中都可以检测到800多个重复蛋白点,其中在不同花发育阶段存在表达差异的有50个蛋白点。经质谱鉴定分析,并采用MASCOT软件在线检索,共检测到36个表达量相差2倍以上的蛋白点。36个蛋白质可分为7个主要的功能类别,这些功能类别包括：呼吸与能量代谢（11个蛋白质）,蛋白合成与代谢（8个蛋白质）,转录与翻译（3个蛋白质）,胁迫与防御（2个蛋白质）,细胞分化与增殖（3个蛋白质）,次生物质代谢（8个蛋白质）和未知功能蛋白（1个蛋白质）。通过GO分析,发现36个已鉴定的蛋白,分别归属于20个分类（term）。通过对差异蛋白进行定量分析,发现呼吸与能量代谢相关的蛋白中,3个蛋白（A07、C28、C42）随着花发育表达量不断下降,4个蛋白（A36、A37、B13、B29）表达则显著上升。在蛋白合成与代谢相关蛋白中,2个蛋白（A13和A22）在花发育的4个阶段都处于低水平表达,而另5个蛋白（B17、B20、A19、A21和C21）表达量显著上升。一个胁迫与防御相关蛋白（B32）在开花期,表达量达到最大值。2个细胞分化与增殖相关蛋白（B27和C57）表达量也呈逐渐升高的趋势。5个次生物质代谢相关蛋白（A06、A29、A34、C100和C110）随着花发育,表达量逐渐降低,而蛋白质C79和D38在花蕾阶段表达量达到最大值后,又逐渐下降。【结论】通过比较番荔枝花发育4个阶段的蛋白图谱,发现36个蛋白具有不同的差异表达谱。其中呼吸与能量代谢相关蛋白质占最大比例,诸如两个ATP合酶α亚基和丙酮酸脱羧化同工酶,都在番荔枝花发育过程呈现出显著的差异表达,这可能与花发育过程需要耗费大量的能量有关。此外,发掘了两个含有三角状五肽重复蛋白,其表达随着番荔枝花发育阶段的变化而改变,这些蛋白的功能还有待进一步研究。能量代谢、次生代谢、蛋白质合成等生物过程可能都参与了对番荔枝开花过程的调控。     

水稻生育后期蛋白质组差异表达的图谱分析

从蛋白质组学角度对水稻生育后期的叶片蛋白质组变化进行了研究,利用Imagemaster 2D Elite 5.0软件对所得到的双向电泳图谱进行分析比较,以揭示水稻叶片蛋白质组的表达差异。结果表明,经图谱分析共得到差异蛋白质点47个,其中孕穗期及抽穗期新增蛋白质点6个,21个随生育进程表达丰度增加,6个蛋白质点表达丰度逐渐减弱,其它14个蛋白质点呈无规则变化,多表现为在某个生育时期具有峰值;蛋白质是细胞功能执行者,受细胞功能或细胞环境变化的影响,因此,上述蛋白质发生变化的原因可能与水稻后期的发育转变有关系。     

羊绒蛋白质组表达差异的国内外研究进展

绒山羊以其独特的绒毛产品而成为重要的经济动物,在动物生产中享有重要的地位.绒毛的质地如柔软度、光泽度、保暖度等指标都与绒蛋白有直接的关系.本文主要阐述了近几年国内外在绒蛋白方面所做的主要研究,以便对今后的研究工作提供一些有价值的参考.     

大理花组培脱毒快繁研究初报

以大理花茎尖作供体材料，MS为基本培养基，在激素组合6-BA1～4mg／L NAA0．5～2mg／L的范围内均能诱导出愈伤组织，但以MS 6-BA 2mg／L NAA 1mg／L的诱导率最高，可达75％；将愈伤组织转接到MS 6-BA 1～4mg／L NAA 0．5～2mg／L的培养基上，其中以MS 6-BA 2mg／L NAA 0．5mg／L的分化率最高，分化率达100％。     

矮壮素对大丽花生长发育和生理特性的影响

以大丽花高生型品种‘丽人’为试材,采用叶面喷施法,研究矮壮素(PP333和DPC)不同施用浓度、不同时间对其生长发育和部分生理指标的影响,结果表明:喷施浓度以900 mg·L-1效果最好,PP333株高较CK降低了近1/3;节间长较CK缩短4.60cm;茎粗较CK增加了24.06%;DPC效果稍差。用PP333900 mg·L-1浓度处理80 d,叶片叶绿素含量最高(1.971mg·L-1),比CK提高了136.90%,用PP333和DPC喷施,浓度为900 mg·L-180 d时,叶片可溶性糖含量达最大值,为9.163,9.173 mg·L-1。说明喷施多效唑和缩节胺可显著影响大丽花生长发育和生理特性,促进其发育,增强其抗逆性,使大丽花的株型、观赏价值和开花品质得到明显改善。     

盆栽大丽花的花期控制研究

探讨了影响大丽花开花的若干因素。在试验中利用扦插不定芽来繁殖种苗,采取盆栽独本大丽花的方式,分别于5年里的3月至10月间对63个大丽花品种的花期控制进行了研究。将大丽花按开花先后分为早花、中花、晚花三个品种类群;并运用全息生物学基本原理对取自根颈不同部位插穗所繁殖时后代的开花情况进行了分析;确定了营养水平会给大丽花花期早晚带来重要影响。从而总结出控制大丽花开花的具体措施,使其成品出圃率从50%左右提高到80%左右,显著增加了盆栽大丽花的观赏、商品价值。     

两种植物生长延缓剂对盆栽大丽菊的矮化效应

为探究不同浓度多效唑与丁酰肼对盆栽大丽菊的矮化效应,以盆栽玫红双色大丽菊为试验材料,采用生长延缓剂丁酰肼、多效唑定期定量喷施大丽菊幼苗,调查两种生长延缓剂对盆栽大丽菊株型及叶绿素含量的影响.结果表明:丁酰肼与多效唑两种植物生长延缓剂对玫红双色大丽菊的株高、冠幅、叶长、叶宽、叶绿素含量均产生不同程度的影响.其中150 m...     

29个大丽花品种灰色关联度分析

[目的]快速选育出大丽花的优良品种,建立大丽花筛选的综合评价体系。[方法]以29个大丽花品种为试验材料,选取11个数量性状作为评价因子,采用灰色关联度分析法建立评价体系,综合评价大丽花品种的优劣。[结果]筛选出2个大丽花品种英引-535和紫条纹,其株形饱满、花色鲜艳、综合性状良好,等权关联度分别为0.847 4、0.844 9,加权关联度分别为0.864 9、0.854 8。[结论]灰色关联度分析法为大丽花新品种的选育提供了理论基础。     

侵染大丽花的黄瓜花叶病毒分离物的鉴定

根据病毒生物学特性、粒体形态和血清学性质，初步鉴定在厦门地区种植的大丽花上表现花叶症状的病株上分离的1个病毒分离物属于黄瓜花叶病毒。在供试的11科39种(或品种)植物中，该分离物通过摩擦接种能侵染其中的9科35种(或品种)；失活温度为50-55℃，稀释终点为10^-3～10^-4，体外存活期为24-28h；病毒粒体球状，直径约28-30nm。经间接ELISA测定，该分离物与烟草花叶病毒、南瓜花叶病毒、烟草环斑病毒、番茄不孕病毒、西番莲木质病毒的抗血清均无反应。与黄瓜花叶病毒抗血清具有强阳性反应，鉴定该病毒是黄瓜花叶病毒。     

水杨酸对大丽花多酚氧化酶的影响

目的探讨如何提高大丽花的抗病性．方法以大丽花为实验材料,使用水杨酸（SA）叶面喷施处理方式,分析在水杨酸处理其植株叶片后,随时间变化,不同浓度的水杨酸对PPO活性的影响,为研究大丽花的抗病性提供实验依据．结果本品种大丽花的PPO最适pH为5．8;SA对大丽花PPO有一定的影响．用低于0．5mmol／L的SA处理后的大丽花,PPO活性无显著影响;1～2mmol／L的SA对PPO活性起促进作用,并且于24h达到高峰;而3mmol／L的SA对PPO活性起明显的抑制作用．而用以上几组浓度的SA处理大丽花后,PPO活性在48～60h之后逐渐恢复到未处理状态．结论外源SA对大丽花进行处理后对PPO活性在一定时间内有诱导作用．     

不同品种菊花花瓣衰老生理机制的比较研究

本研究对田间不同生育期秋菊的早花品种‘唐宇金秋'和晚花品种‘祥云'花辩中可溶性糖含量、淀粉含量、SOD活性、脯氨酸、相对电导率等生理生化指标进行了测定.结果表明,不同发育期‘祥云'与‘唐宇金秋'可溶性糖含量的变化趋势基本一致,‘唐宇金秋'初花期淀粉含量最高,而‘祥云'淀粉含量最高值出现在中花期;在初花期后‘祥云'脯氨酸的积累量高于‘唐宇金秋',中花期‘祥云'高于‘唐宇金秋'38.6%.整个测定时期‘祥云'和‘唐宇金秋'花瓣的相对电导率均呈上升状态,末花期‘祥云'和‘唐宇金秋'相对电导率分别是中花期的2.62倍和1.92倍.早花品种‘唐宇金秋'和晚花品种‘祥云'在整个花期中生理机制存在一定的差异,中花期至末花期是两品种生理生化变化的敏感阶段.     

水稻纹枯病菌菌核形成过程中特异基因的表达与分析

以水稻纹枯病GD-118菌株菌丝形成期的mRNA为驱赶子(driver),以菌核形成期的mRNA为检测子(tester),采用抑制消减杂交(SSH)结合虚拟Northern杂交筛选,构建了水稻纹枯病菌菌核形成过程中特异表达产生的差减cDNA文库;进一步用PCR筛选显示克隆中插入的片段主要分布在200～500bp之间;随机挑取克隆应用虚拟Northern技术以菌丝、菌核cDNA为探针来验证消减有效性,经测序和同源性检测剔除重复序列之后,获得了从菌丝到菌核形成相关的28条特异表达的基因片段;所筛选的特异表达序列主要涉及胁迫响应、转录调控、信号传导、合成代谢等.这为进一步分析水稻纹枯病菌菌核形成过程的相关基因提供了科学线索.     

F1大丽花组培苗快繁技术研究

用F1大丽花的种子、嫩芽及开花茎段做外植体,以MS为基本培养基,在5个分化培养基上接种诱导出芽,在4个继代培养基上扩繁增殖,在4个生根培养基上诱导生根,在4种无土基质上出瓶培养成生产用苗。得出F1大丽花组培苗速繁适用程序为:嫩芽及开花茎段为外植体→接种在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L→增殖在MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+B90.1mg/L→生根在1/2MS+0.1 NAA mg/L→落叶松针叶+细沙出瓶培养。试验采用简易材料和药剂,降低了组培苗生产成本,选取可控花期的不同部位外植体,可缩短育苗周期。