莱克多巴胺人工抗原的合成与鉴定

用戊二酸酐将盐酸莱克多巴胺活化成莱克多巴胺-戊二酸酐半醛,用混合酸酐法将莱克多巴胺-戊二酸酐半醛与KLH和BSA偶联,合成免疫原和包被抗原,经核磁共振法和紫外吸收法鉴定,偶联成功.用紫外吸收法测定免疫原和包被抗原的偶联比分别为24：1和2.5：1.用免疫原免疫新西兰白兔,采用间接ELISA法检测抗体效价,采用间接竞争ELISA法检测IC50值,获得了效价为1：6 000以上、IC50值为10 ng/mL的多克隆抗体,证明合成的人工免疫原具有免疫原性.     

莱克多巴胺多克隆抗体的制备

采用多元酸酐法活化盐酸莱克多巴胺，用混合酸酐法将活化的莱克多巴胺与载体蛋白（KLH，BSA）偶联，制备了莱克多巴胺免疫原KLH-Rac和包被抗原BSA-Rac。以KLH-Rac免疫新西兰白兔获得了莱克多巴胺多克隆抗体，以BSA-Rac为包被抗原，采用间接ELISA检测抗血清，其效价达到1：6000，间接竞争ELISA测得抗血清的IC50值约为5ng／mL，其与克伦特罗、沙丁胺醇、特布它林的交叉反应性小于0．01％。     

莱克多巴胺检测问题探讨

莱克多巴胺(Ractopamine,Rac)是β-兴奋剂中的一员,在欧盟和我国属违禁药物。笔者经过检测实践并结合相关的文献,阐述了莱克多巴胺检测中造成酶联免疫吸附(ELISA)方法与确证方法符合率低的主要原因,并提出了解决方法和建议。     

三种ELISA法检测猪尿中莱克多巴胺的比较分析

在各种莱克多巴胺检测方法中，适合应用于大批检测样品的是ELISA方法。但目前市场上的大多数检测莱克多巴胺的试剂盒对猪尿样的检测会造成假阳性，有的假阳性率达到33.3％。本实验用三种不同厂家的试剂盒对15份猪尿样进行了检测，通过比较分析得出：对尿样的稀释可以有效的减少阳性的产生，在制备标准曲线时加入尿样背景也可以减少假阳性的产生。方法C的添加回收率在65％以上，可以比较准确的检测猪尿中的莱克多巴胺。     

检测莱克多巴胺胶体金免疫层析试验的建立

采用混合酸酐法制备莱克多巴胺-OVA偶联抗原,胶体金标记莱克多巴胺单克隆抗体,建立了检测莱克多巴胺的胶体金免疫层析试验。该试验具有较好的敏感性和特异性,最低可检测10ng/mL的莱克多巴胺,而与克伦特罗和沙丁醇胺无交叉反应。胶体金免疫层析试验对尿液和饲料样品中莱克多巴胺的最低检测量分别为10ng/mL和0.01mg/kg。     

莱克多巴胺对鼠的毒性研究

莱克多巴胺急性毒性按寇氏法测得LD50分别为大鼠：1854．81（1601．77－2147．83）mg/kg，小鼠LD50为：1829．79（1616．59－2071．09）mg/kg。根据化学物质的急性毒性分级标准，属低毒纸。采用剂量定期递增法给药测得蓄积系数K值大于5．3，根据蓄积系数评价标准为轻度蓄积。大鼠90天亚慢性试验，从精神状况、体重、采食、血液学指标和组织切片光镜检查上看，在饲料中添加20、200、2000mg/kg莱克多巴胺均无明显毒性反应。     

莱克多巴胺的检测方法

莱克多巴胺又名雷托帕明、舒喘灵、权莱克、金莱多巴、Paylean．化学成分为1-（4-羟基苯基）-2-[1-甲基-3-（4-羟基苯基）-丙氨基]-乙醇。动物生产中以RCT盐酸盐形式用作饲料添加剂,称之为盐酸莱克多巴胺（RCT·HCI）。莱克多巴胺（Ractopamine,RAC）与沙丁胺醇（Salbutamol,SAL）是苯乙胺类药物,均为中等极性的疏水性物质,呈酸碱两性。     

莱克多巴胺的检测方法

莱克多巴胺又名雷托帕明、舒喘灵、权莱克、金莱多巴、Paylean．化学成分为1-（4-羟基苯基）-2-[1-甲基-3-（4-羟基苯基）-丙氨基]-乙醇。动物生产中以RCT盐酸盐形式用作饲料添加剂，称之为盐酸莱克多巴胺（RCT·HCI）。莱克多巴胺（Ractopamine，RAC）与沙丁胺醇（Salbutamol，SAL）是苯乙胺类药物，均为中等极性的疏水性物质，呈酸碱两性。     

莱克多巴胺检测方法分析

莱克多巴胺作为瘦肉精克伦特罗的替代产品出现较晚,目前尚没有统一的检测方法.由于其具有不同于克伦特罗的代谢方式,在实际检测中经常出现假阳性及假阴性等问题,而且导致不同检测方法间结果不匹配.文章结合莱克多巴胺的代谢特点,对目前的分析检测方法进行总结,探讨不同检测方法的优缺点,并初步分析符合率低的原因,提出解决方法和建议.     

酶联免疫法检测饲料中莱克多巴胺

莱克多巴胺(Ractopamin)属于β-兴奋剂.β-兴奋剂是营养重分配剂的一种,是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物,它可加快畜禽的生长速度,降低酮体脂肪含量,提高瘦肉率.β2-兴奋剂常见的有克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇等,克伦特罗俗称"瘦肉精".随着我国对克伦特罗监管力度的加大,克伦特罗的使用逐渐减少,其他β 2-兴奋剂的使用逐渐增加.莱克多巴胺是美国最新研制出的一种β 2-兴奋剂,由于莱克多巴胺有类似于盐酸克伦特罗的作用,在动物组织中残留,可能对人体产生不利影响,所以我国农业部、卫生部和国家药品监督管理局明文禁止莱克多巴胺用于动物养殖.目前,我国还未统一监测莱克多巴胺的方法,因此,建立莱克多巴胺的快速准确的测定方法以适合市场监测十分必要.目前,国内测定β 2-兴奋剂测定的方法主要有酶联免疫法、高压液相色谱(HPLC)法及气质联用(GC-MS)法等,而酶联免疫分析技术具有检测快速(检测过程只需2 h)的特点.经试验研究,应用酶联免疫法检测莱克多巴胺,回收率可达到75%～95%,相关系数(r值)可超过0.99,而最低检测限能达到0.5ng/mL.     

莱克多巴胺残留检测方法研究进展

介绍了不同动物产品中莱克多巴胺残留检测方法的前处理方法及其差异;综述了色谱法的种类及其检测限、灵敏度、精密度,对其优缺点作了简单说明;着重对ELISA法的抗原合成方法及其对抗体质量的影响、抗体的特异性、与色谱法的相关性及检测质量等方面进行了较为详细的分析,并简单介绍了免疫传感器法.     

畜产品中莱克多巴胺残留的快速检测

莱克多巴胺属于β类肾上腺激素,因具有减脂增肉的作用而被广泛用于畜牧生产中,但在动物机体中有较大的残留时会严重威胁人类健康。检测莱克多巴胺有多种方法,而ELISA应用抗原抗体反应,能够对猪尿、猪肝中的莱克多巴胺残留快速进行检测筛选,从而有效控制瘦肉精在动物及人体的残留。     

莱克多巴胺对小鼠热敏感性的影响

目的:研究莱克多巴胺的镇痛作用.方法:以小鼠为实验对象,热刺激反应出现时间为指标.小鼠40只,体重20～40g,随机分为A、B、C、D四组,分别饮用自来水、20mg/kg、200mg/kg和2000mg/kg莱克多巴胺水溶液.结果:和对照组相比,B、C、D三组小鼠痛阈逐渐提高,说明莱克多巴胺具有镇痛作用,镇痛效果与剂量呈正相关.     

化学发光免疫分析法检测猪尿中莱克多巴胺残留

本试验运用化学发光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay,CLIA）检测猪尿中莱克多巴胺（Ractopamine,RAC）的残留。检测限为0.01 ng/mL,检测范围为0.036～32.2 ng/mL。添加浓度分别为0.1、1、10 ng/mL,平均回收率为73.2%,批内平均变异系数为9.7%,批间平均变异系数为11.3%。而本研究所建立的化学发光免疫检测方法(CLISA)可以达到检测RAC残留的要求。     

饲料中莱克多巴胺的HPLC法测定

用碱性甲醇提取试样中的莱克多巴胺,经SLA固相萃取柱净化,浓缩后用2%乙酸溶液定容,过膜后用高效液相色谱-荧光检测法分离测定;色谱柱类型Waters Svmmetry C18柱,250mm×4.6mm(i.d.),粒径5μm;流动相为戊烷磺酸钠溶液:乙腈(体积比80:20);激发波长为226nm,发射波长为306nm;流速1ml/min;进样量50μl;饲料中莱克多巴胺的检测限为0.5mg/kg;莱克多巴胺的测定在0.02-0.50μg/ml范围内具有良好的线性关系,平均回收率在85.1%以上,RSD小于7.5%;方法简单,灵敏度高,可用于饲料中莱克多巴胺的含量测定。     

化学发光直接竞争免疫分析法检测猪尿中莱克多巴胺残留

本试验研究建立了猪尿中莱克多巴胺（Ractopamine, RAC）残留的直接竞争化学发光免疫检测方法。合成了莱克多巴胺和辣根过氧化物酶的偶联物（RAC-HRP）,方法的检测限为0.09 ng/mL,空白猪尿中添加浓度为0.5、10和100 ng/mL RAC时,检测范围为0.3～157.0 ng/mL;回收率为76.3%～87.6%,批内变异系数为10.0%～12.2%,批间变异系数为14.2%～15.2%。     

新疆昌吉州畜产品莱克多巴胺残留量调查分析

采用莱克多巴胺酶联免疫快速检测试剂盒对新疆昌吉州的牛肉、羊肉、猪肉及其肝组织中莱克多巴胺残留进行调查分析,共抽检599份样本。检测结果表明,共检出3份阳性样本,检出率为0.5%。3份阳性样本均来自昌吉州各县市的农村集贸市场,昌吉州相关监督监测部门应加强对农村集贸市场的监督监测力度。     

UPLC/MS-MS测定饲料中的莱克多巴胺

利用液质联用检测方法测定饲料中莱克多巴胺,试验采用乙腈提取试样中的莱克多巴胺,用OasisMCX小柱净化,4mmol/l乙酸胺溶液:乙腈(80:20)为流动相,用PDA检测器分离测定。试验结果莱克多巴胺的检测限为1.37μg/kg,平均回收率为84.4%,最后用质谱进行确证。该方法简单,结果准确,可用于测定饲料中莱克多巴胺的含量。     

莱克多巴胺胶体金免疫层析法快速检测试纸条的研制

为研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,快速检测猪尿中莱克多巴胺（ractopamine,RAC药物残留）,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上制备胶金垫,RAC-BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装并切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明该快速检测试纸条的检测限为5 ng/mL,可在8~10 min内完成测试,肉眼即可判断,无需其他检测设备。该试纸条灵敏度、特异性、稳定性和重复性均达到临床使用要求,适用于现场快速检测和筛选工作。     

高效液相色谱法测定饲料中莱克多巴胺

本文对饲料中莱克多巴胺的高效液相色谱检测方法进行了研究,采用酸性甲醇-水提取饲料中的莱克多巴胺,用二氯甲烷和正己烷萃取净化,乙腈-水-冰乙酸-戊烷磺酸钠为流动相,反相高效液相色谱荧光检测法进行测定,激发波长226nm,发射波长305nm。方法的检测限为0.48μg/g,定量限为1.60μg/g,平均回收率为89.8%,变异系数为2.16%。