EMS处理甘薯茎段的耐盐性研究

运用甲基磺酸乙酯（EMS）对甘薯茎段进行处理后,通过组织培养的方法对其进行定向耐盐筛选,探讨EMS处理甘薯茎段的适宜浓度和时间组合,并得到耐盐突变体。实验结果表明：EMS对甘薯茎段的作用受处理时间和处理浓度的影响,0．3％＋1h和0．2％＋（2-3）h约为EMS处理甘薯茎段的半致死剂量。     

EMS诱变马铃薯脱毒试管苗适宜剂量与效应的研究

以克新18马铃薯脱毒试管苗茎段为试验材料,利用甲基磺酸乙酯(EMS)对试管苗及继代苗进行诱变研究。结果表明:随着EMS浓度的增大和处理时间的延长,茎段的白化率和死亡率明显升高,浓度为0.8%的EMS处理2h可使马铃薯茎段半数死亡,是马铃薯EMS诱变的适宜条件。对M1、M2、M3代试管苗的农艺性状进行了差异显著性分析,结果表明,M1、M2、M3代试管苗的茎长、叶片数、根长和根数均明显低于对照,茎长、根长和根数与对照之间的差异有统计学意义,说明EMS对试管苗生长发育的抑制作用可以遗传给后代。     

甘蓝型油菜EMS突变后代材料的分子遗传多样性分析

旨在利用SSR和SRAP标记从分子水平上分析甘蓝型油菜EMS突变后代材料的遗传差异。选取138个‘中双9号’油菜的EMS突变M_3株系(以‘中双9号’为参照),这些材料的叶、花、角果等存在丰富的形态学变异,选用24对扩增条带清晰、多态性高的SRAP引物和20对SSR引物对参试的139个材料进行分析。结果显示,24对SRAP引物共检测到360个位点,其中102个为多态性位点,平均多态性比率为28.33%,平均多态性信息含量PIC为0.60;20对SSR引物共检测到196个位点,其中91个为多态性位点,平均多态性比率为46.43%,PIC为0.59。参试材料之间的遗传相似系数为0.62~0.91,聚类分析和群体结构分析结果显示,参试EMS突变M_3株系没有完全按表型突变聚在一起。研究表明,EMS诱导‘中双9号’产生了分子水平上可检测的突变且诱变后代材料之间存在广泛的遗传差异。     

EMS处理对枇杷试管苗表型及遗传物质的影响

以大五星枇杷幼胚培养获得的单一试管苗无性系茎尖为材料,用EMS进行化学诱变.结果表明:0.1％～0.9％EMS处理0.5～1.5h,试管苗死亡率很低;0.1％EMS处理0.5 h,植株明显高于对照,叶绿素含量也明显高于对照,为4.21 mg/g;经RAPD检测,诱变处理后的材料扩增谱带与对照间存在明显差异.     

马铃薯茎段60 Co-γ射线及EMS诱变技术的研究

以中1、中2、中3马铃薯茎段为材料,用10Gy、20Gy、30Gy、40Gy,50Gy、60Co-γ射线进行辐照,以不经辐照的为对照。结果表明：随着辐照剂量增大,试管苗及继代苗的生长受到很大的抑制,10Gy对试管苗和继代苗的生长都有促进作用,且达到显著水平,高剂量（〉30Gy）严重抑制试管苗和继代苗的生长,20Gy应为马铃薯茎段辐照诱变的最适剂量。EMS处理分别以0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、1.0%浸泡1h、2h、3h和4h,以未处理茎段（CK1）和磷酸缓冲液浸泡（CK2）为对照。结果表明：随着EMS浓度的增大、处理时间的延长,茎段的白化率和死亡率明显提高,浓度为0.7%的EMS处理4h或1.0%的EMS处理2h均可使马铃薯茎段半数死亡,是马铃薯EMS诱变的适宜条件。     

ISSR、RAPD和SRAP分子标记技术在姬松茸菌株鉴定上的应用比较

利用ISSR、RAPD和SRAP3种分子标记法对16株姬松茸菌株进行比较分析。结果表明其中8条RAPD、4条ISSR和2对SRAP引物适合姬松茸菌株鉴定分析,3种标记方法均将16个菌株分为3大类群,A0011+1和A0013为1类,A0009单独为1类,其余菌株为1类。3种分子标记法对姬松茸菌株鉴别的结果存在着一定差别。SRAP反应的遗传信息较丰富,比ISSR、RAPD检测到更大的遗传差异;RAPD引物扩增到的多态性条带数较多。     

离体茎尖诱变筛选油菜耐草酸变异体

试验以油菜茎尖的供试材料，分别以叠氮化钠（SA）、甲基磺酸乙酯（EMS）及叠氢化钠与Co^60γ射线复合诱变处理等方法对其进行诱变处理，比较了三种诱变处理方法对油菜茎尖的诱变效果，确定了SA、EMS处理油菜茎尖适宜衣物变剂量。发现经诱变处理，一部分茎尖分生组织再生植株在形态和生理生化上发生了变异。在高浓度的草酸压力下，筛选出耐草酸变异体。     

甘蓝型油菜胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记

以甘蓝型油菜不育系212A和恢复系1521C组配的含144个单株的F2群体为试验材料,用RAPD和SRAP两种分子标记,结合BSA法,对可育DNA池与不育DNA池筛选,存在差异的引物再用分离群体进行检测。在690条RAPD引物、270对SRAP引物中,获得了与甘蓝型油菜恢复基因Rf连锁的1个RAPD标记OPS11-850和1个SRAP标记M17E13-150,标记与基因Rf之间的遗传距离分别为6.8 c M和10.8 c M。     

双孢蘑菇产、质量性状相关分子标记的初步研究

对206个收集自世界各地的双孢蘑菇栽培菌株的总DNA进行大规模的SRAP、ISSR和RAPD分析,共获得15条SRAP、3条ISSR和2条RAPD特异性标记条带。利用这20个标记条带对206个菌株中的具有代表性的3种不同农艺性状的131个菌株进行统计和分析,获得标记和相关性状的相关性。结果表明:试验共筛选到5个与双孢蘑菇质量性状明显相关的标记SRAP1-5_(1000)、SRAP2-3_(200)、SRAP5-9_(650)、SRAP5-10_(400)、ISSR809_(2100);3个与双孢蘑菇产量性状明显相关的标记SRAP2-3_(400)、SRAP2-4_(1200)、SRAP2-3_(1800)。研究获得的分子标记经下一步的验证,有望作为双孢蘑菇的杂交育种过程中高产、优质菌株筛选预测的特异性分子标记。     

10个加工番茄品种的分子鉴别

采用 RAPD、RGA和 SRAP分子标记技术对 1 0个加工番茄品种进行了分子鉴别的研究。 1 2个RAPD随机引物扩增后共产生了 2 3个多态性位点 ;2对 RGA引物产生了 1 1个多态性位点 ;1对 SRAP引物产生了 7个多态性位点。分析单引物的品种鉴别能力发现 ,RGA和 SRAP标记具有较高的鉴别效率。通过双引物组合分析发现 ,双引物组合 S391和 em1 me1或 PK1 PK2和 em1 me1可用于 1 0个加工番茄品种的分子鉴别 ,并获得了各品种独特的核酸指纹     

主要番茄品种的分子鉴别研究

 采用了RAPD、RGA和SRAP分子标记技术对22个番茄品种进行了分子鉴别的研究。通过引物筛选，选用了7个RAPD随机引物，扩增后共产生了17个多态性位点；2对RGA引物，产生了12个多态性位点；1对SRAP引物，产生了8个多态性位点。分析单引物的品种鉴别能力发现，RGA和SRAP标记具有较高的鉴别效率。为了鉴别22个番茄品种，分析了双引物组合和三引物组合的鉴别能力，双引物组合不能完全区分22个番茄品种，利用引物BI26和PK1+PK2再加上S91或S92中的任一个就可将22个番茄品种区分开来, 并获得各品种独特的核酸指纹。另外，通过聚类分析发现，现代番茄品种之间存在着较为复杂的亲缘关系，用有限的标记位点很难取得理想的聚类结果。     

甲基磺酸乙酯诱变杜梨种子突变的鉴定与分析

为了获得杜梨Pyrus betulifolia突变体, 以杜梨种子为试材, 分别使用不同体积分数甲基磺酸乙酯(EMS)[0(ck), 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%]对层积后的种子进行诱变处理。然后, 统计了种子发芽率, 使用相关序列扩增多态性(SRAP)标记鉴定遗传变异位点, 测量幼苗田间株高和节间长度。试验结果表明:杜梨种子发芽的半致死剂量为0.3% EMS处理。结合SRAP标记鉴定和表型数据分析, 筛选出最适宜的EMS处理体积分数为0.4%, 变异率为37.3%;同时, 使用SPSS软件对表型数据分析显示, 处理组的杜梨苗株高极显著低于对照组(P=0.01)。研究结果为快速获得杜梨突变体提供了理论基础和依据。     

山核桃SRAP体系的建立及与RAPD和ISSR标记的比较

以山核桃Carya cathayensis基因组DNA为模板,对聚合酶链式反应（PCR）体系各组分进行了梯度实验,优化出条带清晰、重复性好的相关序列扩增多态性聚合酶链式反应（SRAP-PCR）扩增体系,并筛选了引物。该体系（25.00 μL）为：1 × 缓冲液0.20 mmol·L^－1,脱氧核糖核苷酸（dNTPs）,0.20 μmol·L^－1 引物,2.00 mmol·L^－1镁离子（Mg²⁺）,33.34 nkat Taq DNA 聚合酶,0.80 mg·L^－1基因组DNA（以上均为终浓度）。反应条件为94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s,35 ℃退火30 s,72 ℃延伸2 min,5个循环;94 ℃变性30 s,50 ℃退火30 s,72 ℃延伸2 min,30个循环;72 ℃延伸8 min,4 ℃保存,反应时间比其他体系缩短了一半。从100对引物中筛选出了适用于山核桃的引物15对。在山核桃中,随机扩增多态性DNA（RAPD）,简单序列重复区间（ISSR）,SRAP等3种标记,以SRAP标记每对引物扩增的位点数及每对引物扩增的多态性位点数为多,但SRAP多态性引物的比例、多态性位点比例居于另2种标记之间。在山核桃研究中可以考虑使用SRAP及RAPD标记。图6表4参28     

利用DH群体进行白菜株高和开展度的QTL定位分析

应用AFLP、SRAP、RAPD、SSR及同工酶等标记构建的326个标记位点的白菜遗传图谱和81个DH株系群体,采用M apQTL 5软件对白菜的株高和开展度进行QTL定位。结果表明：通过2年试验,在10个连锁群上共检测到27个QTL,主要分布在R 5、R 10连锁群上：其中控制株高的有11个,控制开展度的有16个;获得2年稳定表达的控制株高的QTL 1个,控制开展度的QTL 3个;各QTL加性效应各不相等,其遗传贡献率为13.3%-29.2%;控制株高和控制开展度的QTL位点表现为紧密连锁或相似的位置,主要集中在R 5连锁群上。     

菊花品种表型性状与SRAP分子标记的关联分析

【目的】寻找与菊花重要园艺性状相关联的分子标记,为菊花复杂数量性状的研究以及分子标记辅助育种奠定遗传学基础。【方法】利用筛选出的19对SRAP引物组合对58个典型大菊品种进行多位点扫描分析。在对供试材料进行群体结构分析的基础上,利用TASSEL软件,对获得的分子标记与这些品种的18个重要表型性状进行关联分析。【结果】群体遗传结构分析将58个大菊品种划分为5个亚群结构：平瓣类、管瓣类、畸瓣类、桂瓣类和日本品种亚群;通过关联分析,发现有6个标记位点与5个性状关联(P＜0.01),其中与花部性状（花梗粗度、花瓣宽度、筒状小花数量）相关位点共5个,与茎部（茎粗度）相关位点1个,与叶部性状（叶厚度）相关位点1个,各位点对表型变异的解释率在0.0738-0.4791。【结论】利用SRAP标记可有效地对菊花进行群体结构的判断和划分。关联分析能够有效地找到与菊花表型性状关联的SRAP标记,用于分子标记辅助育种。     

V型小麦细胞质雄性不育“三系”及杂交种线粒体DNA的比较研究

以V型小麦细胞质雄性不育系及相应的保持系、恢复系以及其杂种F1为材料,用ISSR、SRAP、RAPD分子标记技术对它们的线粒体DNA进行了比较分析。结果如下:(1)153个SRAP引物组合中139个组合扩增出了多态性,9个组合扩增出不育系特有而保持系、恢复系、F1均缺失的片段,3个组合扩增出不育系特异缺失的片段。(2)92个ISSR引物中45个扩增出了多态性,筛选到了6个不育系特有而保持系、恢复系及杂种F1均缺失的片段。(3)288个RAPD引物中281个扩增出了多态性,4个引物扩增出不育系特有的片段,3个引物扩增出不育系特异缺失的片段。在对线粒体DNA进行分析时,SRAP比ISSR多态性好,比RAPD稳定性好。     

双孢蘑菇栽培菌株遗传多样性的DNA指纹分析

对206个收集自世界各地的双孢蘑菇栽培茵株的总DNA进行大规模的SRAP、ISSR和RAPD分析.共获得15条SRAP、3条ISSR和2条RAPD特异性标记条带.利用这20个标记条带206个茵株进行统计和聚类分析,获得亲缘关系树状图.结果显示在28%的相似值上,206个菌株可以分为高产型和优质型两大类群.其中,优质类群主要包含优质传统菌株(代表菌株8213、8211)和优质杂交菌株(代表茵株为福建省蘑菇菌种研究推广站选育的As2796、As4607)两大类,高产类群也主要包含高产传统茵株(代表菌株01、02)和高产杂交菌株(代表茵株为荷兰选育的U1、U3)两大类.而在100%相似值上,可分为大小72个类群,每群包含菌株数为1-31不等.