SB-431542对梅花鹿鹿茸软骨层细胞增殖的影响

通过研究转化生长因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)的特异性小分子拮抗剂SB-431542对梅花鹿鹿茸软骨层细胞增殖的影响,探讨转化生长因子β在鹿茸快速生长中的调节机制。分离培养生长30天的梅花鹿鹿茸软骨层细胞,将传代培养第2代的细胞经不同浓度的SB-431542 (0,1,3,5,8,10μM)作用,培养48小时后用MTT法测其细胞增殖的变化,并用SPSS软件分析其差异性。结果显示,SB-431542处理组细胞增殖活性都低于对照组(P＜0.05),其中浓度为8μM和10μM的SB-431542处理组与对照组相比差异非常显著(P＜0.01),随着添加SB-431542浓度的升高,对细胞的生长速度抑制更加明显,试验表明,TGF-β对维持梅花鹿鹿茸软骨层细胞的快速增殖有重要作用。     

IGF1对不同培养代数梅花鹿鹿茸间充质层细胞增殖的影响

【研究目的】通过细胞培养技术,探讨胰岛素样生长因子1（IGF1）对体外培养不同代数的梅花鹿鹿茸间充质层细胞增殖的影响。【方法】分离、培养生长90d的梅花鹿鹿茸间充质层细胞,将传代培养第2代、5代、8代细胞经含有不同浓度的IGF1（0,1,3,和10 nM）作用,培养24 h后用3H-胸腺嘧啶核苷掺入测定法检测蛋白合成放射性含量。【结果】不同浓度IGF1处理组的蛋白合成放射性含量的平均值和最高值都是离体培养2代的细胞最高（分别为32146和35973 DPM/mg）;培养5代的细胞（分别为2781和3206 DPM/mg）已明显下降;第8代时（分别为489和736 DPM/mg）又进一步下降,并且与对照组无显著的差异。【结论】不同培养时期的梅花鹿鹿茸间充质层细胞对IGF1刺激的敏感度不同,取材于生长90天鹿茸的间充质层细胞在离体培养8代后已失去了对IGF1刺激的敏感性。     

塔里木马鹿再生茸组织中原癌基因c-myc、c-fos的表达

为进一步确定原癌基因c-myc、c-fos对马鹿茸生长的作用,实验收集231头2至4岁公鹿产茸量的生产信息,并采用3头成年马鹿生长期为30天、60天的头茬鲜茸和3头成年马鹿割后生长30天、60天的再生鲜茸,通过荧光定量PCR技术对不同组织基因的表达定量分析。结果表明,在鹿茸生长早期c-myc在再生茸茸皮的表达量显著低于头茬茸（P＜0.01）。c-myc基因在割后再生的60天鹿茸茸皮和软骨组织表达下调,与头茬茸60天的相比,表达有显著差异（P＜0.05）。间充质细胞层和成软骨层c-myc基因的表达量很低,且表达没有差异。从30天到60天,c-fos基因割后再生的马鹿茸茸皮中的表达下调,而在软骨组织中表达上调。与头茬60天茸相比,表达均有显著差异（P＜0.05）。而在间充质细胞层和成软骨层没有差异。c-fos基因头茬与割后再生的60天马鹿茸的表达趋势与生长期为30天的相同。与头茬茸比较,再生茸成软骨层组织c-fos基因表达有上调趋势。结论：原癌基因c-myc、c-fos对茸皮的生长主要是促进其表皮干细胞的增殖分化;而对软骨组织c-myc基因高表达有阻碍茸软骨骨化,减缓骨化进程的作用,c-fos基因低表达有抑制生茸期骨膜内生骨的过程。     

以小鼠骨髓间充质干细胞为饲养层分离培养胚胎干细胞的研究

【研究目的】为了探求一种更简单有效地分离培养昆明小鼠胚胎干细胞的饲养层培养体系;【研究方法】将昆明小鼠3.5d的胚胎,接种于昆明小鼠骨髓间充质干细胞的饲养层培养体系,来分离培养昆明小鼠的胚胎干细胞。【结果】发现在骨髓间充质干细胞的饲养层培养体系上,获得了典型的ES细胞样集落,碱性磷酸酶染色呈阳性,且具有分化的潜能。【结论】小鼠骨髓间充质干细胞可以作为饲养层来分离培养ES细胞,并且能保持ES细胞的体外未分化状态。     

不同培养代数鹿茸生长中心细胞对IGF1刺激 的反应

【研究目的】探讨胰岛素样生长因子（IGF1）对生长60 d的梅花鹿鹿茸体外培养不同代数鹿茸生长中心细胞的影响。【方法】分离、培养生长60d的梅花鹿鹿茸生长中心细胞,将培养第2 代、5 代、8 代细胞经含有不同浓度的IGF1（0,1,3 和10 nM）作用,在培养24 h后用3H-胸腺嘧啶核苷掺入测定法检测每分钟衰变数（DPM）值。【结果】全部IGF1处理组都显著高于对照组（p<0.01）。不同浓度IGFⅠ处理组的平均值和最高值都是离体培养2 代的细胞的DPM最高（分别为31918和39818 DPM/mg蛋白）,培养5 代的细胞（分别为5455和6815 DPM/mg蛋白）已大大地下降;到了第 8代的（分别为4030和4838 DPM/mg蛋白）又有进一步的下降。【结论】IGF1能够促进鹿茸生长中心细胞分裂增殖,生长60 d鹿茸的生长中心细胞在离体培养,不同培养时期的鹿茸生长中心细胞对IGFⅠ刺激的敏感度不同。     

樱桃再生体系研究

摘要: 以樱桃枝条为材料,研究了樱桃离体培养及再生体系,探讨了不同激素组合对樱桃愈伤组织的产生、分化、增殖以及生根的影响,对樱桃再生体系进行优化,筛选出适合樱桃枝条腋芽诱导的培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;无菌芽各种外植体形成愈伤组织、分化和增殖的培养基为MS+BA0.5mg/L+2-4D0.5mg/L;壮苗培养基为MS;生根的培养基为1/2MS+NAA1.0mg/     

lncRNA2099对猪前脂肪细胞增殖、分化标志基因的影响

为了探究lncRNA2099对猪前脂肪细胞增殖分化的影响,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测lncRNA2099在猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背肌和背脂及离体培养的前体脂肪细胞增殖和分化阶段的表达水平;利用核质分离技术确定lncRNA2099在脂肪细胞中的表达位置;构建真核表达载体pcDNA3.1-lncRNA2099,采用qRT-PCR技术检测在脂肪细胞内过表达该lncRNA后对脂肪细胞增殖、分化相关标志基因表达的影响。结果显示：lncRNA2099存在明显组织表达特异性,且在肾脏和背脂中高表达,在背肌中不表达;lncRNA2099在猪前脂肪细胞增殖阶段12 h表达量最高,随后逐渐降低。在分化阶段第2天表达量最高,随后逐渐降低。核质定位结果表明,lncRNA2099在细胞核与细胞质中均有表达;在脂肪细胞内过表达lncRNA2099后,增殖标志基因P21与成脂分化标志基因LPL表达量极显著升高。lncRNA2099可能作为转录调节因子抑制猪前脂肪细胞增殖、促进成脂分化。     

山羊骨髓间充质干细胞生物学性能鉴定及诱导分化为心肌细胞的研究

研究了关中奶山羊骨髓间充质干细胞的分离、培养和生物学特性,并在体外诱导分化为心肌细胞表型。结果表明,山羊MSCs具有很好增殖能力;能够耐受反复冷冻和解冻;表达细胞表面标志CD44、CD105、CD166,弱表达CD34、CD106,而不表达CD14、CD45。该类细胞用5-氮胞苷诱导分化后,能够表达心肌α-actin,并呈PAS染色阳性。     

小鼠ES细胞在不同饲养层上培养nanog基因的表达水平与生长行为的研究

观察小鼠ES-D3细胞在MEF、新生牛睾丸支持细胞(nBTSCs)和新生兔睾丸支持细胞(nRTSCs)饲养层上生长4dnanog基因的表达水平和生长行为。RT-PCR分析显示,MEF饲养层上培养4d的ES-D3nanog基因含量高;nBTSC饲养层上培养nanog基因表达较低;而RTSC饲养层上培养nanog基因表达最低。结果显示:不同饲养层上的ES-D3细胞集落形态和培养4d分化程度有差异。在MEF饲养层上的ES-D3细胞培养4d,集落形态仍然很规则,细胞间紧密,集落表面少见大细胞,AKP染色强阳性。在nBTSC饲养层上的ES-D3细胞,集落界限清晰,AKP染色显示,集落大部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为弱阳性,可见集落表面分散有较多的大细胞。在nRTSC饲养层上的饲养层上的ES-D3,集落隆起不明显,集落界限不清晰,大部分集落形态不太规则,AKP染色显示集落中部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为全阴性,集落表面有较少的大细胞,集落周围有伸出的成纤维细胞。     

棉花胚性细胞悬浮系的建立及其影响因素分析

对棉花悬浮细胞系建立过程中激素的配比和浓度、培养基成分、悬浮细胞的生长过程及衰老过程中PCD的发生系统研究结果表明:MS 2,4 D0.5mg·L 1 KT0.1mg·L 1和MS 2,4 D0.1mg·L 1 KT0.1mg·L 1培养基有利于细胞分裂,能产生体积较大,均匀一致,细胞活力强的单细胞和小细胞团,适合于进行细胞生长调控等研究。而MS IBA0.5mg·L 1 KT0.1mg·L 1和MS IBA0.1mg·L 1 KT0.1mg·L 1培养基则有利于形成大的细胞团和不同时期的胚状体,适合于进行胚状体的发育研究。钾盐、肌醇有利于细胞的分裂增殖,且能抑制胚状体的发生。可通过增加钾盐(K )、肌醇含量来调节细胞的生长状态和细胞活性,以建成分裂增殖快、细胞活性强的悬浮细胞系。在悬浮培养过程中,管状细胞渐渐消失,被球状的单细胞和小细胞团所替代。棉花胚性愈伤悬浮细胞的生长曲线呈S形,在起始培养的0～3d是生长的延迟期;在第3～15天是指数增长期;到第15天以后,生长速度降低,是静止期。悬浮培养的棉花细胞必须在15d以前进行继代,以保持其旺盛的分裂能力和细胞活性。     

梅花鹿鹿茸真皮层细胞的分离培养及冷冻保存

为了研究梅花鹿鹿茸真皮层细胞的生物学特性,取梅花鹿鹿茸生长顶端的真皮层组织,分离真皮层细胞进行体外培养及冷冻保存。结果表明,在含10 %胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中,鹿茸真皮层细胞能进行短期体外培养,培养的细胞呈长梭形或菱形,细胞的生长状况良好,传代培养的细胞培养5d可长至汇合。传4代以前的细胞形态均一,边缘光滑,胞质均匀透明,细胞排列紧密;传5代后,细胞伸展变为扁平形,细胞突起增多,边缘不光滑,汇合后细胞排列疏松。以含5%二甲基亚砜(DMSO)和10%FBS的DMEM为冻存液,经梯度降温后冻存,真皮层细胞复苏后的存活率较高。     

梅花鹿鹿茸软骨细胞的培养及X型胶原的克隆和序列分析

X型胶原是肥大软骨细胞的标志物，据GenBank 中收录的人、鼠、牛、猪X型胶原基因的序列，进行同源性分析，在同源性高的相对保守区域设计了1对特异性引物。建立梅花鹿鹿茸软骨细胞的分离培养方法，培养鹿茸软骨细胞。提取细胞的总RNA，以总RNA为模板，用RT-PCR方法克隆了梅花鹿的X型胶原基因序列为877的片段，此片段全部位于编码区，与已报道的牛的X型胶原基因的序列比较，同源性达到96%。共有35个碱基发生变异。DNAStar 软件分析表明，二者推导的氨基酸序列同源性为95.5%。     

鹿茸角软骨细胞体外培养方法的建立及生长特性分析

【研究目的】建立梅花鹿鹿茸软骨细胞体外分离培养和扩增方法，观察鹿茸软骨细胞在体外培养的生物学特性，为鹿茸再生机理的研究奠定基础；【方法】体外分离培养鹿茸软骨细胞，采用组织学、MTT比色法、免疫组化等多种手段动态检测细胞生长增殖情况；【结果】核心部分，约150字鹿茸软骨细胞贴壁生长，原代细胞比传代生长速度快，原代及传代4代内的鹿茸软骨细胞均有活跃的增殖能力，软骨细胞呈三角形，多边形等多种形态，II型胶原免疫组化，甲苯胺蓝染色为阳性；【结论】体外分离培养鹿茸软骨细胞具有较强的增殖能力，传代培养4代内细胞生长旺盛并维持其生物学特性, 可满足后续实验研究要求。     

东北梅花鹿血液SOD纯化及部分性质的研究

为了研究生茸期梅花鹿血液中SOD纯化技术及其部分性质,为开发鹿血抗衰老资源奠定理论基础。用氯仿乙醇除血红蛋白、热变性、丙酮沉淀、DEAE层析等技术对生茸期鹿血SOD进行纯化;用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其亚基分子量。结果表明：SOD的初始比活力为12.84 U/mg,经纯化后得到SOD 0.16 mg/mL,最终比活力4122.74 U/mg,纯化倍数为321.2倍,回收率66.38%;鹿血SOD含有2个亚基,其相对分子量为17.32 KD和16.28 KD。结果提示：鹿血SOD在60℃,0.002 mmol/L的Cu2+浓度下SOD活力最高,此时所得SOD纯化效果较好。     

海马齿对氮、磷吸收利用速率的初步研究

为探讨海马齿对N、P营养元素的利用效率,在实验室条件下研究了海马齿对不同浓度N、P及其不同形态N的吸收速率。结果表明：（1）在适宜范围内,海马齿对氮、磷的吸收速率随介质中氮、磷浓度的升高而升高,差异显著(P<0.05)。在氮浓度为100 μmol/L时,氮吸收速率最大,为11.11 μmol/g?d;在磷浓度为10 μmol/L时,磷吸收速率最大,为0.74 μmol/g?d。（2）不同氮磷比及氮浓度下,海马齿对氮的平均吸收量仅在氮磷比1：1和5：1组差异显著(P<0.05),其余组差异不显著;不同氮磷比及氮浓度下,海马齿对磷的平均吸收量差异显著(P<0.05)。氮最大吸收速率发生在氮浓度为50 μmol/L、氮磷比为50：1时,而磷的最大吸收速率发生在氮浓度为50 μmol/L、氮磷比为10：1时。（3）海马齿对NH4+-N的吸收速率随着NH4+-N和NO3－-N比的降低而加快,对NO3－-N的吸收速率随着NH4+-N和NO3－-N比的降低而减慢,差异显著。海马齿对TIN、PO43--P吸收速率呈折线变化趋势,TIN的吸收速率在NH4+-N/ NO3－-N为1：2处存在最大值,PO43--P的吸收速率在NH4+-N/NO3－-N为1：10处存在最大值。     

吉林省梅花鹿副结核病血清流行病学调查

摘 要：调查2012年吉林省梅花鹿副结核病感染现状,为吉林省今后制订梅花鹿副结核病预防控制规划提供科学依据。采集吉林省富有代表性的4个梅花鹿养殖地区的630份血清样本,用ELISA方法进行副结核病血清流行病学调查。吉林省梅花鹿血清中副结核分枝杆菌抗体检测阳性率为18.73%,其中,辽源的梅花鹿副结核病阳性率为25.00 %,为吉林省副结核病之首,而四平的梅花鹿副结核病的阳性率为11.86%,明显低于其他3个地区。通过对梅花鹿在年龄与性别方面进行统计学两两比较分析发现,仔鹿与育成鹿及成年鹿之间均存在显著差异(P<0.05),育成鹿与成年鹿二者之间没有统计学意义(P>0.05),而不同性别鹿群的副结核病阳性率差异性不显著(P>0.05)。吉林省梅花鹿副结核病流行不容乐观,提示广大饲养者及相关部门应该高度重视梅花鹿副结核病的防治工作。     

牦牛脾脏转移因子对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响

为了研制一种能够增强动物抗病力的生物活性免疫制剂。采用冻融-透析法提取牦牛脾脏中非特异性转移因子(nTF),并用MTT法检测牦牛TF对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响。结果表明：（淋巴细胞+ 刀豆蛋白 +TF）对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖效果优于（淋巴细胞+ TF）组和（淋巴细胞+脂多糖+TF）组,差异显著(P<0.05);注射TF组对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖的效果优于注射生理盐水对照组 (P<0.05)。牦牛脾脏转移因子对小鼠脾淋巴细胞增殖有促进作用,协同刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)对淋巴细胞增殖的效果有增强趋势。