肌肉生长抑制素在小鼠不同发育阶段心肌组织中的表达

本试验旨在探究肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN）基因在小鼠不同发育阶段心肌组织中的表达情况，分别选取幼年（7日龄）、性成熟（21~28日龄）、体成熟（42~56日龄）和老年（84日龄以上）4个发育阶段的健康小鼠（各3只）为研究对象，采用实时荧光定量PCR、HE染色、免疫组织化学等方法研究小鼠不同发育时期MSTN基因在心肌组织中的表达及不同时期心肌组织的发育。实时荧光定量PCR结果显示，MSTN基因在小鼠不同发育阶段心肌组织中均有表达，且其在小鼠老年时期的表达量最高，体成熟时期的表达量最低；幼年小鼠和性成熟小鼠心肌组织中MSTN基因表达水平显著低于老年小鼠（P<0.05），而体成熟小鼠则极显著性低于老年小鼠（P<0.01）。HE染色结果显示，小鼠心肌细胞核及肌纤维的生长在不同发育时期明显不同，其中幼年时期的细胞核最多，肌纤维排列相对较紧密，而在性成熟、体成熟、老年时期心肌的发育指标依次降低。免疫组织化学结果显示，MSTN基因主要在心肌细胞核中表达，其各个时期表达量与实时荧光定量PCR的结果相符合。     

FNDC5在小鼠老龄化过程脂肪组织中的表达变化

本研究旨在探讨Ⅲ型纤连蛋白域包含蛋白5（type Ⅲ fibronectin domain contains protein 5,FNDC5）在小鼠老龄化过程中脂肪组织中的表达变化,以小鼠老龄化过程中不同发育阶段的健康小鼠为研究对象,通过HE染色、免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR和Western blotting等技术研究小鼠老龄化过程中脂肪组织FNDC5的表达以及定位。结果发现,FNDC5在小鼠老龄化过程中各个发育时期的脂肪中均有不同程度的表达并呈现明显的差异性。HE染色发现,随着年龄的增长,脂肪细胞的大小呈现先逐渐增大后萎缩的趋势。免疫组织化学染色发现,FNDC5在幼年小鼠的脂肪组织中表达水平最高,在性成熟的脂肪组织中表达水平次之,老年的脂肪组织中的表达水平低于性成熟时期,体成熟的脂肪组织中表达水平最低。实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果也与免疫组织化学染色趋势相符。以上结果表明,FNDC5基因可能在脂肪组织中发挥一定的作用,为研究脂肪代谢以及肥胖相关的疾病提供新思路。     

生肌调节因子在绵羊不同胎儿期心肌和骨骼肌中的表达

本试验旨在探究生肌调节因子（myogenic regulatory factors，MRFs）在绵羊不同胎儿发育时期心肌和骨骼肌组织中的表达情况。选取妊娠60（E60）、70（E70）、80（E80）和90 d（E90）4个不同时期的滩羊胎儿作为研究对象，采集骨骼肌和心肌组织，通过HE和油红染色观察心肌和骨骼肌在胎儿发育过程中发生的组织形态学变化；通过实时荧光定量PCR研究绵羊胎儿发育过程中MRFs在心肌和骨骼肌组织中的表达规律以及同一胎儿期MRFs在心肌和骨骼肌中的表达差异。HE染色结果显示，心肌组织和骨骼肌组织的微观结构差异明显，心肌肌纤维密度大，纵横交错成网状，和骨骼肌相比发育的更加成熟；骨骼肌组织肌纤维密度小，间隙大，E60~E90肌纤维数量逐渐增加，肌纤维束结构清晰分明。油红染色结果显示，心肌和骨骼肌组织在4个时期均未出现被染成红色的脂滴，表明E60~E90两个组织均没有分化出脂肪。实时荧光定量PCR结果显示，E60~E90胎儿心肌组织中MYOG、Myf5和Myf6基因表达量持续降低，但是没有MYOD基因表达；E60~E90骨骼肌组织中MYOD、MYOG和Myf6基因表达量持续上升，其中MYOG基因表达水平最高，Myf5基因的表达发生周期性波动。以上结果表明，E60~E90胎儿骨骼肌正处于快速发育阶段，而心肌组织此时已大致成型。因此，骨骼肌组织中MRFs的表达量远远高于心肌组织，且MYOG基因对于维持骨骼肌的快速发育发挥了重要作用。     

鸽MSTN基因mRNA表达的发育性变化及组织差异研究

通过研究公、母鸽肉质性状候选基因肌肉抑制素(Myostatin,MSTN)在不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究鸽肉质性状的遗传调控机理提供依据。采用荧光探针RT-PCR,定量分析MSTN mRNA在公、母鸽的多个组织、多个发育时间点的表达量。RT-PCR结果表明,MSTN mRNA表达量在3个生理时期表现出先降低后升高的变化趋势,母鸽峰值出现较早。公鸽MSTN mRNA表达量最高的组织为肾脏,睾丸中表达丰度最低,青年期肝脏、心肌MSTN mRNA表达量极显著高于其它时期的表达量,但在睾丸中没有检测到基因的表达。对不同生理时期母鸽MSTN mRNA的表达量比较后发现,青年期MSTN mRNA表达最高,显著高于其它时期。MSTN mRNA表达量受到组织、发育阶段和品种影响,该基因的表达在物种之间存在差异。     

CPT1A基因在广西麻鸡的表达研究

该研究旨在阐明CPT1A基因在广西麻鸡组织表达和时序表达谱,为研究鸡体内脂肪代谢提供一定的基础资料.选取胚胎期到性成熟时的广西麻鸡,在不同发育时间点采集胸大肌、腓肠肌、心脏和肝脏组织样品,利用实时荧光定量方法,分析CPT1A基因在不同组织不同发育阶段表达规律.组织表达结果显示,CPT1A在广西麻鸡不同发育阶段4种组织中...     

新疆也木勒白羊肌肉生长抑制素基因在不同生长时期的表达研究

试验采用实时荧光定量PCR技术测定也木勒白羊肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因在不同生长时期(0～6月龄)的表达量,采用2^－ΔΔCt分析不同生长阶段表达量的差异,旨在掌握也木勒白羊不同生长时期MSTN基因的表达规律,为也木勒白羊肌肉生长性状的选育提供遗传学资料.结果发现,MSTN基因在3月龄也木勒白羊肌肉中的表达量显著低于其他月龄(P<0.05),其余各月龄差异不显著(P>0.05);MSTN在脂肪中的表达量0月龄相对较低,随月龄增长,表达量升高,在5月龄达到最高,后随月龄增长表达量降低.MSTN基因在肌肉和脂肪中的表达量随着月龄增长有一定的规律可循,其表达规律可为也木勒白羊肉用性能的选育提供一定的科学依据.     

牦牛TNP2基因分子特征及其在不同发育阶段睾丸中的表达

克隆牦牛过渡蛋白2(transition protein 2,TNP2)基因并分析其分子特征,调查TNP2基因和蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达差异,为研究其在睾丸发育及精子发生中的作用提供依据。采集不同发育阶段牦牛睾丸(初生期、幼年期、性成熟初期、性成熟后期、老年期)组织,在克隆测序的基础上对TNP2基因进行分子特征分析;利用免疫组化(IHC)、荧光定量PCR(RT-qPCR)以及Western blot技术检测TNP2蛋白在牦牛睾丸组织中的定位及TNP2基因和蛋白在牦牛睾丸组织中的表达量。结果显示,成功克隆牦牛TNP2的基因CDS区序列,分子特征预测TNP2为可溶性的膜外蛋白,有多个磷酸化位点;其二级结构包含α螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲,其核苷酸序列及氨基酸序列与其他哺乳动物之间的同源性较低。RT-qPCR结果显示,TNP2 mRNA在老年期睾丸的相对表达量极显著(P<0.01)高于其他4个时期,且在幼年期极显著(P<0.01)高于初生期、性成熟早期和性成熟后期,而初生期与性成熟早期和性成熟后期三者之间无显著差异(P>0.05)。Western blot...     

CPT1B基因在灵山香鸡上的时空表达规律研究

本实验旨在阐明CPT1B基因在灵山香鸡上的组织表达和时序表达谱,为研究鸡体内脂肪代谢提供一定的基础资料。选取胚胎期到性成熟时的灵山香鸡为实验材料,在不同发育时间点(9、12、16胚龄,1日龄,1、3、 5、7、10、13、16周龄)采集胸肌、腿肌、心脏、肝脏组织样品,利用实时荧光定量方法分析CPT1B基因在不同组织不同发育阶段的表达规律。结果显示:CPT1B在不同发育阶段4种组织中表达差异性不同,在胚胎期和1日龄,CPT1B基因在肝脏的表达量最高;5、7、10、13周龄时,CPT1B在胸肌的表达量最高;CPT1B基因在4种组织不同发育阶段变化趋势不一致,其在肝脏表达量呈现下降趋势,而在腿肌、胸肌和心脏表达量呈上升趋势,在胸肌的各个发育阶段上升趋势最显著;CPT1B虽然属于肌肉亚型CPT,但不是每个发育阶段在肌肉组织中的表达量最高,在胚胎期,鸡肝脏是CPT1B参与脂肪酸β-氧化的主要场所,而在出雏后到性成熟时期胸肌是CPT1B参与脂肪酸β-氧化的主要场所。     

MyoD在不同发育阶段小鼠骨骼肌中的表达与定位

本试验旨在研究Myo D基因在不同发育阶段小鼠骨骼肌上的表达量及表达位置。我们采用了固定切片、H.E.染色、RNA提取、实时荧光定量以及免疫组织化学方法进行分析。结果显示Myo D基因在幼龄小鼠的骨骼肌中表达量最高,在老龄小鼠体内的表达量次之,在体成熟小鼠体内的表达量最低。分析表明Myo D基因在不同发育阶段小鼠骨骼肌上表达存在差异,其与骨骼肌的发育存在相关性,结果将为后续研究Myo D提供理论依据。     

沙子岭猪GSG1基因克隆、生物信息学分析及组织表达

采用RACE技术克隆猪GSG1(Germ Cell-specific gene 1)基因cDNA1全长并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR对GSG1基因在沙子岭猪睾丸组织8个不同发育阶段(E90、D1、D30、D60、D90、D120、D150和D180)和30日龄时9个不同组织(睾丸、肌肉、小肠、肺、心脏、肾脏、肝脏、脾脏和脂肪)的表达量。结果表明:GSG1基因cDNA全长为1 257 bp,含1个长993 bp的开放阅读框,编码330个氨基酸。实时荧光定量PCR结果显示,GSG1基因在睾丸组织中的表达量最高,显著高于其余8个组织(P0.05),且其在肌肉、小肠、肺脏、心脏、肾脏和脂肪中的表达水平极低;GSG1基因在睾丸组织的E90、D1、D30和D60这4个发育时期的表达量较低,显著低于D90、D120、D150和D180这4个时期(P0.01)。本试验首次克隆了猪GSG1基因cDNA全长并检测了其在不同组织和不同发育阶段睾丸组织的表达,为进一步研究其调控猪睾丸发育和精子生成的机制奠定了理论基础。     

藏绵羊PRDX5基因的克隆及其在睾丸中的表达

过氧化物氧化还原酶5 (PRDX5)是一种硫氧还蛋白,参与机体多种生物学过程。为了研究PRDX5基因在藏绵羊(Ovis aries)睾丸发育和精子发生过程中的作用,本研究以不同发育阶段(3月龄、1周岁和3周岁)的藏绵羊为研究对象,克隆了PRDX5基因的CDS区,并对其进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色法,对PRDX5基因在藏绵羊睾丸不同发育阶段的表达和分布进行了检测。结果显示,PRDX5基因CDS区全长659 bp,可编码219个氨基酸;蛋白质结构预测显示PRDX5以α-螺旋为主,无信号肽;系统进化树显示,藏绵羊PRDX5基因与山羊(Capra hircus)亲缘关系最近;1周岁(性成熟期)和3周岁(成年)藏绵羊睾丸中PRDX5 mRNA相对表达量极显著(P <0.01)高于3月龄(性成熟前),但PRDX5蛋白表达量极显著(P <0.01)低于3月龄,且两者在性成熟后趋于稳定;PRDX5蛋白在藏绵羊睾丸不同发育阶段的支持细胞和间质细胞中均有表达。推测PRDX5基因可能通过调节细胞内ROS的水平影响精子发生...     

肌抑素对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响

本研究旨在揭示肌抑素(MSTN)与基质金属蛋白酶(MMPs)的调控关系,探明MSTN对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响。对MSTN单等位基因敲除猪背膘组织进行转录组测序分析,复苏前期制备的MSTN基因敲除PK15细胞系:单等位基因敲除的PK3108细胞系和双等位基因敲除的L18细胞系,通过实时荧光定量PCR和Wesrern blotting分别检测PK15、PK3108和L18细胞系中MSTN、MMP-2/7/9基因的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,与野生型猪相比,MSTN单等位基因敲除猪背膘组织转录因子C/EBPδ、MMP-2/7基因mRNA表达量均极显著下调(P0.01);细胞外基质中纤连蛋白(FN)和层连接蛋白(LN)含量均极显著增加(P0.01)。复苏的PK3108和L18细胞呈现绿色荧光。实时荧光定量PCR结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的mRNA表达量均极显著低于PK15细胞(P0.01);Western blotting结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的蛋白表达量均明显低于PK15细胞。本研究结果表明,在MSTN基因敲除的PK15细胞中,MSTN功能缺失能显著降低MMP-2/7/9的表达,且MMP-2/7/9蛋白表达降低的趋势与MSTN蛋白表达的趋势相一致。     

MSTN基因在贵州地方黄牛不同组织中mRNA表达量的研究

为了研究贵州地方黄牛不同组织中肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因mRNA的表达差异和表达规律,以4个品种贵州地方黄牛(关岭牛、思南牛、威宁牛和黎平牛)为试验动物,分别提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌的总RNA,设计MSTN实时荧光定量引物,以牛GAPDH基因作为内参,应用实时定量PCR技术检测MSTN基因在4个品种黄牛不同组织中mRNA的相对表达量,同时利用MAS3. 0在线软件分析MSTN基因功能。结果显示:MSTN基因在4个贵州地方黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌中均有表达,在背最长肌中的表达量显著高于其他组织(P0. 05),不同品种之间MSTN基因在部分组织中的表达存在差异,且所分析的通路与机体生长发育和转录调控存在关联。研究表明MSTN基因在背最长肌中的表达量最高,品种对于MSTN基因的表达影响不大,而在不同组织中的表达量存在差异。     

“花山麻鸡”CPT1A基因时空表达规律研究

试验旨在阐明"花山麻鸡"CPT1A基因的组织表达和时序表达规律,以胚胎期到上市日龄的"花山麻鸡"为试验材料,在不同发育时间点采集胸肌、腿肌、心脏、肝脏组织样品,利用实时荧光定量方法分析CPT1A基因在不同组织不同发育阶段表达规律。在相同发育阶段不同组织差异表达结果显示:在胚胎期(9、12、16日胚龄)和上市日龄(9周龄),CPT1A基因在肝脏的表达量显著高于在心脏、胸肌和腿肌的表达量,在出生后1日龄,CPT1A在心脏表达量最高,1周龄时,CPTA在肝脏的表达量最低;5周龄时,CPT1A在腿肌的表达量最高;7周龄时,CPT1A在腿肌和肝脏的表达量显著高于胸肌和心脏。在同一组织不同发育阶段差异表达结果显示,CPT1A在胸肌、腿肌、肝脏和心脏不同发育阶段表达规律与表达量是不同的。研究表明CPT1A基因在胸肌、腿肌、肝脏和心脏相同发育阶段表达量不同,CPT1A基因在胸肌、腿肌、肝脏和心脏织不同发育阶段表达规律与表达量不同。     

BMP2和BMP4基因在草原红牛睾丸组织中的表达量分析

采用实时荧光定量PCR技术检测BMP2和BMP4基因在草原红牛1,12,18,30月龄4个发育阶段睾丸组织中的mRNA表达水平。旨在探讨该基因在草原红牛睾丸不同发育阶段的表达情况。结果表明:BMP2和BMP4基因在所检测的肉牛4个发育阶段睾丸组织中均有表达。BMP4基因1月龄表达量显著低于12,18,30月龄(P0.05),12月龄表达量最高,随着月龄增加,表达量减少。而BMP2基因在出生阶段表达量最低,但是与其他3个阶段差异不显著(P0.05),基因表达趋势也是12月龄表达量最高,然后随着月龄增加,表达量减少。     

雏鸡肠组织β1基因的鉴定及时空表达特性

设计1对引物,建立RT-PCR方法对β1基因mRNA进行鉴定;以GAPDH基因为内参,建立检测鸡β1基因表达水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并用此方法测定1²0日龄雏鸡不同肠段组织β1基因表达水平。结果显示,从鸡肠组织成功鉴定出β1基因mRNA;检测内参基因GAPDH和目的基因β1的实时荧光定量PCR方法扩增效率一致(扩增曲线斜率差<0.1),满足使用比较Ct值法对β1基因mRNA进行相对定量分析的前提;扩增曲线、熔解曲线及凝胶电泳结果提示该方法特异性好。实时荧光定量PCR检测结果表明,1日龄雏鸡十二指肠和盲肠、10日龄雏鸡空肠和直肠、5日龄雏鸡回肠组织中β1基因相对表达量最高。结果表明,鸡肠组织中存在β1基因表达,并在不同日龄不同肠段表达水平存在差异。     

禽白血病病毒衣壳蛋白p27基因绝对定量PCR方法的建立及应用

研究旨在建立一种检测禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白p27(ALV-p27)基因实时荧光定量PCR的方法。通过设计ALV-p27特异性的荧光定量PCR引物扩增基因并制备质粒标准品,同时建立检测病毒衣壳蛋白p27基因的实时荧光定量PCR方法,并利用该方法检测6日龄胚胎感染,1日龄出壳雏鸡不同组织中p27基因的分布和表达情况。结果表明,ALV-p27基因在1日龄雏鸡脑组织中表达水平最高,而在胸腺组织中表达水平最低。研究建立的检测ALV-p27基因绝对定量PCR方法为进一步研究其生物学功能提供了一种技术手段。     

阿勒泰羊羔羊MSTN mRNA表达的发育性变化

肌肉生长抑制素（MSTN）是一种骨骼肌生长发育的负调控因子.试验以不同生长阶段的阿勒泰羊羔羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术测定了肌肉和脂肪组织中MSTN mRNA相对表达量.比较该基因在不同月龄阿勒泰羊羔羊肌肉和脂肪组织中的表达差异.结果表明：阿勒泰羊0～6月龄羔羊MSTN mRNA在肌肉和脂肪组织中均有表达.4月龄羔羊MSTN mRNA表达量在肌肉中最高,0～4月龄的表达量逐渐上升,4～6月龄逐渐下降.6月龄羔羊脂肪中的MSTN mRNA表达量最高.不同月龄阶段阿勒泰羊羔羊肌肉和脂肪MSTN mRNA表达量存在差异,这些差异可能会影响其生长发育和产肉性能等指标,这对进一步理解MSTN基因的调控作用奠定了基础.     

鸭胚骨骼肌不同组织Myf6基因表达的发育性变化研究

为研究Myf6基因对鸭肌肉发育的影响,本试验利用实时荧光定量PCR绝对定量技术检测Myf6基因在高邮鸭和金定鸭胚胎期第13、17、21、25、27天及出生后7日龄胸肌、腿肌发育过程中的表达量。结果显示,Myf6基因在2个品种的胸肌和腿肌中均有表达,在不同品种同一肌肉组织中的表达变化规律一致,而在不同肌肉组织中的表达模式不同,其中在胸肌组织中21胚龄时表达量最高,随后表达量下降,维持相对较高表达水平;在腿肌组织中13胚龄时表达量较高,17胚龄时达到最高,随后表达量有所降低,并在21胚龄后急速下降至极低水平,但其表达在胚胎期后期(27胚龄)及初生期(7日龄)又有缓慢上升趋势。上述结果表明,Myf6基因参与了胸、腿肌组织的发育,在胸、腿肌中表达模式不同,推测Myf6基因在胸、腿肌中的调控存在差异,可能与其胸、腿肌不同肌纤维的发育与分化有关。     

滩羊肌肉抑制素(MSTN)基因TaqMan探针SNP分型及其与生长性状的关联研究

为了建立一种基于TaqMan探针技术的快速、准确且经济的实时荧光PCR法用于检测滩羊肌肉抑制素(MSTN)基因单核苷酸多态性(SNP)分型,试验选择MSTN基因的多态位点设计1对TaqMan探针加入到PCR反应系统中对MSTN基因SNP进行分型,同时对MSTN基因的不同基因型与生长性状(出生重、断奶体重、三月龄体重和六月龄体重)进行关联研究。结果表明:MSTN基因rs417816017位点在滩羊群体中具有两种基因型YY、XY;XY型个体具有生长优势。说明基于TaqMan探针技术的特异的实时荧光PCR方法可实现MSTN基因的分型检测,可为深入开展滩羊育种提供备选基因。