抗兔出血症病毒单克隆抗体的应用

采用抗兔出血症病毒的单克隆抗体对来自全国不同地区的12株兔出血症病毒分别进行了血凝抑制(HI)试验,HI 效价达1:100×2~7～1:100×2~9.结果说明,该单抗对这12株病毒都能抑制其血凝现象.应用该单抗制备的荧光抗体检测了兔出血症病毒在感染兔体内主要脏器组织的分布动态。结果提示,该病毒在细胞核内增殖。经消化道感染兔时,病毒首先在入侵局部肠道粘膜内增殖。然后再侵入肝脏和脾脏。大量病毒生成后,又侵入其它的器官组织,病兔处于病毒血症状态。     

兔病毒性出血症病毒在兔体内分布情况的研究

兔病毒性出血症(RVHD)是由兔瘟病毒引起的一种急性败血传染病。该病自1984年2月在江苏无锡地区首次发现以来,人们作了大量的研究工作,但动态地研究该病病毒在体内的分布情况报道还较少。为此,本试验利用血凝(HA)、血凝抑制(HI)和SPA协同凝集试验动态系统地测出各组织器官的病毒滴度,探讨免病毒出血症的发病机理,进一步为本病的诊断提供依据。     

兔病毒性出血症抗血清的制备及效价测定

本试验采用兔病毒性出血症灭活疫苗、兔病毒性出血症灭活疫苗和兔病毒性出血症病毒强毒两种不同的免疫程序来免疫家兔．采用血凝及血凝抑制试验检测血清的抗体效价。结果表明：经3次免疫后,疫苗免疫程序组免疫家兔的抗血清平均效价为9log2,未免疫家兔的抗体平均效价为2log2。     

兔出血症病毒接种幼年兔及乳兔的人工感染试验

用兔出血症病毒人工接种一月龄与二月龄幼年仔兔，结果证实兔出血症病毒亦能感染并致死幼年仔兔，但感染类型与青成年兔的典型兔出血症不同，主要特征有病程延长，血凝价低或无血凝和黄疸肝炎等等。用兔出血症病毒特异性单克隆抗体建立的ＥＬＩＳＡ试验及反向间接血凝试验自血凝试验阴性的幼年兔各脏器均能检测到兔出血症病毒。人工感染乳兔虽未致临床病症，但扑杀检查见有坏死性肝炎病变和轻度肾小球性肾炎，且自肝肾等血凝检测阴性的病科中，用ＥＬＩＳＡ试验及细胞培养均可检测和分离到病毒。研究结果表明，血凝阴性并不能排除非典型兔病毒性出血症感染。     

兔瘟蜂胶组织灭活苗的研制及免疫效果观察

采用人工感染兔瘟(兔病毒性出血症)病毒致死的兔的脏器(主要是肝)，制成10％的兔瘟组织灭活苗和10％的兔瘟蜂胶组织灭活苗。采用常规血凝抑制实验，初步分析比较了注射兔瘟组织灭活苗和兔瘟蜂胶组织灭活苗后兔体内抗体水平的消长情况。结果表明：兔瘟蜂胶组织灭活苗能明显提高抗体效价，增强免疫效果。     

兔出血症病毒ZB株的分离与鉴定

为确定发病兔场兔的死亡病因并对其病原进行鉴定分析,经临床诊断、病理剖检、病毒分离、纯净性检测、血凝性检测、致病性试验、特异性试验、免疫原性试验以及qPCR和测序鉴定,用病死兔病料组织接种健康易感家兔,成功分离到1株兔出血症病毒。分离株病毒不含细菌、霉菌、支原体;对人"O"型红细泡的血凝效价为1∶1024;分离株病毒能够使健康易感兔在96h内全部死亡兔病毒性出血症;兔出血症病毒阳性血清对分离株病毒具有中和作用;用分离株病毒制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性;分离株病毒通过qPCR测序鉴定为RHDV毒株。     

分泌抗兔出血症病毒单抗杂交瘤细胞株的建立

以纯化的兔出血症病毒免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，应用杂交瘤技术获得了分泌抗ＲＨＤＶ单抗杂交瘤细胞１７株，其中有３株杂交瘤细胞分泌单抗的ＥＬＩＳＡ效价为１：４０９６００，１：４０９６；５株单抗具有血凝抑制活性。兔抗ＲＨＤＶ高兔血清对１７株ＭｃＡｂ的ＥＬＩＳＡ抑株为ＩｇＧ２ｂ。各株ＭｃＡｂ与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应，也无沉淀反应特性。     

新剂型兔瘟疫苗的研究

经血凝抑制和攻毒试验结果表明，在含有相同抗原量制备的疫苗，兔瘟油乳剂灭活疫苗比兔瘟组织灭活苗免疫后血清ＨＩ抗体效价高３．２５￣６．０ｌｏｇ２，即使油乳剂灭活疫苗仅为组织灭活苗四分之一的抗原量，免疫后血清ＨＩ抗体效价还高１ｌｏｇ２。油乳剂灭活苗免疫兔第５０天其血清ＨＩ抗体未见下降，而组织灭活苗免疫后第２６天已开始下降。虽然接种二种剂型的疫苗攻毒后均具有１００％的保护率，但血清ＨＩ抗体效价消长情况证明     

兔病毒性出血症病毒保藏及其对疫苗效果的研究

将不同地区收集到的8株兔病毒性出血症典型病料，放在－30℃低温冰箱中分别保藏5年和10年，保藏期满后取样检测血凝效价，并用保藏5年的RHDV病料和2001年活化增殖的新鲜病料分别制成病毒疫苗。试验结果表明RHDV以病料形式（主要是肝、肺等脏器）保藏，在－30℃低温冰箱中，经5年后，病毒血凝效价稳定不变，保藏10年后总下降率为25％，但病毒效价仍大于2560，可用于疫苗生产，说明该商毒在上述条件下保藏5－10年病毒是比较稳定的，不同保藏年限的病料批量生产疫苗，安全性和免疫保护率均达到100％。     

兔瘟脏器病变与病毒血凝价比较研究

兔瘟脏器病变与病毒血凝价比较研究安徽省农业科学院２３００３１吴世义兔瘟病毒对家兔的各器官组织的嗜性不同，因而病毒在兔体各脏器内的分布密度也就不尽相同。笔者对人工接种兔瘟病毒后急性死亡家兔的主要内脏器官进行了大体病理剖检，并用红细胞凝集试验对各种脏器进...     

兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验替代方法研究

为了采用血凝抑制(HI)试验方法替代兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验的免疫攻毒方法,试验在制备了HI试验用兔出血症病毒血凝(HA)抗原、阳性血清、阴性血清的基础上,研究了免疫攻毒保护与免疫血清HI效价之间的平行关系,并进行了替代方法的应用。结果表明,当免疫血清HI效价不低于1∶32时,两种方法的检验结果符合率为100%,证明了该替代方法的可行性,也为下一步修订兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验方法提供了数据支持。     

兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果

用RT—PCR方法扩增兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白VP60基因,通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid—VP60,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV—Bac—VP60,经RT—PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blotting、HA和HI鉴定,结果显示重组VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达。在不加任何佐剂的情况下,用表达的蛋白免疫3月龄非RHD免疫兔,结果显示,免疫后21天,兔体内可产生抗RHDV抗体,抗体血凝抑制效价为2^6～2^7,该抗体可以抵抗血凝效价为2^10致死剂量RHDV强毒的攻击,本研究为兔病毒性出血症基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

一株兔瘟病毒野毒株的分离与鉴定

为了对南部县某兔场疑似兔出血症病毒(RHDV)NB毒株进行鉴定,试验采用血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验、家兔接种试验、家兔免疫攻毒试验、VP60基因的同源性比对。结果显示:NB毒株能凝集人"O"型红细胞,HA效价为12 log2,其血凝性能被RHDV疫苗毒株AV33株的抗血清抑制;NB毒株注射健康非免家兔,家兔在48h内死亡,具有典型的兔病毒性出血症(RHD)的临床症状和病理变化;RHDV(AV33)组织灭活疫苗免疫家兔后,家兔能抵抗NB毒株的攻击;NB毒株与AV33毒株的VP60基因同源性为96.12%,氨基酸序列同源性为97.59%。     

分泌抗兔出血症病毒单抗杂交瘤细胞株的建立

以纯化的兔出血症病毒(RHDV)免疫BALB/C鼠,应用杂交瘤技术获的了分泌抗RHDV单抗(McAb)杂交瘤细胞17诛。其中有3株杂交瘤细胞分泌单抗的ELISA效价为1:409600(腹水)、1:4096(上清);5株单抗具有血凝抑制活性。兔抗RHDV高免血清对17株McAb的ELISA抑制率都大于90％。5株McAb亚类为IgG_1,8株为IgG_20,4株为IgG_20。各株McAb与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应,也无沉淀反应特性。     

兔瘟及其防制

兔瘟又称兔病毒性出血症、兔坏死性肝炎、兔X病、兔出血性肺炎等(均属暂定名),是一种由病毒引起的急性败血性传染病。主要病变为气管及肺出血,并伴以其它实质器官的淤血和肿大,常呈爆发性流行,发病率及死亡率极高,常达95％以上。病毒存在于病兔所有组织器官、体液、分泌物及排泄物中。     

兔出血症病毒和兔细小病毒血清学关系的比较研究

为了检测兔出血症病毒和兔细小病毒的血清学关系,我们采用日本兔细小病毒(LPV)兔源抗血清和豚鼠源抗血清,分别与我国不同地区分离的8株兔出血症病毒(RHDV)抗原作常规血凝抑制试验(HIT)和间接血凝试验(IHA),结果兔细小病     

三峡库区兔病毒性出血症流行情况调查

为了调查三峡库区兔病毒性出血症(RHD)的流行情况,在三峡库区的开县、石柱县、渝北区等养兔示范县调查20个兔场,采集疑似RHD病料32份。采用血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)对病料进行检测。结果表明HA试验检测到4株兔病毒性出血症病毒(RHDV),阳性率为12.5%,HA效价为8~12 lb;这4株RHDV血凝性都能被RHDV疫苗毒株(AV33)的抗血清抑制。在RHD疫苗普免的情况下,目前库区虽然没有RHD的大流行,但仍然存在RHD的散发,应引起兽医防疫部门和养兔场的高度重视。     

兔病毒性出血症病毒高免血清的制备与应用效果

以兔病毒性出血症病毒组织灭活疫苗免疫家兔，经五次免疫之后，抗体效价可达12log2以上，采集兔血清，以此治疗攻毒兔，结果大部分兔都存活，临床应用效果表明：以此血清治疗自然感染兔病毒性出血症病毒的发病兔，治愈率达80％以上。     

应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测兔出血症病毒

应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）,检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明,感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的检出率为１００％,淋巴结和肌肉的检出率分别为９７．５％和７９．５％。ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ能检出肌肉中血凝试验不能检出的ＲＨＤＶ抗原。此外,还用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了肝毒人工感染兔血中ＲＨＤＶ的动态,并对１０份兔出血症脏器灭活苗的效价作了滴定。     

单层细胞培养对兔瘟病毒血凝价影响的观察

研究利用ＭＡ１０４、Ｌ９２９、ＲＫ三株传代细胞，对接种有相同剂量兔瘟病毒材料的有单层细胞和无单层细胞维持液中兔瘟病毒血凝价进行了观测。结果表明，有单层细胞的维持液中病毒血凝价较无单层细胞维持液中病毒血凝价下降缓慢。这说明此三株传代细胞能延缓维持液中兔瘟病毒血凝价的下降。