细鳞斜颌鲴精子活力观察

为了解细鳞斜颌鲴精子的生理特性,采用实验生态-显微观察方法研究了几种因子对细鳞斜颌鲴精子活力的影响.结果表明,精子能激活的pH范围为5.0～10.58,精子活力较好的pH范围为6.0～7.84;pH 6.9时精子激活率达（89.00±1.0）％、运动时间达25.00±2.65 s、寿命达30.67±2.08 s.精子在1.0～7.0 g/L葡萄糖溶液中均有一定比例被激活,在6.0 g/L葡萄糖浓液中激活率达（89.33±0.94）％、运动时间达25.67±1.25 s、寿命达33.67±0.94 s.精子在2～7 g/L NaCl及KCl溶液中均能激活,在5 g/L NaCl及KC1溶液中活力较好;精子在0.2～0.5 g/L MgCl2及CaCl2溶液中激活率较低,在0.1、0.6、0.7 g/L MgCl2及CaCl2溶液中出现凝集现象.精子在低温4℃下保存3h活力与鲜精基本相同.D-19和Saad稀释液能有效抑制精子运动,且重新被淡水激活后活力较好,可考虑作为精子冷冻保存用稀释液.     

渗透压、pH和温度对泥鳅精子活力及受精率的影响

采集成熟的泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)精子，在不同的渗透压、pH和温度条件下进行活力观察。结果表明：①保持泥鳅精子活力较强的适宜渗透压和pH分别是(100～200)mOsm(1mOsm≈0．248kPa)和pH7．0～8．0，而活力最强时的渗透压和pH则分别为150mOsm和7．6；②在(20～30)℃范围内泥鳅精子激活率均较高，且当温度为25℃时，其激活率最高；③泥鳅受精率最高时的最适渗透压和pH分别为150mOsm和7．6，这与泥鳅精子活力最强时的渗透压和pH条件保持高度一致。     

日本知床半岛海域细鳞大马哈鱼和大马哈鱼的移动生态调查

在北海道知床半岛周边海域,用小型数据记录器监测细鳞大马哈鱼Oncorhyncus gorbuscha和大马哈鱼O.keta的回归游泳行为,探讨其与环境水温的关系。数据记录间隔时间为1 s,连续记录时间为226 h。于2008年8月至10月期间,在知床沿岸放流了带有数据记录器的洄游途中的大马哈鱼和细鳞大马哈鱼个体(分别为30尾和5尾),分别有13尾、3尾个体被捕获。研究表明:试验个体有一系列的上浮和下沉行为,并且频繁地回到表层水面,垂直移动中的深潜水是对表层高水温和暖流分层水中的一种适温调节行为。因此,尽管表层水温较高,性成熟后的大马哈鱼仍会回到表层水面寻找其产卵场所。     

日本知床半岛海域细鳞大马哈鱼和大马哈鱼的移动生态调查

在北海道知床半岛周边海域,用小型数据记录器监测细鳞大马哈鱼Oncorhyncus gorbuscha和大马哈鱼O.keta的回归游泳行为,探讨其与环境水温的关系。数据记录间隔时间为1 s,连续记录时间为226 h。于2008年8月至10月期间,在知床沿岸放流了带有数据记录器的洄游途中的大马哈鱼和细鳞大马哈鱼个体(分别为30尾和5尾),分别有13尾、3尾个体被捕获。研究表明:试验个体有一系列的上浮和下沉行为,并且频繁地回到表层水面,垂直移动中的深潜水是对表层高水温和暖流分层水中的一种适温调节行为。因此,尽管表层水温较高,性成熟后的大马哈鱼仍会回到表层水面寻找其产卵场所。     

不同pH人工精浆对性逆转金鳟雄鱼精子活力的影响

研究了性逆转金鳟雄鱼（XX,伪雄鱼）精子在不同pH的人工精浆（ artificial seminal plasma,ASP）溶液中的活动情况。结果显示,随着pH的提高精子活力不断增强。伪雄鱼精子在不同ASP—pHs中培养1h后,pH9．5～10．5培养组精子活力超过正常雄鱼精子（XY）活力水平,且正常雄鱼精子与pH8．5～9．5培养组的精子活力不存在显著性差异（P〉0．05）。将金鳟伪雄鱼精液培育在pH8．5～10．5的ASP中,0～180min内,pH10．5中的精子寿命和激活比例都最佳,180min之后的精子寿命超过80s,激活比例在90％以上,显著好于其他pH组（P〈0．05）。在低温储藏12h后,正常雄鱼精子在ASP—pH10．5溶液中寿命时间最长,为（284．05±78．37）S,其次是同等稀释条件下的伪雄鱼精子寿命,其时间为（203．89±43．68）s,正常雄鱼精液原浆精子寿命最短,为（122．19±37．61）s。直接用金鳟伪雄鱼精液受精,发眼率和仔鱼上浮率仅为12．50％和8．77％,而通过pH10．5的ASP培养后,其发眼率和孵化率分别提高到了52％和49．95％。因此,在高pH的ASP中培养金鳟伪雄鱼精子能提高其活力和延长寿命。通过这种处理也能够显著的提高金鳟全雌和全雌三倍不育后代的育苗生产效率。     

不同pH人工精浆对性逆转金鳟雄鱼精子活力的影响

研究了性逆转金鳟雄鱼（XX,伪雄鱼）精子在不同pH的人工精浆（ artificial seminal plasma,ASP）溶液中的活动情况。结果显示,随着pH的提高精子活力不断增强。伪雄鱼精子在不同ASP—pHs中培养1h后,pH9．5～10．5培养组精子活力超过正常雄鱼精子（XY）活力水平,且正常雄鱼精子与pH8．5～9．5培养组的精子活力不存在显著性差异（P〉0．05）。将金鳟伪雄鱼精液培育在pH8．5～10．5的ASP中,0～180min内,pH10．5中的精子寿命和激活比例都最佳,180min之后的精子寿命超过80s,激活比例在90％以上,显著好于其他pH组（P〈0．05）。在低温储藏12h后,正常雄鱼精子在ASP—pH10．5溶液中寿命时间最长,为（284．05±78．37）S,其次是同等稀释条件下的伪雄鱼精子寿命,其时间为（203．89±43．68）s,正常雄鱼精液原浆精子寿命最短,为（122．19±37．61）s。直接用金鳟伪雄鱼精液受精,发眼率和仔鱼上浮率仅为12．50％和8．77％,而通过pH10．5的ASP培养后,其发眼率和孵化率分别提高到了52％和49．95％。因此,在高pH的ASP中培养金鳟伪雄鱼精子能提高其活力和延长寿命。通过这种处理也能够显著的提高金鳟全雌和全雌三倍不育后代的育苗生产效率。     

青蛤精子结构及环境因子对精子活力的影响

用显微及亚显微技术研究了青蛤精子的形态结构;通过设定盐度、pH及温度梯度条件,研究了其对青蛤精子活力的影响。精子头部呈稍弯曲的辣椒形,由圆锥状顶体与柱状细胞核构成。顶体长约0．8μm、内部物质分布均匀,顶体下腔内颗粒状物质均布;核长约2．3μm、核宽约0．7μm～0．9μm,核质电子密度高而均匀,具核后窝。尾部包括中段和末段,中段由5个线粒体围绕近、远端中心粒构成;末段细长鞭状,由轴丝及包绕轴丝的质膜组成,轴丝为“9＋2”结构。青蛤精子与同属帘蛤科的菲律宾蛤仔、波纹巴非蛤及沟纹巴非蛤精子在顶体的形态与尺寸、核形态与大小、中段线粒体数目上存在差异。青蛤精子激活与运动的最适盐度为20～25,最适pH为8．0～9．0,最适温度为25℃～30℃。青蛤精子对盐度及pH的适应性较强,反映了该物种对潮间带栖息环境变化的适应性。     

青蛤精子结构及环境因子对精子活力的影响

用显微及亚显微技术研究了青蛤精子的形态结构;通过设定盐度、pH及温度梯度条件,研究了其对青蛤精子活力的影响。精子头部呈稍弯曲的辣椒形,由圆锥状顶体与柱状细胞核构成。顶体长约0．8μm、内部物质分布均匀,顶体下腔内颗粒状物质均布;核长约2．3μm、核宽约0．7μm～0．9μm,核质电子密度高而均匀,具核后窝。尾部包括中段和末段,中段由5个线粒体围绕近、远端中心粒构成;末段细长鞭状,由轴丝及包绕轴丝的质膜组成,轴丝为“9＋2”结构。青蛤精子与同属帘蛤科的菲律宾蛤仔、波纹巴非蛤及沟纹巴非蛤精子在顶体的形态与尺寸、核形态与大小、中段线粒体数目上存在差异。青蛤精子激活与运动的最适盐度为20～25,最适pH为8．0～9．0,最适温度为25℃～30℃。青蛤精子对盐度及pH的适应性较强,反映了该物种对潮间带栖息环境变化的适应性。     

授精激活介质对大眼鳜精子活力的影响

以不同pH溶液、不同浓度的葡萄糖和Na+、K+、Ca2+、Mg2+4种不同浓度金属离子及河水、曝气自来水、去离子水、蒸馏水4种水体作为授精激活介质,探讨大眼鳜(Siniperca kneri)精子在不同激活液中的活力变化。结果表明,pH为8.0时精子活力最强。大眼鳜精子的活力受葡萄糖、Na+、K+、Mg2+、Ca2+浓度的影响,葡萄糖浓度为1.5 g/L时精子活力最强,Na+、K+、Mg2+和Ca2+溶液浓度分别为75、0.9、15和10 mmol/L时精子活力最强。4种水体中精子活力由强到弱的顺序依次为蒸馏水、去离子水、曝气自来水和河水。     

大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法的优化

【目的】优化大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法。【方法】以解冻后的精子活力为参数,调控试验条件,筛选最佳精液稀释液和最佳抗冻剂,优化抗冻剂体积分数和精液稀释比例。【结果】5种稀释液中,稀释液Ⅳ效果最好,冻精活力为35.5(±2.7)%;甘油(GLY)、甲醇(METH)、二甲基亚砜(DMSO)等3种抗冻剂中,5%(V/V)DMSO处理的冻精活力为40.7(±2.5)%,显著高于5%GLY和METH处理的冻精活力;优化DMSO的体积分数发现,10%终浓度的DMSO对精液保护效果较好,冻精活力为54.6(±1.5)%;优化稀释液Ⅳ与精液稀释比例发现,稀释液Ⅳ与精液以3∶1体积比稀释时能达到良好效果,冻精活力可达65.4(±2.3)%。【结论】精液稀释液Ⅳ与精液体积比为3∶1,终浓度10% DMSO为抗冻剂,对大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存的效果最佳。     

培养液pH值对小鼠精子体外培养过程中活力及蛋白修饰的影响

为了探究不同pH对小鼠成熟精子体外培养过程中活力参数及蛋白修饰的影响,研究采用不同pH值(6.6~7.8)培养液培养小鼠精子2h,利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)、蛋白免疫印迹(WB)及免疫荧光技术,分析测定小鼠精子活力参数、蛋白修饰的变化情况,并对小鼠精子磷酸化蛋白及乙酰化蛋白进行细胞亚组分定位。结果显示,pH为7.2~7.4时精子能动性(sperm motility,MOT)、平均路径速度(path velocity,VAP)、平均直线运动速度(straight line velocity,VSL)和平均曲线运动速度(curvilinear veiocity,VCL)都有较高值,pH为6.6或7.8时精子活力受到显著抑制(P0.05);培养液的pH为7.4处理组,小鼠精子蛋白磷酸化、乙酰化和琥珀酰化修饰均达到较高水平,无论pH降低(7.2)还是升高(7.4)这些蛋白修饰水平都减弱,与精子活力参数变化趋势一致;免疫荧光定位结果显示,获能组磷酸化蛋白及乙酰化蛋白荧光强度明显高于未获能组,磷酸化蛋白及乙酰化蛋白遍布精子整个鞭毛区域,其中头部核区蛋白乙酰化修饰水平较高。上述研究表明pH值7.2~7.4为小鼠精子体外培养的最适pH值范围,pH值可能通过影响精子体外培养过程中的蛋白磷酸化、乙酰化及琥珀酰化作用调节精子活力及功能。本研究对探究pH值调控哺乳动物成熟精子活力的分子机理及体外培养具有重要意义。     

曙红与鲑鱼精蛋白显色反应的研究

[目的]对曙红与鲑鱼精蛋白显色的反应进行研究。[方法]采用分光光度法,研究曙红(醇溶)与鲑鱼精蛋白在聚乙烯醇(PVA)存在时的结合反应,并且研究了显色反应的条件和影响灵敏度的因素,确定了最佳反应条件。[结果]以试剂空白为参比,曙红-硫酸鱼精蛋白复合物的最大吸收波长为542 nm,最大吸收波长处的吸光度与蛋白质的浓度呈良好的线性关系,可用于蛋白质的定量测定。[结论]该方法灵敏度高、线性关系好、试剂稳定、毒性小,且曙红、硫酸鱼精蛋白复合物不易黏附在容器壁上,操作简便、快速、结果准确。     

CdCl2对泥鳅精子运动的影响

以泥鳅(Misgurnus anguillkcaudatus)的精子为实验材料,在预实验的基础上,用浓度分别为0、50、100、200、400和800 μmol/L的CdCl2精子保存液孵育(4℃)泥鳅精子0、2、4、6和8h后,在显微镜下分别用含有相应浓度CdCl2的激活液激活(25℃),立即观察泥鳅精子的激活率、运动率、运动时间和运动速度.实验显示,CdCl2影响泥鳅精子的运动能力,呈现出明显的浓度和时间依赖性,CdCl2对泥鳅的受精可能具有抑制作用.     

重金属铬对体外培养猪精子活力及蛋白磷酸化水平的影响

为探究铬元素在猪精子体外获能培养过程中,对猪精子活力、蛋白磷酸化信号通路的影响,研究采取八头杜洛克猪新鲜精液,分别在体外获能培养液中添加不同浓度的6价铬离子(0、0.1、0.5、1、2、10、100μmol/mL)以及双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)、异丁基黄嘌呤(IBMX)、PKA抑制剂(H-89)等cAMP-PKAs信号通路调节因子进行调控培养2h。利用精子活力计算机检测(CASA)、蛋白质免疫印迹(WB)技术,分析测定猪精子体外铬暴露获能培养过程中精子活力、蛋白磷酸化水平,并用相应试剂盒检测细胞中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性、腺苷-3′,5′-环化一磷酸(cAMP)及ATP水平。结果表明:铬离子对猪精子活力、蛋白磷酸化水平有抑制作用,且随铬离子浓度增加抑制作用增强。当铬浓度达到2μmol/mL时精子活力MOT(58.4%)显著低于获能培养组(73.6%)(P0.05);10μmol/mL铬处理明显抑制蛋白磷酸化水平,且细胞内GAPDH活性、cAMP及ATP水平显著降低(P0.05)。而10μmol/mL铬处理中分别添加葡萄糖(5.0μmol/mL)及dbcAMP(1.0 mmol/L)和IBMX(0.1 mmol/L),能缓解铬对蛋白酪氨酸磷酸化(PTP)、蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化(P-PKAs)及GAPDH活性的抑制作用。结果提示铬可能是通过干扰糖代谢及cAMP/PKA信号通路影响猪精子活力及蛋白磷酸化水平。本研究首次探究了体外培养过程中铬离子对家畜精子活力的影响,并初步探究了其作用机理,为进一步研究铬离子引起繁殖毒性的分子机制及家畜繁育提供一定的理论基础。     

氯化钠浓度对美洲鲥鱼精子活力的影响

观察了不同氯化钠浓度对美洲鲥鱼精子活力的影响,结果表明:氯化钠浓度为0~0.8%时,精子快速运动时间无显著差异。氯化钠浓度为0.9%(生理盐水)时,精子运动时间和寿命最长。氯化钠浓度为1.0%时,精子活力受到抑制,运动能力和寿命下降。氯化钠浓度为1.4%~4.2%时,精子呈不活动状态,并失去运动能力。     

氯化钠溶液对兴国红鲤精子活力的影响

观察了兴国红鲤(Cyprinus carpio re d variety)精子在0～50.0 g/L的氯化钠溶液中的活动.在5.0 g/L的氯化钠溶液中,精子的快速运动时间和寿命最长;在10.0～50.0 g/L的氯化钠溶液中,精子完全不活动,当滴加不同量的蒸馏水,精子仍能被激活.     

钙离子对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力影响

研究主要探究钙离子(Ca2+)对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力的作用。利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)检测、蛋白免疫印迹测定不同Ca2+浓度对精子活力指标及蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,并对精子样品的酪氨酸磷酸化蛋白的分布情况进行观察。结果显示,当Ca2+浓度≤1.0mmol/L时,精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平增高;然而,当Ca2+浓度≥3.0mmol/L时,则明显抑制精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平,尤其分子量约为27和34kDa的高丰度蛋白磷酸化程度明显降低(P0.05)。高浓度Ca2+(4.0mmol/L)明显抑制鞭毛处蛋白酪氨酸磷酸化。因此,细胞外钙离子对猪精子活力和蛋白磷酸化起到重要调节作用,低浓度Ca2+促进精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化,高浓度Ca2+(≥3.0mmol/L)抑制精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化。本研究初步明确了Ca2+浓度对猪精子蛋白磷酸化及精子活力的影响,为进一步研究精子获能提供参考。