早期胚胎玻璃化冷冻保存技术研究进展

本综述阐明了胚胎玻璃化冷冻原理，比较了玻璃化冷冻技术各种方法及其优缺点，分析了胚胎玻璃化冷冻的影响因素，展望了玻璃化冷冻技术的应用前景。     

猪胚胎冷冻技术的研究历程与未来展望

本文论述了近年来国内外猪胚胎冷冻技术的研究历程,分析了玻璃化冷冻技术在猪胚胎冷冻实际应用中存在的问题。结合发现的问题和最新的研究进展,从玻璃化冷冻剂的改良、玻璃化冷冻流程的优化、玻璃化冷冻与多组学研究等3个方面对猪胚胎冷冻技术的研究进行展望,以期为猪胚胎冷冻技术的创新提供理论依据。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展

自1985年胚胎玻璃化冷冻(v itrification)保存技术发明以来,玻璃化法先后在小鼠、兔、绵羊、牛、猪、山羊等动物胚胎上获得成功,近年来有关哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究主要集中在冷冻和解冻方法上,相继发明了一些新的玻璃化冷冻方法:冷环玻璃化法(cryo loop)和开放式细管法(open pu lled straw,OPS),并且对解冻后细管内直接脱除防冻剂进行了广泛深入的研究,使得冷冻胚胎移植更易于在生产上推广应用。现将胚胎玻璃化冷冻的原理、冷冻保护剂、冷冻方法、解冻后保护剂脱除方法的最新研究进展作一综述。     

哺乳动物胚胎冷冻保存研究进展

哺乳动物胚胎冷冻保存效果受冷冻保护剂、冷冻方法、解冻方法等多种因素影响,其中冷冻方法是一个关键性因素.目前胚胎冷冻方法主要有常规慢速冷冻法和玻璃化冷冻法两种.常规慢速冷冻法是指利用甘油、乙二醇等做冷冻保护剂通过缓慢降温的方式进行胚胎冷冻;玻璃化冷冻法是指利用高浓度的冷冻保护剂通过快速降温的方式进行胚胎冷冻.与常规慢速冷冻法相比,玻璃化冷冻法简化了操作过程,大大缩短了操作时间,不需昂贵的程序控制冷冻仪.     

动物胚胎玻璃化冷冻的试验

胚胎的玻璃化冷冻技术是胚胎生物工程技术在生产中进行生产化应用的技术关键,本研究通过对该方法的研究和探讨,试图取得该技术在牛胚胎生产中应用的技术关键,为牛胚胎的玻璃化冷冻提供科学依据和技术支持。我们利用小白鼠和牛超排胚胎开展了本项试验,并在小白鼠和牛胚胎的玻璃化冷冻和解冻方面,选出了一组比较理想的玻璃化冷冻剂、解冻剂和操作程序,在实验中获得了良好的冷冻和解冻效果。     

不同冷冻方法对水牛体外生产胚胎冷冻效果的研究

本研究采用不同来源的体外生产胚胎(屠宰场卵巢IVF胚胎,OPU-IVF胚胎,SCNT胚胎),系统研究了不同冷冻方法对水牛体外生产胚胎冷冻效果的影响,以完善水牛体外生产胚胎冷冻方法,进一步提高胚胎冷冻效果。试验选用6～7日龄囊胚分别用不同的冷冻液和不同冷冻方法进行胚胎冷冻。玻璃化冷冻液分别为40%EG、25%EG+25%DMSO和20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖;程序化冷冻液分别为10%甘油和0.05 mol/L海藻糖+1.8 mol/L EG+0.4%BSA。结果表明:(1)在玻璃化冷冻中,无论何种胚胎不同冷冻液的冷冻效果有明显的差异,但均以20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖作为冷冻液的冷冻效果最好,并且高于程序化冷冻的存活率;而对于程序化冷冻,用10%甘油作为冷冻液,屠宰场卵巢IVF胚胎的冷冻后存活率略高于用0.05 mol/L海藻糖+1.8 mol/L EG+0.4%BSA的冷冻后存活率,但差异不显著(P>0.05)。(2)VF胚胎利用程序化冷冻胚胎解冻后,在0～24 h内有76.5%胚胎复活,高于玻璃化冷冻的复苏率(48.9%)(P<0.05);而与此相反,在24～48 h内,玻璃化冷冻胚胎的复苏率(42.6%)则高于程序化冷冻(23.5%)(P<0.05)。综上所述,各种来源的水牛体外生产胚胎均可进行冷冻保存,应用玻璃化冷冻的效果好于程序化冷冻,且以20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖作为冷冻液进行玻璃化冷冻效果最好,但程序化冷冻后的胚胎复苏速度明显快于玻璃化冷冻的速度。     

动物胚胎玻璃化冷冻的试验

胚胎的玻璃化冷冻技术是胚胎生物工程技术在生产中进行生产化应用的技术关键，本研究通过对该方法的研究和探讨，试图取得该技术在牛胚胎生产中应用的技术关键，为牛胚胎的玻璃化冷冻提供科学依据和技术支持。我们利用小白鼠和牛超排胚胎开展了本项试验，并在小白鼠和牛胚胎的玻璃化冷冻和解冻方面，选出了一组比较理想的玻璃化冷冻剂、解冻剂和操作程序，在实验中获得了良好的冷冻和解冻效果。     

ε-聚赖氨酸在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用

通过研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)对牛胚胎玻璃化冷冻的影响,探讨ε-PL在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用,为优化牛胚胎玻璃化冷冻技术提供依据。单独以ε-PL作为冷冻保护剂,其质量浓度为20、35、50g/L,分别进行胚胎冷冻,结果均不能取得成活胚胎,说明ε-PL不能单独作为冷冻保护剂使用。在传统玻璃化冷冻剂中分别添加质量浓度为10、20、30g/L的ε-PL进行胚胎冷冻,结果发现添加ε-PL之后的冷冻保护液具有更好的保护效果,且ε-PL质量浓度为20g/L时效果最好,囊胚解冻孵化率可达42.37%。进一步探索了用该冷冻保护剂,缓冲时间分别为5、7.5、10min进行胚胎冷冻的效果,结果发现缓冲时间为7.5 min取得最高孵化率,孵化率为46.58%。结果表明,ε-PL对牛胚胎玻璃化冷冻具有一定的保护作用,且适当延长缓冲时间可取得更好的冷冻效果。     

小鼠卵母细胞和胚胎不同冷冻方法的比较研究

探讨程序化冷冻与玻璃化冷冻对小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎的复苏率及其发育潜能的影响。通过小鼠的卵母细胞与早期胚胎的不同冷冻方法的比较,为后续阿旺绵羊的胚胎冷冻保存提供参考。采用程序化冷冻与玻璃化冷冻技术,分别冷冻小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎,复苏后培养,比较不同冷冻处理后的复苏率、成熟率与囊胚率。小鼠GV期卵母细胞程序化冷冻复苏率(48.00%±5.29%)显著低于玻璃化冷冻复苏率(65.00%±5.00%),有统计学差异(P=0.0147<0.05);而程序化冷冻后复苏卵母细胞的发育成熟率略高于玻璃化冷冻组,但无统计学意义。小鼠二细胞期胚胎程序化冷冻组复苏率(76.00%±2.00%)显著高于玻璃化冷冻组复苏率(70.00%±2.00%),有统计学差异(P=0.0213<0.05);冷冻后复苏胚胎发育的囊胚率程序化冷冻略低于玻璃化冷冻及对照组,但无统计学意义。     

牛胚胎玻璃化冷冻技术研究进展

胚胎冷冻保存是保存和繁殖遗传优势动物的主要工具,是胚胎移植产业的重要组成部分。目前广泛使用的冷冻方法主要有慢速冷冻和玻璃化冷冻2种。由于玻璃化冷冻具有成本低、效率高、操作简单等优点,玻璃化冷冻法越来越受到人们的重视。经过多年研究,研究人员已经在玻璃化冷冻方法、冷冻液等方面取得了大量进展,玻璃化冷冻法已经开始进入商业化应用。本文综述了牛胚胎冷冻保存技术的研究进展,旨在为相关从业人员提供一定借鉴和参考。     

不同冷冻和解冻方法对小鼠桑椹胚发育的影响

本试验以2种程序化冷冻液和2种玻璃化冷冻液对昆明白系小鼠的桑椹胚进行细管法冷冻保存,比较程序化冷冻-管外解冻和玻璃化冷冻-管内解冻对胚胎体内、外发育的影响。胚胎体外培养结果表明:玻璃化冷冻组及程序化冷冻组胚胎发育率(95.3%￣95.8%,98.9%)无显著(P>0.05)差异。将程序化冷冻、EFS30玻璃化冷冻以及新鲜的胚胎各168枚移植给假孕受体鼠,妊娠受体产活仔率各组间相比(50.8%,58.3%,54.9%)无显著性(P>0.05)差异。结果证明,玻璃化冷冻保存的胚胎管内解冻效果好,为生产中家畜的胚胎移植提供了理论和技术参考。     

小鼠胚胎的玻璃化冷冻研究

用不同冷冻载体(玻璃管、塑料管和0.25 mL细管)及不同冷冻方法(程序化冷冻和玻璃化冷冻)对小鼠3.5 d~4 d桑椹胚和囊胚进行冷冻保存,并与不做任何冷冻保存处理直接培养进行对比。结果表明,使用玻璃管、塑料管和0.25 mL细管作为胚胎的承载材料进行玻璃化冷冻,效果差异不显著;采用程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻法,对小鼠胚胎进行冷冻保存可以取得较好的结果。从而得出,用不同材质的冷冻载体进行玻璃化冷冻,可以获得与程序化冷冻相同的良好效果。     

影响山羊胚胎冷冻效果因素的研究

分别用浓度为1.5 mol/L的乙二醇(EG),1.5 mol/L 1,2-丙二醇(PROH)和1.5 mol/L甘油为冷冻保护液对山羊胚胎进行常规冷冻保存,结果三者对山羊胚胎的冷冻保护效果无显著差异,其中以1.5 mol/L EG的冷冻保护效果为佳。以EFS40为玻璃化液对山羊胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻,其结果与常规冷冻间差异不显著,表明常规冷冻法、玻璃化细管法和OPS法均可用于山羊胚胎的冷冻保存。采用25℃和37℃水浴对常规冷冻和玻璃化冷冻后的山羊胚胎进行解冻,从解冻后的发育效果看,二者间无显著差异,但37℃水浴解冻后的胚胎发育效果略好于25℃。还比较了玻璃化液EFS40中添加FCS和BSA后与不添加其他成分的EFS40对胚胎冷冻保护效果的影响,结果表明添加BSA的EFS40的冷冻保护效果显著地高于不添加其他成分的EFS40,但与添加FCS的EFS40间不存在统计学上的差异。     

牛胚胎玻璃化冷冻技术的发展和应用概况

胚胎冷冻保存是动物胚胎工程的重要组成部分，它是胚胎移植技术在生产中推广应用的重要基础。和现在通用的常规冷冻法相比，玻璃化冷冻具有用时短，所需设备少和操作简单等优点，成为目前国内外胚胎冷冻保存领域发展新方向。本文就牛胚胎玻璃化冷冻的概念、方法和国内外发展状况做一简要综述。     

OPS玻璃化冷冻对小鼠四倍体胚胎体外发育的影响

为探究开放式拉长细管(OPS)玻璃化冷冻对四倍体胚胎发育的影响,本实验利用2-细胞胚胎电融合法制备四倍体胚胎,再对四倍体胚胎进行OPS玻璃化冷冻,分别观察记录二倍体胚胎、四倍体胚胎以及冷冻解冻后四倍体胚胎的发育情况。结果表明:2-细胞胚胎电融合效率为96.1%;二倍体胚胎组与电融合后四倍体胚胎组的囊胚率和孵化囊胚率差异不显著;冷冻解冻后四倍体胚胎的囊胚率(100%)与四倍体新鲜组(93.3%)差异不显著,其孵化囊胚率(72.3%)较新鲜组(64.9%)显著增高(P<0.05);四倍体冷冻解冻组的囊胚细胞数(31.96)与新鲜组(32.54)无显著差异;冷冻解冻后的四倍体早期囊胚进行体外培养时其发育速度比对照组更快。可见,冷冻对小鼠四倍体胚胎的囊胚率和囊胚细胞数均无显著影响,但孵化囊胚率显著提高,且OPS玻璃化冷冻后使四倍体胚胎的发育速度更快。     

玻璃化法冷冻牛胚胎细管内脱除冷冻剂

玻璃化法冷冻牛胚胎细管内脱除冷冻剂Ｇ．Ｖａｊｔａ等著潘利华摘译龙登宵校玻璃化冷冻方法，因其所需设备简单、快速和冷冻效果好，有可能将成为牛胚胎的常规冷冻方法（此法本刊１９８９，５：１８－２１曾有详细报道－编者）。近年来，对玻璃化法进行了两项重要改进。第...     

ε-聚赖氨酸对小鼠胚胎玻璃化冷冻的影响

为研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)对小鼠胚胎玻璃化冷冻效果的影响,探讨冷冻保护剂ε-PL适宜的浓度和平衡时间,试验采用了不同质量浓度的ε-PL(20,30,40 g/L)及不同的平衡时间(0.5,1.0,2.0 min)对小鼠囊胚进行玻璃化冷冻,统计胚胎解冻后存活率及孵化率。结果表明:在冷冻液中添加30 g/L的ε-PL,平衡时间为1.0 min时,冷冻效果最好,囊胚胚胎的存活率达91.2%,孵化率达89.7%。因此,ε-PL可以作为一种高分子非渗透性保护剂对胚胎玻璃化冷冻起保护作用。     

牛IVP胚胎玻璃化冷冻技术的研究

作者比较了乙二醇传统冷冻和OPS玻璃化冷冻牛IVP胚胎的效果,目的是改善其冷冻效果,提高IVP胚胎的移植妊娠率。结果表明,玻璃化冷冻后的存活率(D7-71)明显高于D7-71L(P<0.01),D7-72组与D7-71L组(传统冷冻方法)的存活率基本一致(P>0.05)。     

猪胚胎冷冻保存研究现状

猪胚胎超低温冷冻对地方猪种的长期保存意义重大。长期以来,由于猪胚胎脂质含量较高等原因,进展一直较为缓慢(相对于牛、羊等动物)。近年来,由于玻璃化冷冻技术(特别是OPS玻璃化冷冻技术)的突破,使胚胎超低温冷冻保存成功率大幅度提高。本是法国国家农业科学院Francoise Berthelot教授对该领域的最新研究进展作的总结。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎冷冻保存技术按其进展分为缓慢冷冻法、快速冷冻法和玻璃冷冻法。玻璃化冷冻法又分为常规细管法和OPS法。本文综述了缓慢冷冻法、快速冷冻法以及玻璃化冷冻法的操作过程及所需的抗冻保护剂,并对各种方法的优缺点进行了初步分析。