添加咖啡因、亚牛磺酸对牛精子功能的影响

为研究获能液中添加咖啡因和亚牛磺酸对牛精子功能的影响,本研究将荷斯坦牛冻精解冻后分别添加在含不同浓度咖啡因（0、2.5、5.0、7.5 mmol/L）或亚牛磺酸（0、5、10、20、40 μmol/L）的获能处理液中,且每个处理组加入约200 μL的精液,在CO₂培养箱里经上游处理45 min,以评估咖啡因和亚牛磺酸对牛精子活力、顶体及质膜完整性的影响,进而探讨在获能液中亚牛磺酸替代咖啡因的效果。结果显示,添加2.5、5.0 mmol/L咖啡因组经上游法获能处理后的牛精子活力和顶体完整率均显著高于对照组（P<0.05）,且2.5 mmol/L咖啡因组精子活力最高;添加10、20 μmol/L亚牛磺酸组经上游法获能处理后的牛精子活力、顶体完整率和质膜完整率均显著高于对照组（P<0.05）,且20 μmol/L亚牛磺酸组的精子功能参数值最高;将筛选的最佳浓度2.5 mmol/L咖啡因和20 μmol/L亚牛磺酸采用同样的方法处理,发现20 μmol/L亚牛磺酸组的精子顶体完整率和质膜完整率均显著高于2.5 mmol/L咖啡因组和对照组（P<0.05）。因此,20 μmol/L亚牛磺酸可以替代2.5 mmol/L咖啡因用于体外受精体系中的精子获能处理,有助于提高精子功能参数。     

诱导牛精子体外获能方法的研究

用去透明带的金黄地鼠卵异种精子体外穿透试验,检测冻精复苏,经各种处理后的精子穿卵率,结果表明,B0培养基,经咖啡因2mmol/L,肝素50μg/ml处理,并添加亚牛磺酸70μmol/L和透明质酸酶1g/L,是诱导牛精子体外获能的有效方法。     

五味子乙素对4℃保存后猪精子质量和获能状态的影响

试验旨在研究五味子乙素（SchB）对4℃保存后猪精子质量及获能状态的影响，根据在冷藏基础液中添加不同浓度的SchB，将精液分为6组，分别为0（对照）、2.5、5、10、20、40μmol/L组，检测冷藏后精子的活力、顶体完整率、质膜完整率、畸形率、平均运动速率、摆动性、线粒体膜电位（MMP）、DNA损伤、总抗氧化能力（T-AOC）等表观指标；用多功能酶标仪检测各组Ca2+浓度，用乳酸试剂盒检测精子获能状态。结果表明：SchB可以提高精子活力、顶体完整率、质膜完整率、MMP、平均运动速率、摆动性、T-AOC，显著降低精子畸形率、DNA损伤、Ca2+浓度、乳酸含量（P<0.05），且浓度为10μmol/L时效果最佳。综上，SchB可以抑制精子冷藏过程中的被动获能，提高冷藏后精子质量。     

羧甲基纤维素钠对猪精液常温保存效果的影响

在猪人工授精技术中,良好的稀释剂是提高猪精子质量的关键因素之一。为探讨羧甲基纤维素钠(CMC)对猪精液常温保存效果的影响,本研究以传统的猪精液保存稀释剂Zorlesco(-BSA)为基础稀释液,通过添加不同浓度的CMC(0、8、16和24μmol/L)对原精液进行稀释和保存。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率和活力,低渗肿胀法(HOST)检测精子质膜完整性,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,在猪精液保存的前3d内,添加不同浓度CMC组的精子活率和活力与对照组相比较高,但差异不显著(P0.05);保存4~7d时,与对照组相比添加16μmol/L CMC组的精子活率和活力明显升高(P0.05)。在保存的前4d内,添加不同浓度CMC组的精子质膜完整率和顶体完整率与对照组相比差异不显著(P0.05),但在保存至5~7d时,添加16μmol/L CMC组的质膜完整率和顶体完整率显著高于对照组(P0.05)。猪精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率之间存在极显著的正相关关系(P0.01),在Zorlesco稀释剂中添加8~24μmol/L的CMC能显著改善和提高猪精子活率、活力、质膜完整性以及顶体完整率,其最佳添加浓度为16μmol/L。CMC可作为精液稀释剂中的悬浮剂,用于减缓精子沉降速率,提高猪精液保存质量。     

不同抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响

为探讨褪黑素、亚牛磺酸、左旋肉毒碱三种抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响,将荷斯坦牛细管冻精解冻后,各取200μL精液分别添加在含10~(-4) M褪黑素(MLT)、20μM亚牛磺酸(HT)、10 mM左旋肉毒碱(LC)的获能液中,经上游处理45 min,采用目测法、金霉素(CTC)染色法评估三种抗氧化剂对牛精子活力、精子获能状态的影响。结果表明:添加10~(-4) M MLT、20μM HT、10 mM LC经上游法获能处理后的牛精子活力(83.67%、80.65%、75.00%vs 66.67%)均显著高于对照组(P0.05),而顶体反应率(9.87%、10.09%、14.30%vs 18.73%)均显著低于对照组(P0.05)。另外,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT组获能处理后B型精子所占比率(37.26%、29.84%vs 16.26%)均显著高于对照组(P0.05),且10 mM LC组精子获能率最高;而20μM HT组与对照组无明显差异(22.80%vs 16.26%,P0.05)。因此,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT可改善精子体外获能效果,有助于提高体外受精的受精率及早期胚胎的质量。     

诱导牛精子体外获能的培养基及方法

用去透明带金黄地鼠异种精子体外穿透试验,检测冻精复苏经各种处理后的精子穿卵率。发现在４种基本培养基（ＢＯ、ｍＢＷＷ、ＴＹＨ、ＨａｍＦ１０＋ＲＰＭＩ－１６４０）中不加亚牛磺酸时,牛精子不能耐受较高浓度（４μｍｏｌ／Ｌ）钙离子载体（ＩＡ）的刺激（以１０ｍｉｎ计）;而低浓度ＩＡ（低于４μｍｏｌ／Ｌ）处理精子不能诱导获能。生物活性物质,如肝素、咖啡因、亚牛磺酸、肾上腺素单独或联合低浓度ＩＡ处理精子,短期（６ｈ）内也不能诱导获能。当基本培养基中含有亚牛磺酸时,牛精子能耐受高浓度ＩＡ（１０μｍｏｌ／Ｌ）的刺激,并使牛精子获能;亚牛磺酸与肾上腺素、咖啡因联合使用,并在获能液中添加透明质酸酶时,穿卵率进一步提高,获能效果显著改善。以ＨａｍＦ１０＋ＲＰＭＩ１６４０为主的混合培养基,在牛精子的存活时间、穿卵率等方面优于ＢＯ、ｍＢＷＷ、ＴＹＨ培养基。结果表明,用Ｆ１０和１６４０的混合培养基,添加亚牛磺酸、肾上腺素、咖啡因、透明质酸酶,经１０μｍｏｌ／ＬＩＡ处理牛精子１０～１５ｍｉｎ,是快速诱导牛精子体外获能的有效方法     

添加褪黑素对牛精液品质的影响

为探讨褪黑素(melatonin,MLT)在牛精液保存中的抗氧化作用,本研究利用目测法、低渗膨胀法和考马斯亮兰染色法分析了不同MLT浓度(0、10^-3、10^-4和10^-5 mol/L)和不同孵育时间(1、4和8 h)对精子活力、质膜和顶体完整性的影响。结果发现,与对照组相比,在稀释液中分别添加10^-3和10^-4 mol/L MLT均可显著提高精子活力、质膜完整率和顶体完整率(P＜0.05),且10^-3 mol/L MLT添加效果最佳;MLT(10^-3 mol/L)组在27 ℃孵育1、4 h后,其精子的活力、质膜完整率和顶体完整率均显著高于对照组(P＜0.05)。因此,添加10^-3 mol/L MLT可明显改善牛精液品质,提高牛精液的保存时间和保存质量。     

谷胱甘肽对杜洛克猪精子冷冻保存效果的影响

为了探讨冷冻保存Ⅰ液中添加不同浓度谷胱甘肽(GSH)对杜洛克公猪精子冷冻保存效果的影响,试验将冷冻-解冻处理的精液分为6组,分别为对照组(冷冻保存Ⅰ液)和试验组(分别在冷冻保存Ⅰ液中添加1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mmol/L的GSH),在液氮中保存,然后检测精子活力、运动参数、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性,活性氧(ROS)水平,丙二醛(MDA)和ATP含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以此来评价解冻后的精液品质。结果表明：与对照组相比,除GSH添加浓度为3.0 mmol/L时精子活力降低外,其他添加浓度精子活力均提高,其中添加浓度为2.5 mmol/L时提高最显著(P<0.05)。与对照组相比,GSH添加浓度为2.5 mmol/L时猪精子在解冻后各项运动参数均显著提高(P<0.05),添加浓度为2.0,3.0 mmol/L时对猪精子部分运动参数也有一定提高,而添加浓度为1.0 mmol/L时各项运动参数降低。与对照组相比,添加不同浓度GSH时精子质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性均提高,其中...     

添加牛磺酸和黄芪多糖对羊精子低温保存的影响

为了研究羊精子低温保存时牛磺酸和黄芪多糖对精子质量的影响，本试验在BTS(Beltsville thawing solution)精液稀释液的基础上添加牛磺酸和黄芪多糖，随后对4℃低温保存条件下羊精子的精子活率、质膜完整率和顶体完整率进行考察，采用两因素五水平的中心设计法优化精子稀释液添加牛磺酸和黄芪多糖的浓度，并进一步验证经优化缓冲液的保护效果。结果显示，牛磺酸和黄芪多糖的最优添加浓度分别为27.83 mmol/L和346.91 mg/mL;采用该添加浓度能显著提高低温保存后羊精子的精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P<0.05)。结果表明，牛磺酸和黄芪多糖对低温保存羊精子具有显著的保护作用。     

还原型谷胱甘肽对西门塔尔牛精液低温保存效果的影响

本实验旨在探究还原型谷胱甘肽（GSH）对西门塔尔牛精液低温保存（0℃）的影响。在精液稀释液中分别添加0（对照组）、1、2、4、6 mmol/L的GSH,在0℃条件下保存24、72、120、168、216 h时检测精子活力、顶体完整率和质膜完整性等指标;保存72 h和168 h时检测精子的丙二醛（MDA）水平、三磷酸腺苷（ATP）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性。结果表明：在精液低温保存72 h时,4 mmol/L GSH添加组的精子活力、顶体完整率、质膜完整性、CAT活性、ATP含量和GSH-Px活性高于对照组（P<0.05）;在精液低温保存168 h时,4 mmol/L GSH添加组的精子活力、顶体完整率、质膜完整性、CAT活性、ATP含量和GSH-Px活性高于对照组与其他GSH添加组（P<0.05）,MDA水平低于其他组（P<0.05）。因此,在本实验条件下,在精液稀释液中添加4 mmol/L GSH可以有效提高精液品质和精子的抗氧化能力,延长精子的保存时间。     

添加牛磺酸对兔精液液态保存质量参数的影响

为探讨牛磺酸对兔精液液态保存效果的影响进行了本试验。试验分对照组和4个牛磺酸处理组(5,10,15和20mmol/L),在精液保存24h、48h和72h后,发现10mmol/L牛磺酸处理组的精子活率、精子低渗膨胀百分率、精子顶体完整率和精子前向性均显著高于对照组(P<0.05);在精液保存48h和72h后,10mmol/L牛磺酸处理组精子直线速度和精子平均路径速度显著高于对照组(P<0.05)。结果表明添加牛磺酸对兔精液液态保存是有益的,牛磺酸的浓度为10mmol/L比较适合。     

钙离子载体及咖啡因对绵羊精子获能的影响

通过添加不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1、5、10μmol/L)的钙离子载体(A23187,IA)及2 mmol/L咖啡因,探讨不同作用时间其对绵羊精子体外获能的影响。结果发现,IA浓度越高,精子的体外获能率越高,顶体反应率越低,活力越低,死精子就越多;而延长作用时间对获能、顶体反应的影响不明显。IA和咖啡因共同作用后,咖啡因能够促进IA诱导顶体反应的发生。建议用IA诱导绵羊精子获能时,其浓度以0.05~0.2μmol/L为宜,作用时间1 min。     

L-肉毒碱对牛精液体外保存时间及品质的影响

精液体外孵育保存会使精子品质下降,抗氧化剂L-肉毒碱可促进激活的脂肪酸从细胞质到线粒体基质的转运,减少ROS产生和脂质过氧化反应的发生。研究分析了牛精液体外保存过程中不同浓度L-肉毒碱(LC)(0、2、10和15mmol/L)和不同孵育时间(2、4、6h)对牛精子活力、质膜完整性、线粒体活性和顶体完整性的影响。结果表明:与对照组相比,在牛精液体外保存稀释液中添加10mmol/L和15mmol/L的LC均可显著(P0.05)提高精子活力(33.0%vs 45.6%,42.4%)、质膜完整率(61.2%vs 73.6%,68.4%)和顶体完整率(81.4%vs 88.4%,86.3%),而线粒体活性则是10 mmol/L LC组效果最好;将筛选的最佳浓度10mM LC组于27℃体外孵育2、4、6h后,其精子的活力、质膜完整率和线粒体高膜电位百分率均显著高于对照组(P0.05),顶体完整率仅在孵育6h后与对照组差异不显著(P0.05)。由此可见,LC可保护精子功能和结构免受损伤,不仅能改善牛精液体外保存的品质参数,又可延长牛精液体外保存的时间。     

纳米化红景天多糖对猪精液冷冻效果的影响

在冷冻稀释液中分别添加分数为1％、5％、10％、15％、20％的纳米化红景天多糖（Nonomaterialsrhodiolasa—chalinensispolysaccaride,NRSP）溶液,以添加6mg／L红景天多糖（Rhodiolasachalinensispolysaccaride,RSP）为对照组,不添加RSP为空白组,检测其对猪冷冻精子活力、顶体完整率、质膜完整率等生理结构指标,以及精子抗氧化能力的影响。结果表明,添加体积分数为15％NRSP组的精子活力（0．69）、顶体完整率（51．42％）、质膜完整率（25．95％）均高于其他组,并显著高于空白组（P〈0．05）。此外添加15％NRSP组的解冻后直线运动精子百分比（46．33％）要显著高于其他各组（P〈0．05）;添加6mg／LRSP组丙二醛（MDA）浓度最低（10．83±0．39）／2mol／L,并且显著低于空白组（31．85土1．36）μmol／L,（P〈0．05）,但与15％的NRSP组（11．60±0．42）μmol／L无显著差异（P〉0．05）。添加20％的RNSP组超氧化物歧化酶（SOD）活力最高（343．05-＋-19．64）μ／mgprot,显著高于其他添加组（P〈0．05）。精子活力、顶体完整率、质膜完整率之间存在显著的正相关关系（P〈0．05）,而精子活力和顶体完整性与MDA浓度呈显著负相关（P〈0．05）,与SOD活力呈显著正相关（P〈0．05）,质膜完整率与两者含量相关性不显著（P〉0．05）。     

辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响

本实验旨在探究辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响。选取3只1～2岁的健康湖羊采集精液,在基础稀释液中添加0、5、50、250、500μmol/L的辅酶Q_(10),检测在20℃保存过程中的湖羊精子活力、活率、曲线速度、质膜完整率、顶体完整率和活性氧(ROS)含量等指标。结果表明:随着在常温保存稀释液中添加辅酶Q_(10)浓度的提升,其对精子的保护作用呈先上升后下降的趋势,当辅酶Q_(10)浓度为50μmol/L时,精子活力、质膜和顶体完整率显著提高,ROS含量显著降低。本实验条件下,在湖羊精液常温保存稀释液中添加50μmol/L辅酶Q_(10)能够提高湖羊精液常温保存效果。     

锰苯甲酸卟啉对猪精液冷冻保存效果的影响

本实验旨在探究锰苯甲酸卟啉（MnTBAP）对猪精液冷冻保存的影响,从而筛选出适用于猪精液冷冻的MnTBAP浓度。实验一共分为6组：新鲜组、冷冻对照组、不同浓度MnTBAP组（在冷冻液I中添加50、100、150、200μmol/LMnTBAP）,对冷冻后猪精子动力学参数以及活率进行检测,从而筛选出适用于猪精子冷冻的最佳MnTBAP浓度。实验二共分成3组：新鲜组、冷冻对照组、最佳MnTBAP浓度组,对冷冻后猪精子质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数（DFI）、线粒体膜电位（MMP）、活性氧（ROS）进行检测。结果表明：与其他浓度的MnTBAP组相比,100μmol/L MnTBAP对动力学参数以及活力改善最显著;与冷冻对照组相比,100μmol/L MnTBAP组猪精子质膜完整率、顶体完整率、MMP和抗氧化酶显著升高,DFI、ROS显著降低。综上所述,在冷冻液稀释中添加MnTBAP可以改善猪精液冷冻后的质量,且最适添加浓度是100μmol/L。     

白藜芦醇对山羊精液常温保存效果的影响

为研究白藜芦醇对山羊精液常温保存效果的影响，实验通过假阴道法采集健康黑头山羊精液，在基础稀释液中分别添加0、25、50、100、200μmol/L白藜芦醇溶液，常温保存过程中检测精子活力、质膜完整率、顶体完整率、活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)水平。结果表明：与0μmol/L组相比，在基础稀释液中添加白藜芦醇能提高黑头山羊常温保存精子的活力、质膜完整率和顶体完整率(P<0.05)，并提升精液T-AOC水平，降低ROS及MDA含量(P<0.05)；其中黑头山羊精液常温保存时白藜芦醇的适宜添加浓度为25μmol/L。本研究证实了在精液稀释液中添加白藜芦醇可改善黑头山羊常温保存的精液品质，保存3 d对母羊受胎率无显著影响。     

安石榴甙对湖羊精液低温保存效果的影响

为探究安石榴甙对湖羊精液低温保存效果的影响,本实验采集3只1～2岁健康成年湖羊精液,混匀后取5份等量精液,按1:9的比例加入不同安石榴甙浓度（0、5、15、30、45μmol/L安石榴甙）的稀释液,4℃保存7 d。检测精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位（MMP）、活性氧（ROS）含量、丙二醛（MDA）含量、过氧化氢酶（CAT）活性等指标。结果显示：保存4～7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子活率、活力显著高于其他各组;保存2～7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子质膜完整率、顶体完整率显著高于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子的MMP显著高于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组精子ROS含量显著低于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液MDA含量显著低于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液CAT活性显著高于其他各组。本研究结果表明,在稀释液中添加30μmol/L安石榴甙可以显著提高精液保存质量。     

不同浓度肝素对塔里木马鹿精子体外获能效果的影响

为了探讨不同浓度肝素对塔里木马鹿精子体外获能的影响,试验随机取塔里木马鹿冻融精子,添加到SP-TALIP获能液中并添加不同浓度(0,10,20,50,100μg/m L)的肝素,在显微镜下检测0,2,4,6,8小时时的精子活力,试验采用金霉素(CTC)染色法检测精子获能率及顶体反应率等指标,探讨不同浓度肝素对塔里木马鹿精子活力、存活时间、获能率、顶体反应率的影响。结果表明:精子活力随肝素浓度升高而呈下降趋势,4 h后10μg/m L和20μg/m L肝素组精子活力显著高于其他组(P0.05),其中20μg/m L肝素组精子存活时间最长,显著高于其他组(P0.05)。随着培养时间的延长,各试验组精子获能率与对照组相比明显提高,2小时、4小时时20μg/m L肝素组精子获能率显著高于其他组(P0.05);各试验组精子顶体反应率与对照组相比有升高趋势。说明获能液中添加20μg/m L肝素可有效诱导塔里木马鹿精子体外获能。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对牛冷冻精液品质及受精能力的影响

本试验旨在探究牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对精液品质及受精能力的影响。在牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度(0、5、10和20μmol·L~(-1))EGCG,38.5℃孵育1h后,检测精子动力学参数、结构完整性、精子中相关酶活力和体外受精能力。结果表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理显著提高了精子活力(TM,%)和鞭打频率(BCF,Hz,P0.05);与对照组相比,5、10和20μmol·L~(-1)EGCG处理组精子质膜和顶体完整率显著升高(P0.05);5和10μmol·L~(-1 )EGCG处理组精子线粒体膜完整率显著升高(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理能够显著提高精子中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,10μmol·L~(-1 )EGCG处理降低乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理显著提高了精子受精后早期胚胎卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理牛冷冻-解冻精液能提高精液品质及受精能力。