黄曲霉毒素B1残留ELISA试剂盒的研制及应用

本研究采用间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)检测黄曲霉毒素B₁(aflatoxins B₁,AFB₁)残留量。将AFB₁与蛋白质载体牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备了AFB₁-BSA和AFB₁-OVA偶联物,以AFB₁-BSA作为免疫原制备特异性抗体,并成功建立了AFB₁残留间接竞争ELISA检测方法及检测试剂盒。试剂盒IC₅₀为128.8 ng/L,检测线性范围为50~1800 ng/L,检测限不超过100 ng/kg;食用油、花生和谷物的平均添加回收率大于71.3%,批内、批间变异系数均小于14.2%。因此,本试剂盒具有操作简便、检测快速、灵敏度高等特点,将在植物性食品中AFB₁的残留检测中发挥重要作用。     

ELISA在检测饲料黄曲霉毒素总量中的应用

实验研究了酶联免疫吸附法(ELISA)测定饲料中黄曲霉毒素总量的方法。采用70%甲醇萃取饲料中黄曲霉毒素,应用固相直接竞争酶联免疫吸附原理,建立标准反应曲线Y=-21.1X+120.11,R2=0.998。该方法简单、快捷、准确,回收率在97.71%￣102.74%之间。     

抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的制备及定量ELISA方法的建立

采用黄曲霉毒素M1与牛血清白蛋白偶联物免疫8周龄BALB/c小鼠,4次免疫后,使小鼠产生免疫应答.取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合、筛选,最终获得1株能稳定分泌抗黄曲霉毒素M1的杂交瘤细胞株系.其染色体平均计数为90±10对,间接ELISA检测该株系培养上清的效价为1:6 400,纯化腹水效价为5 000×27.与黄曲霉毒素M1及其结构类似物黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的反应率分别为100%、7%、0%.经传30代后.抗体效价稳定.并在此基础上建立了间接竞争ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度是0.08 ng/mL,校正曲线的线性范围为0.08 ng/mL～ 5 ng/mL.该方法的加标回收率为80.0%～128.3%.     

ELISA法检测黄曲霉毒素的关键控制点

目前黄曲霉毒素检测的主要方法有：薄层法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、免疫亲和柱荧光光度法、酶联免疫吸附法（ELISA）、快速荧光法。酶联免疫吸附分析法（ELISA）是测定饲料中黄曲霉毒素含量的常用方法,所涉及的仪器及试剂比较少,操作比较简单,被很多企事业单位所采用。但在应用ELISA法检测黄曲霉毒素时如果不注重操作细节问题,就可能出现假阳性,从而难以很好地监控饲料品质。     

去氢甲睾酮ELISA试剂盒的研制

以实验室自主研发的一株能稳定分泌去氢甲睾酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株为基础,应用ELISA原理研制去氢甲睾酮残留快速检测试剂盒,并对试剂盒特性进行测定。结果表明,该试剂盒标准曲线的回归方程为y=-0.205 5x+0.516(R2=0.993 1),线性检测范围为0.1ng/mL～100ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为3.20ng/mL,对猪肉加标样品的检测回收率在87.41%±5.44%～110.70%±2.05%之间,试剂盒检测与去氢甲睾酮结构类似物丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1%;试剂盒在4℃能稳定保存6个月。说明试剂盒能够应用于食品中残留去氢甲睾酮的快速检测。     

江苏省泰州市部分市售鸡蛋黄曲霉毒素B1污染状况调查

为了解江苏省泰州市市售鸡蛋中黄曲霉毒素B1（AFB1）的污染情况,2020年采集不同超市、集贸市场的60个种类/批次的鸡蛋各30枚,每个种类/批次随机选取3枚,共180枚,采用商品化酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒进行AFB1残留量测定。结果显示：在抽检的180枚鸡蛋样品中,15枚样品中有一定的AFB1残留,为0.20~0.64 μg/kg,占8.33%,均为超市中不同场家产品,而集贸市场的鸡蛋（多为散养鸡所产）中AFB1残留量都很低。因此,规模化养殖场在蛋鸡饲养过程中要严格把控饲料质量,定期对饲料做好检测和监测。     

酶联免疫法(ELISA)检测饲料中黄曲霉毒素B1

本文介绍了利用ELISA法的黄曲霉毒素B1(AFB1)试剂盒测定饲料中黄曲霉毒素B1的含量。样品经处理后,用甲醇水溶液提取饲料中黄曲霉毒素,提取液经过过滤、稀释后,用酶联免疫法直接测定。加标回收测定,平均加标回收率89%～93%,用酶联免疫法进行定性、定量测定,其特异性强,分析速度快,污染小,简化提取和纯化步骤,结果易判读。     

禽流感间接ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感音接ELISA快速诊断技术试剂盒化，确定其外包装、规格、盒内组成，对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性，可重复性、符合率、与国外同类产品比较，保存期等进行了全面、详细的研究。试剂盒由9种成套试剂组成，在－15℃至－20℃保存540天各项性能仍然很好。该试剂盒与离流感间接ELISA诊断试剂盒对同样血清样品检测，符合率为100％。拥有剂盒，只票面 准备生理盐水，即可对大量血清样品同时进行检测，操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、稳定、快速、更适合于禽流感免疫技术的监测及现地疫病诊断等需要。先后制备诊断试剂盒16个批次，已成功应用于我国省、市兽医站、兽医研究所、农业院校、农科院，农业公司、口岸检疫部门及鸡等各领域对禽流感的定性诊断、流行病学调查、免疫抗体监测等。     

雌二醇残留ELISA检测试剂盒的研制

采用包被单克隆抗体直接竞争ELISA法研制一种检测食品中雌二醇残留的ELISA试剂盒。将不同浓度的雌二醇添加到鸡肉样品中,用制备的试剂盒检测雌二醇残留,结果样品的加标回收率在73.1%～102.7%之间,变异系数<20%。对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定,结果表明:研制的试剂盒最低检出限为0.5μg/L;在4℃条件下试剂盒有效期可达6个月。用ELISA试剂盒检测雌二醇残留可批量分析样品,具有快速、简便、灵敏、经济的特点,可广泛应用于食品中雌二醇的监测。     

鸡传染性鼻炎ＰＣＲ和阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒的研制与应用

用鸡传染性鼻炎ＰＣＲ试剂盒可直接检测病料中的病的ＤＮＡ、可测出１pg的DNA和１０^2-10^3个细菌，这可疑病料的检出率是传统的细菌分离方法的２－３倍，可重复性好，特异性为１００％，在４℃可保存１２个月，在－２０℃可保存１５个月。阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒可检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗体，其种特异性为１００％，重复性好，试剂盒在３７℃可保存７d以上，４℃可保存１０个月，－２０℃可保存１年以上，用两个诊断试剂盒检验１５５份可疑病料、２１９１份血清，ＰＣＲ的阳性率为３２．３％；Ａ型抗体阳率为２７．４％，Ｃ型抗体阳性率为１１．５％。     

寄生曲霉的花生粕固体培养及其AFB1的ELISA定量检测

饲料原料及配合饲料中的霉菌毒素污染甚为严重,极易通过食物链最终影响人类健康。在各种常见霉菌毒素中,黄曲霉毒素危害最大,尤其是AFB1具有强致畸、致突变作用犤1犦。还有研究者发现,AFB1是一种强致癌物,与肝癌的发生率有很大关系。长期食用被AFB1污染食品的人群,其肝癌发生率较正常人群明显升高犤2-5犦。因此,全球范围内都在通过立法机构来限制食品与动物饲料中黄曲霉毒素的含量,尤其是AFB1。为此,特进行此次花生粕霉菌发酵试验,同时采用ELISA试剂盒测定花生粕培养基中AFB1的含量犤7犦,为该领域的深入研究提供参考。1材料与方法1.…     

口蹄疫O型固相竞争ELISA抗体检测试剂盒的临床应用

用口蹄疫O型固相竞争ELISA检测血清1 150份,口蹄疫O型免疫血清820份,敏感性为91.83%;试剂盒特异性评价检测血清180份,其特异性为89.4%;固相竞争ELISA和液相阻断ELISA共同检测血清100份,其相关性分析为0.964 1,R2为0.929 5,属于高度相关。3批试剂盒检测血清样品50份,检测结果差异不显著,口蹄疫O型固相竞争ELISA抗体检测试剂盒检测结果比较稳定,具有良好的批间可重复性和稳定性。     

酶联免疫吸附技术在安全检测中的应用

酶联免疫吸附技术(Enzyme Linked Imm—unosorbent Assay,ELISA)简称酶标法,是由瑞典和荷兰的生物科学家提出并建立的,它是利用抗原一抗体的免疫学反应和酶的高效催化底物反应特点的检测技术,测定灵敏度可高达纳克(10-9g),甚至皮克(10-12g)水平。经过30多年的探索和完善,已成为一种普遍应用的分析方法。     

ELISA与HPLC-MS检测玉米中黄曲霉毒素B_1的比较分析

本实验选用30份玉米样品,通过酶联免疫吸附(ELISA)法和高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)法对玉米中黄曲霉毒素B1含量(AFB1)进行测定比较,得出两种方法的差异性和相关性。其中,使用HPLC-MS外标法定量时,设计两组标准曲线,分别是玉米基质液加标组曲线和纯标组曲线,得到的结果再与ELISA比较。结果显示:用ELISA筛选出的阳性样品,用HPLC-MS法确证亦为阳性,判定结果一致,但具体检出量存在差异。当样品中AFB1含量为2～6μg/kg时,测定结果 HPLC-MS(纯标组)相似文献   

A rapid and simple approach for radioimmunochemical determination of aflatoxin B1 in cereals and feed using a commercial analysis kit

In order to facilitate a practical large-scale introduction of the radioimmunochemical control of aflatoxin B1 contamination in cereals and feeds a new method of the preparation of sample extracts was verified. In comparison with the procedure used until now when water-nonmiscible chloroform must be evaporated from a chloroform extract and the solids must be dissolved in acetone, while using the tested method the sample is extracted by methyl alcohol or acetone and the extract is diluted by a buffer before the radioimmunoanalysis. This new method of sample extract preparation displays aflatoxin B1 recovery comparable to that of the older method (83-90% for concentrations of 2-20 micrograms per kg), the worse theoretical detection limit (1 microgram per kg vs. 0.2 microgram per kg) but it prevents the result distortion by interfering substances and it makes the whole analytical procedure simpler and expeditious. Radioimmunochemically aflatoxin was quantified by means of commercially produced analytical kits developed in one institute at Kosice.     

猪附红细胞体病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

以纯化的猪附红细胞体特异性抗原为包被抗原,在建立猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的基础上对各反应参数进行了优化,并初步组装成试剂盒。组装的试剂盒抗原最佳包被质量浓度为30 mg/L,被检血清稀释度为1∶100,酶标二抗的最适工作滴度为1∶4 000,底物TMB最适反应条件为室温15 min;检测血清的判定标准为D450值≥0.13定为阳性反应,D450值≤0.11定为阴性反应,0.11~0.13定为疑似反应;该试剂盒不与猪大肠杆菌病、猪弓形虫病及猪瘟等阳性血清发生交叉反应,具有较好的特异性;在不同时间对阴阳性样品重复检测8次,阴阳性血清的D450值变异系数均未超过10%,说明该试剂盒具有良好的重复性;通过对组装试剂盒中各组分的稳定性和保存时间的测定结果证实,该试剂盒的保质期暂定为6个月;应用保存6个月的试剂盒通过对吉林省延边地区的60份猪血清样本检测,并与间接ELISA比较,其阳性符合率达100%,说明该试剂盒具有较好的稳定性。     

猪弓形虫病的ELISA诊断及试剂盒建立

用弓形虫的重组蛋白P30作为ELISA诊断抗原,进行了ELISA诊断试剂盒的建立,并对互助县猪弓形虫病的血清学诊断。经对所收集的139份猪血清抗体进行检测,共检出阳性血清8份,阳性率为5.76%。结果说明互助县猪群中存在弓形虫病的感染。     

王丽娜，郝利忠，韩春晓，苗翠

畜产品中药物残留主要包括β-受体激动剂类、抗生素类、性激素类等药物。ELISA检测技术因其灵敏度高、特异性强、仪器设备简单、成本低、方法快速、简便等优点,成为畜产品中药物残留目前最理想的检测技术之一。为了考察试剂盒的各项指标与标示指标是否一致和能否正确使用试剂盒,本文就ELISA检测技术在畜产品中兽药残留检测试剂盒的选择原则和使用注意事项进行了归纳总结。     

可乐定ELISA检测试剂盒的研制及其性能评价

本研究通过制备可乐定完全抗原,免疫新西兰大白兔,得到特异性多克隆抗体,并和HRP标记的羊抗兔,构建间接ELISA检测法试剂盒,并进行性能测试评价。结果表明,吸光度百分比值与赛庚啶质量浓度的对数在0.1-8.1μg/L呈线性关系,相关系数R₂为0.977,半数抑制浓度(IC₅₀)为0.675μg/L,检测限为0.2μg/L,回收率为81% ～109%,具备良好的特异性,可用于动物尿样、血清和组织中的可乐定残留检测。