鸭肝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究

经过匀浆、正丁醇除脂、硫酸铵分级分离、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤等步骤,从鸭肝中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶,该酶纯化倍数达58．3倍,比活为337．4U／mg．经SDSPAGE和凝胶过滤测得该酶的全分子量为121．0kD,亚基分子量为60．5kD．以磷酸苯二钠为底物,测得该酶的最适pH为9．0,最适温度为40℃．Na^＋、K^＋、Li^＋等一价离子对该酶活性基本无影响,Mg^2＋、Mn^2＋对该酶活性有激活作用,Cd^2＋对该酶活性有抑制作用．米氏常数Km为1．28mmol／L．     

鸭肝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究

经过匀浆、正丁醇除脂、硫酸铵分级分离、 DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换柱层析、 Sephacryl S-200 凝胶过滤等步骤, 从鸭肝中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶, 该酶纯化倍数达58.3倍, 比活为337.4 U/mg. 经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的全分子量为121.0 kD, 亚基分子量为60.5 kD. 以磷酸苯二钠为底物, 测得该酶的最适pH为9.0, 最适温度为40 ℃. Na 、 K 、 Li 等一价离子对该酶活性基本无影响, Mg2 、 Mn2 对该酶活性有激活作用, Cd2 对该酶活性有抑制作用. 米氏常数Km为1.28 mmol/L.     

番鸭小肠碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

分离纯化番鸭小肠中碱性磷酸酶,并对其酶促动力学性质进行研究.结果表明:该酶催化磷酸苯二钠水解反应时最适温度为45℃,最适pH为9.72,米氏常数(Km)为4.76 mmol.L-1.Mg2+对碱性磷酸酶活性有明显激活作用;Cd2+浓度小于0.4 mg.L-1时对碱性磷酸酶有激活作用,而浓度高于0.4 mg.L-1时则有抑制作用;Cu2+对碱性磷酸酶活性有明显抑制作用.     

鸡肝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质的研究

经过匀浆、正丁醇处理、硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素离子交换柱层析、SephadexG-75凝胶过滤等步骤,从鸡肝中部分纯化了碱性磷酸酶。以对硝基苯磷酸二钠(PNPP)为底物,测得该酶的最适pH为10.5,最适温度为40℃,Km=0.521mmol·L-1。甲醇、乙二醇与丙三醇均对其活性有不同程度的抑制作用。     

湿地围垦对土壤碱性磷酸酶动力学特征的影响

  目的  酶促反应动力学是揭示土壤养分转化的重要手段。探究围垦对土壤磷素转化及有效性的影响,以期为湿地养分转化效率及质量提升提供理论依据。  方法  采集洪泽湖河湖交汇区(光滩、芦苇Phragmites communis、杨树Populus和稻田)和崇明东滩湿地(光滩、互花米草Spartina alterniflora、芦苇和麦田)等不同覆被或土地利用方式的8种土壤,以碱性磷酸酶(ALP)为例,研究湿地围垦对酶促反应动力学特征的影响。采用单因素方差分析法比较不同土地利用下土壤ALP动力学参数的差异,并结合冗余分析探究土壤理化性质与动力学参数的相关性。  结果  洪泽湖湿地,无论是光滩自然演变为芦苇湿地,还是围垦芦苇湿地为杨树人工林或稻田,ALP动力学参数最大反应速率(V_max)和米氏常数(K_m)均增大,V_max增加13.0%~313.4%,K_m增加21.0%~50.8%。但酶的催化效率(V_max/K_m)在自然演替过程中下降25.0%,人为围垦利用后增大2.3倍。对崇明东滩湿地而言,光滩演变为芦苇湿地后,V_max和K_m分别增大7.0和6.2倍,V_max/K_m增大11.1%;芦苇湿地转变为麦田后,V_max、K_m和V_max/K_m分别减少54.8%、47.0%和13.3%。冗余分析结果显示:V_max/K_m与全氮(洪泽湖)和有机碳(崇明东滩)为正相关关系。  结论  光滩自然演变为芦苇湿地过程中,尽管ALP的总量增加,但酶与底物亲和力下降。围垦后的土地利用类型及管理方式可能对ALP的V_max/K_m产生显著影响。无论自然覆被还是围垦后的土地利用类型,提高土壤全氮和有机碳质量分数有利于ALP催化效率的提升。图1表3参43     

软化病感染家蚕的碱性磷酸酶活力测定及病理学研究

为了研究感染软化病的家蚕碱性磷酸(ALKP)的活力并研究酶组织病理学,通过ALKP活力测定证实感染黑胸败血病的软化病家蚕ALKP,活力变化的规律与正常家蚕相似而单位更低．石蜡切片显示感病家蚕丝腺组织内充满丝胶类物质,家蚕吐丝结茧受阻．用冰冻切片法以ALKP反应底物对病蚕的丝腺组织进行活性测定,显示出感病家蚕的丝腺内外膜均呈现较强的酶反应,暗示了膜上活跃的磷酸转运系统．而脂肪体内的某些部位也呈现出点状深着色,证明脂肪体内含有ALKP,合成组织．     

黑白花奶公犊部分脏器碱性磷酸酶同工酶性质研究

采用正丁醇抽提、高速离心、SephadexG-100凝胶层析及 DEAE-纤维素离子交换柱层析等方法,从犊牛的肝、肾、骨、小肠等脏器中提纯了碱性磷酸酶[Alkaline phasphatase,AKP,EC 3·1·3·1).达到 PAGE 纯.并对各脏器来源 AKP 同工酶的部分性质进行了研究,发现 AKP 同工酶间在电泳迁移率、热敏感及对抑制剂脲的敏感性方面均有明显差异.可用于判别 AKP 的组织来源。而通常被认为是器官特异性抑制剂的 L-亮氨酸及 L-苯丙氨酸在低浓度时对各脏器来源的 AKP 均无显著影响.与文献报道不同,推测氨基酸对 AKP 活性的影响可能存在种属差异.     

罗非鱼碱性磷酸酶的化学修饰

采用PMSF、PCMB、NBS、TNBS、SUAN、DTT、IAc、BrAc等化学修饰剂在一定的条件下选择性修饰罗非鱼ALP,研究罗非鱼ALP分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系.结果表明:PMSF、NBS等两种化学修饰剂能显著抑制酶的活力,而PCMB、TNBS、SUAN、DTT、IAc、BrAc等对酶的活力影响不大.说明对丝氨酸残基、色氨酸残基的化学修饰后对酶的活力影响很大,而酶分子中的其他功能基团不在酶的活性中心,修饰后对酶的活力影响不大.     

一株产碱性蛋白酶的酵母菌发酵条件优化

对一株产碱性蛋白酶假丝酵母菌(Candidasp.N9211)的发酵条件进行了优化,研究各种碳源、氮源及无机盐对产酶的影响,应用正交试验优化发酵培养基组成。结果表明:最佳培养基组成为酵母膏20g/L,蛋白胨15g/L,干酪素20g/L,硫酸亚铁0.01g/L。优化后蛋白酶活性提高了27倍(由1.55U/mL提高到41.85U/mL)。摇瓶培养的最佳条件为:初始pH值10.0,接种量1%,发酵温度35℃,最佳培养时间为15h。     

镜鲤碱性磷酸酶和酸性磷酸酶QTL 定位分析

磷酸酶普遍存在于动物的各组织中,对磷酸单酯键具有水解活性,是机体生长代谢、保持内环境稳定和维持机体健康所必需的酶。以镜鲤(Cyprinus carpio L.)全同胞家系190个个体为材料,用992对微卫星(SSR)标记进行基因组扫描,采用区间作图法,对肠组织的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶进行了QTL定位分析。QTL检测显示:5个QTL区间与酸性磷酸酶活性相关,其中3个QTL为99%染色体水平显著性,分别位于LG2(CA2049-CA2371)、LG25(HLJ2941-HLJ3946)和LG28(CA2263-HLJ2873),另外两个QTL区间为95%染色体水平显著性,位于LG14(HLJ3275-CA174)和LG14(CA1276-CA2208),解释表形变异率范围为8.1%～38.9%;2个与碱性磷酸酶相关的QTL区间均为95%染色体水平显著性,分别位于LG8和LG13,可解释变异率分别为7.3%和7.0%。     

旱农区梯田土壤碱性磷酸酶活性及其相关因素分析

对旱农区同一坡度不同层位梯田的土壤碱性磷酸酶活性变化及其相关因素进行了分析 ,结果表明 ,从梯田顶部到基部 ,其土壤中有机质、水解氮、有效磷、碱性磷酸酶活性和呼吸强度都存在着一定的空间差异 ,从上到下依次为 :呼吸强度 >有机质 >水解氮 >碱性磷酸酶活性 >有效磷 ,且有机质、水解氮、碱性磷酸酶活性及呼吸强度由坡顶到坡底均逐渐增加 ,有效磷增加不明显 ;碱性磷酸酶活性与水解氮、有效磷间的相关性达到极显著水平     

卵黄免疫球蛋白配基亲和纯化碱性磷酸酶

 以卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin　yolk,IgY)为配基,对小牛肠组织来源的碱性磷酸酶进行免疫亲和纯化。采用1.5mol·L-1的NaCl进行洗脱,可使酶的纯化倍数达到64倍,活力回收率达到90%。IgY抗体对碱性磷酸酶亲和力的测定结果显示固有亲和力和相对亲和力分别为6.275×10-7　mol·L-1和5.0 μg·ml-1。     

磁小体的碱性磷酸酶活性分析

为测定磁小体的碱性磷酸酶活性及作为磁性免疫ELISA固相载体的可行性,设置不同显色时间、温度及pH条件,分析比较磁小体与商业化碱性磷酸酶的酶活。结果表明:商业化碱性磷酸酶显色时间较短,非常灵敏,但对温度和pH要求严格;微量的磁小体,需经过较长的显色时间,才能使显色剂显色,但温度和pH对磁小体的显色反应影响较小。通过不同的蛋白变性剂进行处理,表明磁小体的类碱性磷酸酶活性是其表面蛋白作用的结果。但磁小体微弱的显色能力,在磁性免疫ELISA检测时,没有显著影响。因此,磁小体可作为磁性免疫ELISA的固相载体,用于免疫检测。     

脂肪酶中具有壳聚糖降解活力酶组分的性质研究

[目的]为酶法降解壳聚糖提供科学依据。[方法]从脂肪酶中分离具壳聚糖降解活力的电泳纯酶,研究pH值、温度和金属离子对壳聚糖酶活力的影响,并分析了该酶的pH值稳定性、热稳定性和底物特异性。[结果]该酶降解壳聚糖的最适pH值为4.5,最适温度为60℃。Ni2+、Co2+和Mn2+对酶活具有明显的激活作用,而Fe3+、Pb2+和Hg2+则强烈抑制酶的活力。该酶对脱乙酰度为73%~82%的壳聚糖具有较高的水解活性,而对脱乙酰度为64%和90%的壳聚糖水解活力较低。[结论]该酶在pH值为5~9范围内和60℃以下都具有较好的稳定性。     

脲对麦芽酸性磷酸酶活力与构象的影响

应用荧光光谱、紫外差光谱等检测手段研究麦芽酸性磷酸酶经脲变性后的分子构象与活力的变化情况,结果表明,低浓度的脲(＜2 mol/L)微扰了酶的活性部位而使其局部构象发生变化,使酶的荧光强度略有下降,荧光发射峰位红移,酶活力下降.继续增大脲浓度,酶的整体构象被破坏,酶荧光强度增加,发射峰位红移,酶活力仍然呈下降趋势.荧光强度的增加和最大发射峰位的红移是酶变性失活的一个指标,酶活力的变化快于酶分子整体构象的变化,说明麦芽酸性磷酸酶的活性部位位于柔性较大的区域.     

不同价态砷的土壤碱性磷酸酶效应研究

【目的】砷是土壤污染的主要元素之一,研究As5+、As3+单一和复合污染对土壤碱性磷酸酶活性的影响,揭示其对土壤碱性磷酸酶的作用机理,为砷污染监测提供理论依据。【方法】采集江西鹰潭红壤、陕西榆林风沙土、陕西杨凌土娄土各2个肥力水平的土样为供试土壤,采用室内模拟法,研究不同含量As5+、As3+以及二者复合污染下供试土壤碱性磷酸酶活性的变化。【结果】As5+和As5++As3+均能抑制土壤碱性磷酸酶活性,随As5+和As5++As3+含量的增加,相对碱性磷酸酶活性持续减小;采用模型E=A/(1+B×C)可较好表征相对碱性磷酸酶活性(E)与砷含量(C)间的关系(A、B为参数),揭示出土壤碱性磷酸酶活性可作为表征土壤As5+和As5++As3+污染程度的监测指标,且As5+和As5++As3+对碱性磷酸酶活性的作用机理为完全抑制作用(包括竞争性抑制和非竞争性抑制)。As3+对土壤相对碱性磷酸酶活性影响较小。As5+与As3+之间存在一定的交互作用,除了低肥力水平红壤及土娄土中As5+和As3+含量均小于50mg/kg时二者表现为协同作用外,在其他供试土壤中均为拮抗作用。不同供试土壤As5+的生态剂量ED10和ED50差异较大,砷对土壤造成轻度污染的含量为25mg/kg。【结论】土壤碱性磷酸酶可作为土壤As5+及As5+与As3+复合污染程度的监测指标。     

绍兴鸭与高邮鸭碱性磷酸酶多态性的比较

随机选取正常发育的30日龄绍兴母鸭和高邮母鸭各60羽,采集血液样本,置斜面上析出血清,采用聚丙烯酰胺垂直平板不连续电泳分离碱性磷酸酶。在计算机上进行条带分析并计算各泳道相对扫描灰度。结果表明：①在碱性磷酸酶电泳谱ALP-2位点上所检测的两品种鸭群中,未发现有带类型．即仅含有Alp-2。基因;②从60例30日龄绍兴鸭和高邮鸭血清样本中,在ALP-1位点上观察到F型（快带型）和S型（慢带型）2种碱性磷酸酶同功酶表现型,表现出明显的多态性;②在ALP-1位点上,高邮鸭碱性磷酸酶S型（慢带型）出现的频率显著高于绍兴鸭,但两品种鸭的基因频率（Alp和alp）无显著差异,ALP-1位点上高邮鸭基因杂合度为0．4118,绍兴鸭为0．5228;④另选取30、60、100、160日龄绍兴母鸭和高邮母鸭各32羽,取血清,聚丙烯酰胺垂直平板不连续电泳,发现其各日龄表现型和基因频率无明显变化,但其扫描灰度随日龄的增长而减弱,显示碱性磷酸酶活性随日龄的增长而下降。