大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究

大豆种子经过浸提、离心、硫酸铵逐级沉淀和D-半乳糖-Epoxy-Sepharosc-4B亲和层析,获得单一的大豆凝集素（Soybean agglutinin SBA）样品。纯化的大豆凝集素经pH8．9的聚丙烯酰胺凝胶电泳（胶浓度7．5％）,可以显示一条清晰的着色带。在血凝活性鉴定中,采用2％兔细胞悬液,测定凝集红细胞的能力和检测它们与糖结合后对红细胞的凝集作用的影响。结果表明,使兔红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg／mL左右。浓度为0．1mg／ml凝集素溶液分别与D-半乳糖、D-氨基半乳糖、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）、a-乳糖、几丁质溶液结合后,使兔红细胞50％凝集的糖配体溶液浓度分别为1mg／ml、2．5mg／ml、10mg／ml、30mg／ml,而几丁质几乎对SBA没有影响。     

长白猪甘露聚糖结合凝集素的分离纯化

对猪血清用PEG-6000进行预处理后,用甘露聚糖结合凝集素-Sepharose4B亲和柱亲和层析,获得纯化的猪MBL样品.然后进行还原性的10%SDS-PAGE电泳,测定分子量与纯度.得到纯化的猪血清MBL分子有3种单体,分子量分别为33kDa、36kDa和56kDa.表明猪血清中MBL是以多聚体形式存在,而且具有糖基化位点.本研究为进一步研究猪MBL的生物学特性提供了基础.     

兔小肠组织大豆凝集素特异性结合蛋白分布的研究

本实验采用凝集素组织化学染色技术,以生物素标记的大豆凝集素为探针,研究了大豆凝集素特异性结合蛋白在兔的十二指肠,空肠,回肠的分布规律。结果表明大豆凝集素特异性结合位点主要分布在小肠上皮柱状细胞,杯状细胞和少量淋巴细胞上。兔肠道各部的分布规律呈如下趋势:各部阳性细胞类型主要为柱状上皮细胞,杯状细胞仅在空肠有着色;阳性区面积表现为:在空肠特别是空肠前段最深,十二指肠、回肠较浅。     

鸡甘露聚糖结合凝集素的分离纯化及初步鉴定

本研究采用CNBr活化的Sepharose 4B亲和柱进行亲和层析,从鸡血清中分离纯化甘露聚糖结合凝集素（MBL）,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）方法测定其分子质量和构型。电泳图谱显示,在分子质量为33ku-34ku处出现两条带,表明鸡MBL具有多聚体形式。研究结果为进一步深入研究禽类MBL分子的特性奠定了基础。     

胃蛋白酶和胰蛋白酶对大豆凝集素的稳定性研究

本研究以纯化的大豆凝集素(SBA)为研究对象,体外研究了动物体内两大主要蛋白消化酶即胃蛋白酶和胰蛋白酶对其酶解作用。试验通过SDS-PAGE方法分析了SBA经蛋白酶酶解后的降解程度;利用间接竞争ELISA方法测定其在酶解过程中的活性变化。结果表明:SBA可缓慢地被胃蛋白酶降解,SBA浓度越高,完全降解需要的时间越长;随着SBA的降解,SBA的活性也逐渐减小,随着酶解时间的延长活性消失速度也逐渐变慢,并且在本研究选取的酶浓度作用下,SBA浓度越高,活性减小的速度越快,但活性完全消失的时间延长。然而,SBA不能被胰蛋白酶降解,并且酶解过程中SBA的活性也保持完好,说明SBA对胰蛋白酶具有很好的稳定性。因本研究结果将为进一步揭示大豆凝集素在动物体内的消化动力学及其对机体的抗营养作用机理研究奠定理论基础。     

热处理条件参数对豆粕中大豆凝集素活性影响

利用二因子析因试验方法,初步研究了通过不同的干热温度和不同的处理时间对提异黄酮前后豆粕中大豆凝集素活力和蛋白质溶解度影响,通过系列试验得出结论:对普通豆粕经过干热130℃15 min和140℃5 min;对于提异黄酮豆粕干热130℃10 min,不但可使凝集素活力达到最低,而且可达到动物对豆粕中蛋白质利用率最高,如果在实际中应用可以广泛地提高豆粕的有效利用率。     

大豆凝集素与肉鸡小肠黏膜细胞结合规律的研究

该试验以75日龄爱拔益加肉鸡为试验对象,饲喂含有20%生大豆日粮。试验期后,取十二指肠、空肠前段、空肠中段、空肠后段、回肠制作石蜡切片,采用免疫组织化学SP法染色,利用图像分析仪分析大豆凝集素与肠上皮细胞结合情况。结果表明,在鸡的不同肠段,大豆凝集素与十二指肠和空肠前段结合的平均光密度值显著高于空肠中、空肠后和回肠（P＆lt;0.05）;在相同肠段不同部位的细胞,肠绒毛的平均光密度值最高,且与隐窝和肠壁的差异显著（P＆lt;0.05）。这表明了肉鸡的不同肠段上皮细胞糖基化模式具有差异性。     

纯化的大豆凝集素对大鼠内脏器官发育与免疫功能的影响

试验的目的是研究日粮中不同水平的大豆凝集素(SBA)对大鼠免疫功能的影响。选取30只19日龄断奶的SD雄性大鼠,随机分配到5个日粮处理组中。5个处理组大鼠均采食以玉米淀粉酪蛋白为基础的日粮,每只大鼠均供给7g/d日粮和充足清水,试验进行20d。试验中大鼠的平均初始体重为(77.8±2.6)g,5个处理组的日粮SBA水平分别为0(对照组)、0.5、1.0、1.5mg/g和2.0mg/g。结果表明:日粮中添加SBA,大鼠日增重下降(P<0.01),淋巴细胞刺激指数和细胞因子浓度均下降(P<0.05),另外血浆免疫球蛋白水平也明显下降(P<0.05)。表明日粮添加纯化SBA能够影响大鼠生长性能,并能够影响大鼠的细胞免疫功能和体液免疫功能。     

大豆凝集素在鸡肠道内残留规律的研究

将生大豆粉碎,过40目筛,硫酸铵粗提后经N-乙酰基-D-半乳糖胺-epoxy-sepharose6B亲和层析体系纯化出大豆凝集素,以其为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,并建立大豆凝集素间接竞争抑制ELISA定量检测方法,其检测下限低于10ng/mL。以含质量分数为20%的生大豆和1%Cr2O3(外源指示剂)的日粮饲喂鸡(75日龄)2周,检测其十二指肠、空肠前、空肠中、空肠后、回肠、盲肠、结直肠内食糜中大豆凝集素的活性残留率。结果表明:大豆凝集素在鸡肠道内活性残留由十二指肠到结直肠总地呈下降趋势,其中由十二指肠到空肠前的残留率变化达到了显著水平(P<0.05),说明大豆凝集素在鸡肠道内吸收和吸附主要发生在十二指肠至空肠前段。     

大豆凝集素单克隆抗体的制备及鉴定

为获得分泌抗大豆凝集素(SBA)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以纯化的SBA为抗原,免疫BALB/c小鼠,加强免疫3 d后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,应用有限稀释法和间接ELISA 方法克隆筛选出2株分泌抗SBA单克隆抗体的杂交瘤细胞系A7、F12。细胞上清抗体效价均在1∶2×10³以上,腹水抗体效价均为1∶1×10⁶,单抗亚型鉴定结果均为IgG2b型,分子质量为189.6 ku,亲和常数为7.1×10⁷ mol/L,Western blotting结果表明,2株单抗具有较高的特异性。该McAb的制备为建立SBA定量检测方法奠定了基础。     

间接抑制酶联免疫吸附法测定大豆凝集素方法的建立

本研究用标准抗原、纯化抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG ,建立间接抑制酶联免疫吸附法 ,测定了几种不同品种生大豆和豆粕产品的凝集素含量。结果表明 ,间接抑制ELISA检测大豆制品中的凝集素含量变异系数小于 15 % ,样品回收率误差在 15 %以内 ;抑制率在 2 0 %～ 70 %范围内 ,曲线呈现良好的线性关系 ,提取液中的大豆凝集素检测下限为 10mg mL。因此本研究建立的间接抑制ELISA法检测生大豆和大豆加工产品中的凝集素含量是可行的     

奶牛布鲁氏菌病微量凝集试验诊断方法的建立

为探索操作简便、快速、实用的奶牛布病诊断方法,本研究建立了奶牛布鲁氏菌病(布病)诊断96孔V型板微量凝集方法,并优化了试验条件。结果显示,抗原的最佳稀释浓度为1:20,反应最适温度为37℃,反应时间为24 h;为验证本研究建立的微量凝集方法的准确性,对120份奶牛布病虎红平板凝集试验阳性血清样品进行微量法凝集和试管凝集试验,结果显示,微量法与虎红平板凝集试验的符合率为83.3%,试管法与虎红平板凝集试验符合率为80.0%。提示,微量凝集试验可以作为试管凝集试验的替代方法,应用于规模化奶牛场布病的诊断和检疫。     

应用平板凝集试验诊断雉鸡结核病的研究

本项研究应用平板凝集试验诊断雉鸡结核病，用禽型结核快速平板凝集反应抗原，检测雉鸡血清中的抗结核杆菌抗体，结果表明，本试验方法特异性强，敏感性高，检出率高，速度快，简便易行，适于现场大批检疫，从而解决了雉鸡结核活体不能诊断的难题，为防治雉鸡结核病提供了可靠的血清学诊断方法。     

乳胶凝集试验检测番鸭呼肠孤病毒方法的建立

用纯化的抗番鸭呼肠孤病毒病抗体致敏乳胶成功地建立了检测番鸭呼肠呼病毒的方法。通过试验，确定了抗体致敏乳胶的最佳浓度1：10(0．4242mg/mL)，最佳致敏温度37℃，最佳致敏时间2个小时。人工攻毒雏番鸭30只，用所建立的方法检测粪便。结果表明，攻毒后的第3天粪便中即可检测到病毒，直至攻毒鸭全部死亡都可从粪便中检测到病毒抗原；同样攻毒1日龄雏番鸭30只，剖检取心、肝、脾按常规方法处理，用所建立的方法的检测。结果表明，首先是脾脏在攻毒后第4天3只中有2只检测结果阳性，第5天2只死亡鸭中有一只肝检测结果阳性，脾脏2只都呈阳性，此后的病死鸭脾和肝均为阳性，而心脏则未见有阳性。这对，临床上诊断与防治番鸭呼肠孤病毒感染具有重要的参考意义。     

番鸭小鹅瘟病胶乳凝集试验与病毒分离的比较研究

应用GPV胶乳凝集方法（LPA）和病毒分离（VI）检测人工感染病例9份、健康对照6份,临床疑似送检病鸭28份。其中人工感染样品检测LPA和VI符合率为93.3%（14/15）;临床疑似样品检测LPA和VI符合率为89.3%（25/28）;两者总符合率达90.7%（39/43）。LPA方法具有简便（肉眼可判定,不需仪器）、快速（检测抗原20min内）、特异、准确等优点,比VI更适合临床使用。     

凝集试验检测兰氏D群链球菌血清抗体方法的建立

建立凝集试验,用于检测兰氏D群链球菌血清抗体.采用兰氏D群链球菌C55914株制成凝集试验抗原,制备的抗原与兰氏D群链球菌兔高免阳性血清、猪正常免疫阳性血清发生凝集反应,不与健康兔阴性血清及健康猪阴性血清发生凝集反应,与链球菌兰氏C群、兰氏E群、巴氏杆菌A群、B群阳性血清呈阴性反应.试验证明,凝集试验能够快速地检验出兰...     

牛布鲁菌单克隆抗体乳胶凝集试验方法的建立

建立了用纯化好的牛布鲁菌(B.abortus)单克隆抗体致敏乳胶的检测方法。通过试验确定了抗体致敏乳胶最佳偶联蛋白量为1.23 mg/mL,最佳致敏时间4 h,最佳的乳胶浓度为1%。水样模拟样本的制作,取含1.0×109cfu/mL灭活的B.abortus544A生理盐水菌悬液各1 mL,加入9 mL自来水中,充分混合均匀,各取1 mL,土样、奶样模拟样本制作同上。最低检出率水样为3×104cfu/mL~1.0×105cfu/mL,土样、奶样为5×104cfu/mL~1.0×105cfu/mL。     

赤羽病病毒的纯化及其单克隆抗体的制备

将人工繁殖、纯化的赤羽病病毒作为免疫原,通过常规杂交瘤技术,制备亲和性强、特异性好的小鼠抗赤羽病病毒单克隆抗体,并进行相应的纯化和标记工作。以澳大利亚进口的试剂盒进行验证,结果证明:进口单抗与我们制备的AAK纯品及AAK-HRP显示同样结果;且质控结果表明,AAK纯品及其衍生物AAK-HRP的特异性和亲和性均基本满足进行封闭ELISA检测方法的要求,为制备国产化ELISA试剂盒提供了基础。