土壤中产碱性蛋白酶菌株的筛选及产酶条件的研究

[目的]从土壤中筛选产碱性蛋白酶菌株,并优化产酶条件。[方法]采用平板分离方法从土壤样品中分离出8株产碱性蛋白酶菌株,采用滤纸片法和Folin-酚法测定8个菌株的产酶能力。将具有较强产酶能力的菌株作为目的菌株,研究该菌株产酶能力的影响因素,并采用正交试验法优化产酶条件。[结果]经过初筛和复筛,从土壤中得到一个碱性蛋白酶高产菌株（5号）,作为目的菌株,其产酶能力为6.00 U/ml,为地衣芽孢杆菌的134.1%,该菌株为革兰氏阳性芽孢梭菌。正交试验表明,在pH为11的初始发酵培养基中添加0.3%蔗糖和0.8%蛋白胨,并以105个/ml的接种量接种,目的菌株可得到较好的产酶效果,且蛋白胨对该菌株产酶能力具有显著影响。[结论]该研究为产碱性蛋白酶菌株的筛选提供了理论参考。     

耐高温酒精酵母菌驯化与筛选

选取发酵良好的高温玉米醪酒精发酵液,通过富集培养、高温驯化与筛选,得到两株优良菌株,在35 ℃高温下酒精发酵性能优于拉斯2号酵母菌和耐高温酒精活性干酵母菌.     

高温分解纤维素的易变糖丝菌菌株筛选及其特性

从陈年堆积的畜粪堆中筛选出一个耐高温能高效分解纤维素等有机物的菌株。经鉴定，该菌株属于糖丝菌属易变糖丝菌种中具有分解纤维素能力的菌株，至少可耐80℃高温，在40～50℃下能够有效地分解纤维素，在20－30℃下分解纤维素能力较低。     

耐镉菌株的筛选及生物学特性

从污染土壤中,分离出1株能高度抗镉和吸附镉的菌株S-1,经初步鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。对其生物学特性进行研究,结果表明,该菌株在液体细菌培养基中耐镉(Cd)浓度高达600 mg/L;菌株S-1对Cd2+有较好的吸附效果,吸附率高达75.4%。     

地衣芽孢杆菌WB-11菌株耐高温α-淀粉酶的酶学特性

从地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis )中分离到一α 淀粉酶组分 ,经PAGE及SDS PAGE检测为电泳均一的纯酶蛋白。该酶最适反应温度为 95℃ ,5 0和 70℃条件下酶活性稳定 ,90℃保温 30min残余酶活力为 2 8 9%。该酶最适作用pH为 6 0～ 6 5 ,在pH 5 0～ 8 0内稳定。酶的相对分子质量为 6 5 90 0 ,等电点 6 94 ,对可溶性淀粉的Km 值为 0 4 1mg·mL-1 。Ca2 + 、Mn2 + 、Cu2 + 、Co2 + 及Ba2 + 对酶具有激活作用 ,其中Ca2 + 激活作用最显著 ,且以 4～ 8mmol·L-1 浓度为最适。Ca2 + 还能显著提高酶的热稳定性 ,4mmol·L-1 Ca2 + ,90℃保温 30min ,酶的残余活力提高至 83%。     

酒糟中纤维素酶产生菌的筛选及酶学特性研究

以CMC-Na为唯一碳源,采用平板分离法从河套酒业酒糟中分离筛选出1株产低温酸性纤维素酶菌株C-11,16S rDNA基因序列与枯草芽孢杆菌的同源性较高。菌株C-11所产纤维素酶的最适反应温度为30℃,在35℃保持97%的活性,30℃保温24 h可保持91%的酶活力,保温60 h保持67%的活性,热稳定性好;该酶在pH 5.0时酶活最高,在pH 4.0和pH 5.0下保存60 h可保持38%和40%的活性。菌株C-11所产纤维素酶为低温酸性纤维素酶,可以耐受酒糟环境,降低酒糟纤维素含量。     

剩余污泥碱性发酵产蛋白酶菌株的筛选与鉴定

为了能够缩短剩余污泥碱性发酵周期,从碱性发酵剩余污泥中筛选产蛋白酶活力较高的耐碱细菌,利用形态学、生理生化、分子生物学特征对筛选到的菌株进行鉴定。结果表明,从碱性厌氧发酵剩余污泥中最终筛选获得2株产蛋白酶活力较高的耐碱细菌HIT-01菌株和HIT-02菌株,经鉴定分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和芽孢杆菌属细菌(Bacillus sp.)。为进一步利用筛选获得的优势菌株构建生物菌剂、从而快速启动污泥碱性发酵开拓了新思路。     

蛋白酶高产菌株的筛选鉴定与酶学特性研究

以酪蛋白水解圈为筛选标记,在以酪蛋白为唯一氮源的平板上,从土壤中分离筛选到3株高产蛋白酶的菌株,经形态学鉴定和16S rRNA分析,将其分别鉴定为Bacillus sp.G1、Bacillus sp.G2、Stenotrophomonas sp.V1。将这3株菌株的发酵液通过硫酸铵分级沉淀初步纯化后,其比酶活分别为22.21、19.10和16.03 U/mg。菌株Bacillus sp.G1和Bacillus sp.G2所产蛋白酶的最适反应温度和最适反应pH值均为40℃和7.0;菌株Stenotrophomonas sp.V1所产蛋白酶的最适反应温度为70℃,最适酶反应pH值为7.5。     

蛋白酶高产菌株的筛选鉴定与酶学特性研究

以酪蛋白水解圈为筛选标记,在以酪蛋白为唯一氮源的平板上,从土壤中分离筛选到3株高产蛋白酶的菌株,经形态学鉴定和16S rRNA分析,将其分别鉴定为Bacillus sp.G1、Bacillus sp.G2、Stenotrophomonas sp.V1。将这3株菌株的发酵液通过硫酸铵分级沉淀初步纯化后,其比酶活分别为22.21、19.10和16.03 U/mg。菌株Bacillus sp.G1和Bacillus sp.G2所产蛋白酶的最适反应温度和最适反应pH值均为40℃和7.0;菌株Stenotrophomonas sp.V1所产蛋白酶的最适反应温度为70℃,最适酶反应pH值为7.5。     

黑曲霉酸性蛋白酶酶学性质的研究

对黑曲霉菌株ANS1产酸性蛋白酶基本酶学性质的研究表明:酸性蛋白酶适宜pH在2.5～4.0之间,在pH为3.5时,相对酶活最高;适宜温度在40～50℃之间,在45℃时,相对酶活最高;酸性蛋白酶有着较好的热稳定性,曲酶粉在80℃保温至5min保留有51.4%的酶活,液态酶在80℃恒温水浴中保温1min保留有54.6%的酶活力,曲酶粉较液态酶有着更好的抗热性;金属离子对酸性蛋白酶活力有一定的影响,在2.0mmol·L-1的浓度下,Mn2 和Cu2 酸性蛋白酶有较强的激活作用,Fe3 对该酶表现出明显的抑制作用。研究结果表明,黑曲霉菌株ANS1产酸性蛋白酶可以作为生物饲料添加剂。     

产中性蛋白酶菌株的筛选及其发酵条件的优化

从土壤样品中分离筛选出产一株中性蛋白酶产生菌ZH-6.经单因子试验、正交试验表明,该菌株摇瓶发酵产酶的最佳发酵周期48 h,发酵温度33℃,摇床转速为180 rpm.最佳发酵培养基为玉米淀粉2.0%,麸皮3.0%,Na2HPO4·12H2O 0.4%,KH2PO4 0.03%,ZnCl2 0.1%.起始pH 6.5的条件下,其酶活力为1428.3 U/ml.     

β-D-呋喃果糖苷酶高产菌株的筛选及培养特性研究

研究从米曲霉(Aspergillus oryzue 100.Aspergillus oryzar200)和一株假丝酵母(Candida gnilliermondil)中筛选出高产β-D-呋喃果糖苷酶的菌株Aspergillus aryzar 100．并确定了Aspergillus oryzar 100最佳培养条件为30℃，84～90h,最佳培养基组成为麦麸大豆乳清(2％～3％固形物)(1：8)和3％蔗糖。     

耐高温纤维素酶产生菌的筛选鉴定及酶谱分析

采用稀释平板-刚果红染色法从腐木中分离到1株产耐高温纤维素酶的菌株CY15-10.通过形态观察、特征培养及16 S rDNA序列分析,鉴定该菌株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa).该菌株经摇瓶发酵后测定粗酶液CMC酶活为1.27 U/mL,最适反应温度为55℃,热稳定性较好.经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及酶谱分析表明该菌株向胞外分泌1种纤维素酶组分,酶分子质量约为35 ku.     

产纤溶酶菌株的分离筛选

以脱脂奶粉作为初筛底物,纤维蛋白作为复筛底物,透明圈作为筛选标记,从肉联厂,污水沟等地筛选出产纤溶酶的菌株40株,从中筛选出产酶活力最高的2号菌株,将其编号为ZLW-2,并采用改进的紫外分光光度法测酶活,提高了酶活测定的精确性,对提高纤溶酶产生菌的筛选效率有重要意义。菌株ZLW-2的发酵过程研究表明,纤溶酶是在菌体大量生长以后酶活力才开始增加。     

产酸性蛋白酶深红沙雷氏菌的筛选及其在种子萌发中的应用

酸性蛋白酶在工业生产中需求量巨大,但我国产酸性蛋白酶菌株的品种较为单一,因此,亟需开发新型的微生物源蛋白酶和选育高产蛋白酶菌种。从海口红树林土壤中筛选出一株可以在酸性环境下产蛋白酶的菌株,采用福林酚法测定蛋白酶活,经过形态学观察、生理生化实验及16S rRNA序列比对鉴定为深红沙雷氏菌。利用该菌株发酵鱼下脚料制备生物液肥,通过种子萌发实验,研究发酵液的促生效果。结果显示,分离出的产酸性蛋白酶菌株R3可以用于鱼下脚料的发酵,在发酵液稀释5~25倍时,处理60 h均可以促进菜心种子的萌发,与市场购买的液肥效果相同。利用分离出的产酸性蛋白酶菌株发酵鱼下脚料制备生物液肥,实现了对废弃鱼蛋白资源的重新利用,增加了鱼类产品的附加值。     

高产蛋白酶菌株的分离、筛选及鉴定

为了降解豆粕中的大分子蛋白为大豆肽,利用酪蛋白平板法作为筛选模型,从土壤中分离和筛选高产 蛋白酶的菌株,选取水解圈直径与菌落直径比值较大的菌株液体发酵后进行蛋白酶活力和大豆肽转化率的测定,结 果得到1 株蛋白酶活力和大豆肽转化率较高的菌株B1,其酶活力达到111.8 U/mL,大豆肽转化率达到37.2%。对该 菌株进行形态观察和生理生化特征分析,初步将其鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.）。     

饲用酶添加剂预混料中酸性蛋白酶活力测定方法研究

本文就《工业酶制剂通用试验方法》测定饲用酶添加剂预混料中酸性蛋白酶的活力进行了探讨,并就试验方法的适用性以及影响酶活力测定的因素进行了试验论证。结果表明:《工业酶制剂通用试验方法》回收率低,不适合于饲用酶添加剂预混料中酸性蛋白酶活力的测定;其他酶的存在不会影响酸性蛋白酶的活力测定;载体对酸性蛋白酶有较强的吸附力,结果导致《工业酶制剂通用试验方法》回收率偏低;《工业酶制剂通用试验方法》改进方法避免了载体吸附造成的回收率低的因素,回收率由原方法的70%左右提高到了93%以上。