猪传染性胃肠炎病毒S基因核酸疫苗免疫小鼠免疫器官病理组织学变化的研究

本实验对TGEVS基因核酸疫苗免疫后免疫器官的变化进行了研究,同时比较了两种核酸疫苗单独免疫小鼠后免疫器官的变化,证明重组核酸疫苗诱导小鼠产生免疫应答。     

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因核酸疫苗的构建及其免疫效力

利用DNA重组技术，将编码猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）TH-98株的全长S基因和主要抗原位点的Sa片段分别插入真核表达载体pCI的多克隆位点中。应用酶切、PCR方法鉴定阳性重组子pCI—Sa和pCI—S。将昆明鼠随机分成A、B、C3组（A组为pCI—Sa免疫组、B组为pCI-S免疫组、C组为pCI栽体对照组），每组35只，每只鼠肌肉注射100μg，免疫3次，每次间隔2周。于初次免疫后第0、14、21、28、35、42d采血，用ELISA检测血清抗体动态变化，流式细胞仪检测外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞数量变化。结果表明，重组真核表达栽体均能诱导免疫鼠产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答，而且pCI—Sa的免疫效果优于pCI-S。     

猪传染性胃肠炎病毒S、N基因核酸疫苗的构建与免疫原性试验

采用RT-PCR扩增TGEV SC-H株S基因5′端主要抗原位点编码区和全长N基因,将其插入真核表达载体pVAX1,构建单独与嵌合表达S、N基因的pVAX-S、pVAX-N、pVAX-S-N 3种重组质粒。通过脂质体将重组质粒体外转染COS-7细胞,利用间接免疫荧光检测目的基因的表达情况。将6周龄NIH小鼠随机分为5组,分别于腿部肌肉注射重组质粒pVAX、pVAX-S、pVAX-S-N、pVAX-S+pVAX-N与pVAX-S+pVAX,共免疫3次,间隔2周。通过间接ELISA以及流式细胞仪分别检测免疫小鼠血清中特异性TGEV IgG抗体和外周血T淋巴细胞亚群数量。结果显示,重组质粒构建正确且在COS-7细胞中得以表达;pVAX-S+pVAX-N质粒混合免疫组与pVAX-S+pVAX质粒混合免疫对照组相比,可有效提高免疫小鼠外周血T淋巴细胞亚群数量和血清中特异性抗体水平的增加,而pVAX-S-N免疫组与pVAX-S组比较,未能起到提高免疫小鼠血清中特异性抗体水平的和外周血T淋巴细胞亚群数量作用。以上结果表明S、N基因的联合应用可有效加强TGEV核酸疫苗的免疫效力,但这种增强作用与S、N基因联合应用的方式直接相...     

猪传染性胃肠炎病毒核酸免疫昆明鼠的抗体应答

以猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TH98株N基因的重组质粒pHN为模板，Li-15和Li-2为上、下游引物扩增出TGEVTH98／N基因。将N基因与真核表达载体pcDNA3．1( )分别用BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后连接，构建了重组真核表达载体pcDNA—N。将昆明鼠随机分为2组，分别肌肉注射pcDNA—N和pcDNA3．1( )，每只鼠100μg，共免疫3次，每次间隔2周。首次免疫后第0、14、21、28、35、39、47和54d采血分离血清，采用ELISA检测抗体动态变化。注射pcDNA—N组小鼠在首次免疫后第39d检测到针对TGEVN蛋白的阳性抗体。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因在昆虫细胞中的表达

为获得具有天然活性的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组S蛋白,制备针对猪传染性胃肠炎S蛋白A、D抗原位点的单克隆抗体及建立快速抗体检测方法,本研究将TGEV S基因A、D抗原位点经PCR扩增并克隆入p Fast Bac HBM-TOPO载体,经转座、转染后获得重组杆状病毒,并对重组杆状病毒进行间接免疫荧光(IFA)及Western blot分析,结果显示,TGEV S基因A、D抗原位点在杆状病毒中成功表达,其表达产物为TGE诊断试剂的制备、基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

猪传染性胃肠炎病毒主要抗原基因S与M双基因共表达载体的构建

研究如何提高猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）中主要抗原基因S与M对猪传染性胃肠炎的免疫调节作用,进一步探究基因疫苗的有效开发途径。方法：通过两种方法应用牛β-酪蛋白启动子构建TGEV的S和M融合基因表达载体以及构建IRES连接M和S双顺反子共表达核酸疫苗载体。结果成功构建好M和S融合基因表达载体及IRES连接的M和S双顺反子真核共表达载体,并为利用乳腺生物反应器生产可食性疫苗提供有效措施。     

猪传染性胃肠炎病毒疫苗株S基因的克隆及其与流行株的比对分析

[目的] 分析猪传染性胃肠炎病毒（porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV）疫苗株和流行株S基因的遗传变异特征。[方法] 利用RT-PCR方法对国内目前广泛使用的TGEV疫苗株A、B、C的S基因进行克隆并测序,将获得的序列与近年来公开发表的分离自不同地区的TGEV 毒株S基因序列进行比对分析;选取NCBI中登录号为AF104420.1-Britain、AY587882.1-Nanjing、DQ811786.2-America、EU074218.2-Harbin、FJ755618.2-Harbin、JQ700304-fuzhou、KC609371.1-Shanghai、KX900411.1-United States、M94099.1-Spain和MK272773.1-Fushun 的TGEV 流行株S基因序列,与疫苗株A、B、C的S基因序列一起,利用MegAlign软件进行比对分析。[结果] 疫苗株A、B、C的S基因序列两两间的同源性均在96.7%以上;疫苗株A、B、C的S基因序列与NCBI中流行株S基因序列的同源性分别在94.43%~99.82%、95.30%~99.64%、93.48%~98.38%;由遗传进化树可知,疫苗株A、C与国外流行株M94099.1-Spain在同一分支上,疫苗株B与国内流行株JQ700304-fuzhou在另一分支上。[结论] TGEV疫苗株的S基因与流行株同源性较高,变异性不大。     

RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究

根据GenBank发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突蛋白S基因的5′端核酸序列设计了1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为690bp。在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了TGEV的RT-PCR检测方法。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因重组腺病毒的构建及特性研究

将克隆的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）全长S基因插入pAdTrack—CMV穿梭质粒中，形成的转移质粒pAdTrack—CMV／S线性化后，用pAdEasy^TM系统电转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠埃希氏菌BJ5183，经同源重组，构建了含有全S基因的重组腺病毒载体，经酶切充分暴露反向末端重复序列后，与脂质体混合转染AD-293细胞，成功获得了AD-S复制缺陷型腺病毒，经检测证实，AD-S稳定性好，安全性高。转录水平检测证实，S基因得到了转录；荧光检测发现，外源蛋白已得到表达。     

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因的克隆与同源性比较

用猪睾丸 (Swine testicle,ST)细胞繁殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒国内分离株 TH- 98,根据 Gen Bank中已发表的TGEV S基因 c DNA序列 ,利用 Oligo4.1程序软件设计并合成两对引物 ,进行逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR) ,扩增出2 .3kb和 2 .1kb两个片段 ,分别命名为 Sa与 Sb,先后插入到 p UC18质粒载体上的 Eco RI和 Pst I多克隆位点上 ,构建了重组质粒 p UC- S。根据 TGEV S基因位点和 p UC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式 PCR方法进行鉴定、分析 ,证明克隆的 p UC- S为 TGEV S基因。同时对 p U C- S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的五个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 ,证明了 S基因的高度保守性     

犬细小病毒核酸疫苗制备及免疫试验

以犬细小病毒基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增了全长VP1基因,PCR产物经纯化和NotⅠ/BamHⅠ双酶切后与同样处理的真核表达载体pIRES进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选了真核重组表达质粒pIRESVP1,并进行了序列测定。对6只9月龄犬分别接种不同剂量的pIRESVP1或空载体质粒及生理盐水,8周接种1次,每次接种前采血,测定血清的血凝抑制抗体效价,第2次免疫后即可检测到较高的血清效价。在第3次接种4周后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7天及第14天时采血,测定血清的血凝抑制抗体效价。所有接种pIRESVP1疫苗的犬均能抵抗CPV强毒的攻击,而接种空载体质粒和生理盐水的对照犬则全部发病。证明所构建的核酸疫苗(pIRESVP1)能使犬免受犬细小病毒强毒的感染。     

家禽核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗是当今疫苗研究的最前沿领域，本文就核酸疫苗在家禽传染病中的应用做一综述。     

动物核酸疫苗研究进展

核酸疫苗又称为基因疫苗、DNA疫苗,是20世纪90年代初从基因治疗研究领域发展起来的一种全新疫苗,具有能够激发机体体液和细胞免疫反应、不散毒、便于储存和运输等优点,是近年来研究的一个热点。抗原编码基因的选择、质粒的构建(包括启动子和增强子以及内含子的选择)、各种佐剂的应用以及疫苗接种方法和途径等因素可以提高和改变DNA疫苗的免疫效果与反应类型,已经有很多研究试图通过改变这些因素来提高DNA疫苗的免疫效果,为研制出高效实用的DNA疫苗提供了许多新思路。重要动物传染病包括流感、鸡新城疫、口蹄疫等的核酸疫苗得到了较深入研究,为其他疾病核酸疫苗的研究提供了有价值的参考。     

核酸疫苗研究进展

核酸疫苗是当今研究的前沿领域 ,与传统疫苗相比具有很多优点 ,被誉为第 3代疫苗革命。文章就核酸免疫的发展、特点、免疫机理、安全性问题、影响核酸疫苗免疫效果的主要因素、核酸免疫方法及应用前景做一综述     

核酸疫苗的应用研究进展

核酸疫苗不仅引起体液免疫反应,而且诱导高水平的细胞免疫应答,尤其是细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,被认为在病毒、胞内菌、寄生虫等病原体感染的防治中具有更大的优势。核酸疫苗作为近年来发展起来的一项新的生物技术,已经成为疫苗研究领域的热点之一,并获得了迅速的发展。实验结果表明,核酸疫苗既可作为病毒、细菌或寄生虫的预防疫苗,也可作为非感染性疾病如肿瘤病的治疗用疫苗。通过介绍近年来核酸疫苗在病毒、细菌、寄生虫等感染性疾病的预防和治疗等领域的研究进展情况,表明随着分子生物技术的不断发展,核酸疫苗的进一步研究和实践为改善人类和动物健康显示出新的希望。     

核酸疫苗上游生产工艺探讨

核酸疫苗为科研人员在疾病预防控制方面开辟了新的途径，然而目前大规模制备既符合相关质量要求，又经济的重组质粒 DNA，特别是药品级重组质粒 DNA，仍是制约核酸疫苗和基因治疗研究的瓶颈。如何获得合格的药用质粒 DNA 并建立大规模生产平台成为一个重要的研究课题，论文综述了近年来核酸疫苗上游生产工艺的技术进展，以供参考。     

动物核酸疫苗的研究现状及发展前景

核酸疫苗是近年来备受人们关注的一种新型疫苗。核酸疫苗以其特有的可诱导机体产生全面的免疫应答,对不同亚型的病原体具有交叉防御作用,以及安全、可靠、生产方便等优点被称之为“疫苗的第三次革命”。核酸疫苗由编码能引起保护性免疫反应的病原体抗原的基因片段和载体构建而成,包括DNA疫苗和RNA疫苗,目前研究较多的是DNA疫苗。DNA疫苗是指含有编码抗原基因的真核表达质粒DNA,经直接接种体内后,可被体细胞摄取,并转录、翻译、表达出相应的抗原,然后通过不同途径刺激机体产生针对此种抗原的应答。作者简单介绍了动物核酸疫苗的特点、免疫机制、免疫影响因素及在畜禽传染病中的应用,此外还分析了核酸疫苗的发展前景等问题,从而为核酸疫苗的发展提供了新思路和新途径。     

核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗是20世纪90年代发展起来的一种新型疫苗，它应用现代生物工程技术和分子生物学技术，克服了传统疫苗所存在的一些缺陷，具有传统疫苗不可比拟的优点，已成为国内外科技界争相研究的热点之一，呈现出良好的发展势头和应用前景。本文对核酸疫苗的研究概况、核酸疫苗的组成与制备、作用机理及安全性等问题进行了综述。从而使读者了解国内外该方面的研究动态，掌握最新的研究动态和方法、拓宽研究思路。也可以启发使用者发现问题和提出问题，进而使研究人员寻求新的研究方向。     

犬细小病毒核酸疫苗、重组活载体疫苗与弱毒疫苗免疫犬实验研究

分别用犬细小病毒（CPV）核酸疫苗（pVCPV-VP2）、CPV重组活载体疫苗（CAV2／CPV）与CPV弱毒疫苗对犬进行了免疫试验,以检测不同CPV疫苗的免疫原性。采用CPVELISA、CPVHI与CPV微量中和试验检测免疫犬的体液免疫水平,采用淋巴细胞转化试验检测犬的细胞免疫水平。结果,pVCPV—VP2和CAV2／CPV均能诱导机体产生抗CPVELISA抗体与抗CPV中和抗体,但是pVCPV-VP2不能诱导机体产生可检测的抗CPVHI抗体,而CAV2／CPV能够诱导机体产生抗CPVHI抗体。淋巴细胞转化试验结果,pVCPV-VP2和CAV2／CPV免疫犬的外周血淋巴细胞对ConA与CPV的刺激均出现明显的增殖反应。结果表明,pVCPV—VP2和CAV2／CPV免疫犬均能诱导机体产生抗CPV的特异性体液免疫反应和细胞免疫反应,两者所表达的VP2蛋白均具有较好的免疫原性。CAV2／CPV以及pVCPV—VP2和CAV2／CPV联合免疫犬的抗CPV体液免疫水平和细胞免疫水平均比用pVCPV—VP2单独免疫犬的体液免疫水平和细胞免疫水平高。但CAV2／CPV诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应仍然比CPV弱毒疫苗诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应弱。另外,CAV2／CPV还能诱导机体产生抗CAV-2的特异性免疫反应。     

核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗是当今研究的前沿领域,与传统疫苗相比具有很多优点,被誉为第3代疫苗革命.本文就核酸疫苗的作用机理、方法、医学上的研究进展及前景做一综述.