溴氰菊酯人工抗原合成及鉴定

以二溴菊酸和3-[(4-硝基苯)氧基]苯甲醛为原料经4步反应合成了溴氰菊酯半抗原1-氰基[3-(4-氨基苯)苯基]甲基-2,2-二甲基3-(2,2-二溴乙烯基)环丙烷羧酸酯;用重氮化法将溴氰菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）相偶联制备免疫抗原和包被抗原,紫外吸收法估算偶联比分别为11:1和8:1;以BSA偶联物作免疫抗原免疫日本大耳白兔制备溴氰菊酯多克隆抗体,间接非竞争ELISA法测定2个抗血清效价分别为100000和80000,间接竞争ELISA法初步测定农药浓度50μg/ml时抑制率达到80%以上,为研究建立溴氰菊酯农残免疫快速测定方法奠定了基础。     

有机磷特异性人工完全抗原的合成与鉴定

将含有苯环结构和硫代膦酸键的杀螟硫磷作为基本机构,经氨基化衍生反应,制备得到了有机磷半抗原。通过紫外、质谱、核磁共振鉴定,表明半抗原合成成功。通过重氮化反应,将半抗原偶联到载体蛋白上,进行紫外扫描、红外波谱和PAGE电泳鉴定,结果显示半抗原和载体蛋白偶联成功。利用紫外可见分光光度法,测得半抗原和载体蛋白的偶联比为7.61∶1,达到免疫要求。该方法为研究有机磷农药多残留免疫检测奠定了基础。     

伊维菌素人工抗原的制备及鉴定

为制备伊维菌素人工完全抗原,通过对伊维菌素进行化学修饰,引入活性基团羧基,合成具有半抗原结构特征的伊维菌素半琥珀酸酯。然后采用NHS法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,制备人工免疫原IVM-BSA和检测原IVM-OVA,经SDS-PAGE和紫外光谱扫描鉴定。用人工免疫原IVM-BSA免疫Balb/c小鼠,间接竞争ELISA法测定抗血清效价。结果发现：偶联物IVM-BSA和IVM-OVA的偶联比分别为14.1:1和14.7:1,免疫小鼠抗血清效价达到1:12800,结果说明成功制备出人工完全抗原并且具有良好的免疫原性。     

西马特罗人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备

拟合成并鉴定西马特罗(Cimaterol,CIM)人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源CIM多克隆抗血清.通过重氮化方法将西马特罗偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫抗原BSA-CIM和包被抗原OVA-CIM,并采用紫外分光光度法和SDS-PAGE进行了鉴定.结果表明,半抗原CIM和载体蛋白偶联成功.动物免疫试验结果显示,6只小鼠效价均达1×10-3以上,且4号小鼠多抗血清抗CIM的IC50为86.9 ng/mL,表明成功获得了高效价、特异性好、亲和力高的的鼠源抗CIM多抗血清.     

孕酮人工抗原的合成及间接ElISA法鉴定

摘要：本研究采用二环己基碳二亚胺法将孕酮衍生物P4-11α-半琥珀酸酯与载体BSA和OVA进行偶联,制备了孕酮人工完全抗原（免疫原和检测原）,然后免疫Balb/c小鼠,制备孕酮多克隆抗体。用紫外光谱扫描法鉴定偶联是否成功并用间接Elisa法对孕酮多克隆抗体进行鉴定;结果显示,孕酮和BSA、OVA的偶联比分别为18:1、10:1,免疫血清孕酮抗体效价高达1：25600,这说明成功制备了免疫原和检测原,为孕酮胶体金试纸条的研制奠定了基础。     

特布他林人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备

合成并鉴定特布他林（Terbutaline,TBL）人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源TBL多克隆抗血清。分别通过1,4丁二醚法和EDC法将特布他林偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫抗原BSA-TBL和包被抗原OVA-TBL,并采用紫外分光光度法和SDS-PAGE进行鉴定,通过动物免疫试验获得鼠源多抗血清,并使用ELISA和阻断ELISA的方法对多抗血清进行了鉴定。结果表明半抗原TBL分别和载体蛋白BSA及OVA偶联成功;受免6只小鼠效价均达1×10-4以上,且1号小鼠多抗血清抗TBL的IC50为55.88 ng/mL。本试验成功合成了TBL人工抗原,并生产了高效价、高敏感性的鼠源多克隆抗血清,为TBL单克隆抗体制备及其快速检测试剂的研制奠定了坚实的基础。     

氰戊菊酯特异性人工抗原的合成与鉴定

基于农药小分子人工抗原设计合成的基本原则,以氰戊菊酯的特征菊酸部分——氰戊菊酸作为半抗原,与载体蛋白BSA偶联合成了氰戊菊酯免疫特异性人工结合抗原,并对抗原合成条件进行了探索。结果表明,抗原合成反应温度以室温为宜,偶联时缓冲液的最佳pH值为8.0;通过紫外分光光度仪扫描,合成抗原的紫外图谱相对于半抗原和载体蛋白均发生了偏移,表明偶联成功;SDS-PAGE电泳结果表明,合成产物蛋白条带明显在载体蛋白条带之后,即合成产物的分子量大于相应的载体蛋白分子量,从而判定偶联是成功的。     

内蒙古河套灌区磷石膏改良碱化土壤效果的研究

采用磷石膏改良碱土和碱化盐土,脱碱效果十分显著.磷石膏因酸度大,还可以提高土壤养分元素、特别是微量元素的有效性,并能很好地改善碱化土壤的物理性状.施有机肥改良碱土效果也比较好,只是速度缓慢.靠掺砂和单纯的水利冲洗,脱碱效果不佳.     

卡那霉素人工抗原的制备及鉴定

为了人工制备卡那霉素完全抗原。将卡那霉素标准品与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联,制备人工抗原。利用两种不同的偶联方法：碳二亚胺法(EDC)和戊二醛法(GDA),分别制备出KAN-BSA（作为免疫原）,KAN-GDA-OVA（作为包被原）。利用SDS-PAGE凝胶电泳鉴定和动物免疫试验等,鉴定了完全抗原偶联情况。结果显示：制备的卡那霉素完全抗原能刺激小鼠机体产生相应抗体,且抗血清效价均达到1:2.56×10⁴,其中一号小鼠的IC₅₀值为22.28 ng/mL,说明完全抗原免疫原性良好,抗原制备成功。     

有机磷农药氯亚磷 亚胺硫磷半抗原的合成与人工抗原制备

对氯亚磷结构进行修饰,连接一个六碳的间隔臂,制得亚胺硫磷、氯亚磷的半抗原,确定最佳反应条件。利用薄层层析和质谱法,对反应进行实时监控,确定最佳反应时间为16d。通过EDC法成功制备亚胺硫磷和氯亚磷人工抗原。     

黄曲霉毒素B1完全抗原合成及鼠源多抗血清的制备

为了合成黄曲霉毒素B1(AFB1)完全抗原,制备鼠源AFB1多克隆抗体血清。通过琥珀酰亚胺酯法在黄曲霉毒素B1(AFB1)分子上引入羧基,生成黄曲霉毒素B1肟(AFB1O)。用EDC法和DCC法合成AFB1-BSA和AFB1-OVA。采用薄层层析技术、紫外光谱技术(Uv)、SDS-PAGE鉴定完全抗原的合成。通过免疫BALB/c小鼠,获得鼠原多克隆血清,采用间接ELISA方法测定多抗血清的免疫效价,用竞争ELISA检测多克隆血清的敏感性和特异性。结果表明：免疫小鼠血清效价都在1:3200以上,其中6号鼠效价最高,到达1.28×10-4,敏感性好,半数抑制浓度IC50为22.268 ng/mL,交叉反应率低。本研究成功制备了AFB1完全抗原,获得了敏感的AFB1多克隆抗体血清,为以后制备AFB1单克隆抗体及免疫学快速检测方法奠定了基础。     

丙烯酰胺人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

摘 要：利用偶联方法合成丙烯酰胺人工抗原,通过免疫方法获得抗丙烯酰胺多克隆抗体;应用戊二醛法将丙烯酰胺与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,并对这两种物质及其复合物进行紫外扫描,并用此复合物免疫兔子,利用间接酶联免疫吸附法测定抗体的效价;应用牛血清白蛋白与丙烯酰胺偶联人工抗体成功,抗体效价大于8100;应用人工抗原免疫成功制备抗丙烯酰胺多克隆抗体。     

陕北地区六种小米中叶酸含量的检测

为了解陕北地区小米中叶酸含量情况,采用试剂盒微孔板法对陕北地区6种小米进行检测。叶酸含量分别为60.3,47.8,42.8,40.6,49.9,72.5μg/100 g;RSD值分别为2.2%,2.8%,3.5%,2.9%,3.4%,2.0%。说明同一地区不同产地小米中叶酸含量有较大差异。     

Synthesis and identification of the artificial antigens for pyrethrins

Six haptens of pyrethrins are synthesized by preparing carboxyl of a ketone group of five membered rings．Six complete antigens are made by conjugating haptens to Bovine serum albumin (BSA) using a carbodiimide method．Ultraviolet spectrophotometry is used to demonstrate that the molecule conjugation ratios of Pyrethrin I-II, Cinerin I-II, and Jasmolin I-II to BSA are 6∶1, 13∶1, 9∶1, 11∶1, 7∶1, and 9∶1, respectively．The complete antigens are used as immunogens to immunize BALB/c mice to prepare antiserum．The antibody titers exceed 105 when measured using indirect enzyme linked immunoassay (ELISA). The polyclonal antibodies against pyrethrins are obtained via saturated ammonium sulfate precipitation．This research is may improve enzyme linked antibody detection and immunosorbent assay of pyrethrins．     

阪崎肠杆菌多克隆抗体的制备与鉴定

为制备高效价的阪崎肠杆菌单克隆抗体,分别以福尔马林灭活的阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)菌体和菌体破碎细胞为免疫原免疫雌性清洁级大白兔,制备抗C.sakazakii多克隆抗体,获得的抗体效价分别为256000和64000,选取菌体免疫原制备抗体。采用辛酸-硫酸铵法纯化抗体,抗体纯度用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。斑点杂交法检测抗体特异性,所获抗体与S.aureus, L.monocytogenes, S.typhimurium, S.flexneri, E.coli无交叉反应,与沙门氏菌有轻微交叉反应,采用杂菌抗原反向吸附法去除了该交叉反应。选取菌体免疫原免疫动物,杂菌抗原反向吸附法纯化制备获得了对C.sakazakii特异性高的多克隆抗体,为阪崎肠杆菌免疫学检测奠定了基础。     

大肠杆菌内毒素多克隆抗体的制备与纯化

为制备大肠杆菌内毒素多克隆抗体,应用大肠杆菌内毒素作为抗原免疫5周龄家兔,辛酸-硫酸铵法和葡聚糖凝胶层析法分离提纯抗血清,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳方法鉴定多抗纯度,紫外分光光度计测定抗体蛋白含量,ELISA法检测抗血清效价与交叉反应;大肠杆菌内毒素抗体含量和效价分别为6.95mg/ml和1:12800;成功制备出抗大肠杆菌内毒素多克隆抗体,为大肠杆菌内毒素病诊断试剂盒的研制奠定基础。     

齿兰环斑病毒CP基因的原核表达及其产物抗血清制备

本研究在于探讨侵染兰花的重要病毒之一齿兰环斑病毒（Odontoglossum ringspot virus,ORSV）的检测技术。从福建省漳州市采集感染齿兰环斑病毒的建兰病样,设计一对特异性引物扩增并克隆得到该病毒的外壳蛋白基因,该基因开放阅读框长477 bp,编码158 aa约合18.0 kDa的蛋白质,随后将目的基因插入pET-29a（+）中构建相应的原核表达载体进行诱导表达,目的蛋白经纯化后免疫家兔获得了特异性抗血清。Western blot检测结果表明,抗血清与诱导表达的ORSV外壳蛋白发生特异性反应。间接酶联免疫吸附检测结果表明,抗血清可检测病叶的最低稀释度达1:25600（v/v）,最佳工作浓度为1:12800（v/v）,病汁液灵敏度为0.195 mg/mL（w/v）,而与TMV等11种同源或异源病毒均无明显的血清学交叉反应。     

Transgressive segregation and reciprocal effect for free folic acid content in a red beet (beta vulgaris L.) population

Folic acid is one of the ten essential vitamins in the human diet. Red beet (Beta vulgaris L.) is an excellent source of free folic acid among vegetable plants. Thirty-seven F₃ families derived from the cross W364 × Nochowski, sixteen F₃ families derived from the reciprocal cross, and the two parents were evaluated for free folic acid content (FFAC) in two locations in Wisconsin in 1994. Parental means of FFAC were 3.4 and 8.8 μg g^-1 dry wt. for Nochowski and W364, respectively. The range of FFAC in F₃ families was from 2.3 to 15.8 μg g^-1 dry wt. The genetic variance among F₃ families was large. Transgressive segregation for FFAC was observed in the F₃ family distribution, suggesting multiple genes control this trait. FFAC means differed at the two locations. Overall means of the reciprocal crosses were significantly different in FFAC at both locations (P < 0.05), suggesting reciprocal effects on FFAC in this population. The broad sense heritability for FFAC in this population was estimated as 0.84. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.