三穗麻鸭Cofilin2基因序列分析及其组织表达研究

为探究三穗麻鸭丝切蛋白2（Cofilin2）基因特征及其在鸭组织中的表达规律,试验根据GenBank中鸡Cofilin2基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得目的基因,利用生物信息学软件分析三穗麻鸭Cofilin2基因特征,实时荧光定量PCR方法检测Cofilin2基因在三穗麻鸭不同组织中的表达情况。结果显示,三穗麻鸭Cofilin2基因编码区大小为498 bp,可编码166个氨基酸;三穗麻鸭Cofilin2基因序列与鸡、猕猴、牛、小鼠、安大略鲑、人和猪相应序列的同源性分别为94.4%、91.6%、91.6%、87.6%、77.7%、70.5%和69.5%;系统进化树显示,Cofilin2基因在不同物种进化过程中高度保守;Cofilin2基因编码蛋白的二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,三级结构呈弯曲螺旋结构;实时荧光定量PCR检测显示,三穗麻鸭Cofilin2基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺、十二指肠、腿肌和法氏囊等组织器官中均有不同程度表达,其中心脏中表达量最高,法氏囊中表达量最低。本试验结果为三穗麻鸭抗病分子机理研究奠定了基础。     

三穗麻鸭JAK2基因克隆与序列分析研究

为了解三穗鸭JAK2基因特征,采用分段PCR方法获取三穗麻鸭JAK2基因并进行克隆与测序,应用生物信息学相关软件进行基因分子特征分析。结果:三穗麻鸭JAK2基因全长3 393 bp,可编码1 131个氨基酸;与原鸡的核苷酸序列同源性达94.5%,氨基酸同源性达97.6%;进化树分析显示,该基因与鸡属动物亲缘关系最近。     

三穗麻鸭白细胞介素2基因的克隆与序列分析

根据GenBank发表的鸭白细胞介素2(IL-2)基因序列,设计合成一对特异性引物,从刀豆蛋白A(ConA)诱导的三穗麻鸭颈外周血淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增三穗麻鸭IL-2基因并进行克隆与序列分析。测序结果表明,三穗麻鸭IL-2基因编码区序列全长为423bp,共编码140个氨基酸,预测的分子式为C695H1125N175O226S13。序列分析显示,三穗麻鸭与绿头鸭、番鸭、绍兴麻鸭的IL-2基因核苷酸同源性最高(为98.3%);与其它水禽IL-2蛋白氨基酸序列相比,在29(N/D)、32(K/T)、49(D/N)、58(T/K)、90(K/N)、105(M/T)、122(N/K)和129(Q/R)存在8处氨基酸位点变异,仅有L66、C68、E72和F1274个氨基酸是三穗麻鸭和人与其它动物IL-2均保守的位点。本研究对进一步研究三穗麻鸭IL-2的生物学功能以及开发疫苗免疫佐剂奠定了基础。     

三穗麻鸭SOCS1基因克隆及序列分析

为了分析三穗麻鸭细胞因子信号传导抑制蛋白(suppressors of cytokine signaling,SOCS)基因分子特征,预测其编码蛋白的生物学功能,本试验对三穗麻鸭SOCS1基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,应用生物信息学方法对三穗麻鸭SOCS1基因进行序列分析,并对其编码蛋白的二级结构、保守结构域、跨膜结构域、信号肽和三级结构进行预测。结果显示,三穗麻鸭SOCS1基因全长为624bp,可编码207个氨基酸;与大雁、原鸡、非洲爪蟾、猪、牛、人、大鼠和草鱼相应序列核苷酸序列同源性分别为97.6%、92.6%、68.3%、65.0%、64.8%、64.5%、63.5%和58.2%,氨基酸序列同源性分别为99.5%、96.6%、69.2%、64.0%、64.0%、67.9%、65.4%和50.8%;系统进化树显示,三穗麻鸭与大雁亲缘关系最近;编码蛋白的二级结构由无规则卷曲、α-螺旋、β-转角和延伸链组成,具有一个中央SH2区和SOCS盒,且无跨膜区和信号肽区域;三级结构呈弯曲螺旋结构。本试验结果为三穗麻鸭SOCS1基因编码蛋白的生物学功能研究奠定了理论基础。     

三穗麻鸭SOCS1基因克隆及序列分析

为了分析三穗麻鸭细胞因子信号传导抑制蛋白（suppressors of cytokine signaling,SOCS）基因分子特征,预测其编码蛋白的生物学功能,本试验对三穗麻鸭SOCS1基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,应用生物信息学方法对三穗麻鸭SOCS1基因进行序列分析,并对其编码蛋白的二级结构、保守结构域、跨膜结构域、信号肽和三级结构进行预测。结果显示,三穗麻鸭SOCS1基因全长为624 bp,可编码207个氨基酸;与大雁、原鸡、非洲爪蟾、猪、牛、人、大鼠和草鱼相应序列核苷酸序列同源性分别为97.6%、92.6%、68.3%、65.0%、64.8%、64.5%、63.5%和58.2%,氨基酸序列同源性分别为99.5%、96.6%、69.2%、64.0%、64.0%、67.9%、65.4%和50.8%;系统进化树显示,三穗麻鸭与大雁亲缘关系最近;编码蛋白的二级结构由无规则卷曲、α-螺旋、β-转角和延伸链组成,具有一个中央SH2区和SOCS盒,且无跨膜区和信号肽区域;三级结构呈弯曲螺旋结构。本试验结果为三穗麻鸭SOCS1基因编码蛋白的生物学功能研究奠定了理论基础。     

贵州省三穗麻鸭生理常值测定

三穗麻鸭是我省蛋用型地方良种之一,盛产于我省三穗县及省的南部、东部和东南部的30多个县。三穗麻鸭体型中等,头小、喙短、眼着生较高,体躯似“船形”,羽毛呈深浅不同的麻色、笋壳色和瓦灰色,蹼为橙红色,喙、爪呈黑色,有绿色镜尾,成熟早,生长发育快,抗病力强,产卵率高,年     

山麻鸭SCA-2基因克隆、生物信息学及组织表达谱分析

为了探究Struthiocalcin-2(SCA-2)基因在山麻鸭蛋壳形成过程中的作用,试验选择9只产蛋高峰期(30周龄)的健康山麻鸭,采用SMART-RACE方法对山麻鸭SCA-2基因cDNA序列进行克隆,运用生物信息学软件对SCA-2基因编码蛋白质的理化性质、二级和三级结构进行预测及分析,构建SCA-2基因系统进化树;采集试验山麻鸭心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸肌、肌胃、下丘脑、垂体、卵巢,以及输卵管的漏斗部、膨大部、峡部和子宫部共14个组织,每3只做一次混样处理,每个组织共3个重复,提取组织RNA,通过实时荧光定量PCR分析SCA-2基因mRNA在上述组织中的相对表达量。结果表明：SCA-2基因的cDNA全长为726 bp,该基因编码蛋白的分子式为C₈₃₆H₁₂₄₇N₂₂₉O₂₄₇S₈,属于不稳定蛋白,其中丝氨酸(12.6%)、亮氨酸(12.0%)、丙氨酸(10.2%)含量较高;蛋白质的二级结构中,α螺旋占23.35%、β折叠占13.77%、无规卷曲占62.87%,且包...     

巴马小型猪OCA2基因序列、组织表达分析及载体构建研究

旨在为猪的毛色调控机制和模拟与OCA2基因相关的人类疾病模型的研究建立基础。本研究将GenBank公布的猪OCA2基因序列(NC_010457.4)所缺失的5个外显子(20~24号外显子)进行了克隆和划分,在基因组水平和cDNA水平上采用PCR扩增和Sanger测序方法对划分结果进行了验证;并对OCA2基因进行生物信息学分析,同时在广西巴马小型猪中对OCA2基因外显子的多态位点进行了筛选。采用实时荧光定量PCR技术(Q-PCR)分析了OCA2基因在各组织中的表达规律,并以皮肤全长cDNA为模板构建重组表达质粒,并利用XhoⅠ和SacⅡ限制性内切酶进行双酶切验证。在已公布的猪OCA2基因中成功划分和克隆了所缺失的外显子,并在OCA2基因所有外显子中共发现了10个SNPs位点,其中7个为同义突变,3个为错义突变(R124H、G509D、R573H);猪OCA2基因在多种组织中广泛表达,其中,肺、大脑、小脑相对高表达,脾、胃、盲肠和皮肤中度表达,而在心和肝中表达量较低;OCA2基因重组表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建成功。本研究初步探讨了猪OCA2基因的序列信息及组织表达规律,并构建了OCA2基因重组表达质粒,为该基因下一步的功能学研究及疾病模型的研究奠定了基础。     

赤水乌骨鸡ExFABP基因序列生物信息学及组织表达分析

本研究旨在对赤水乌骨鸡的ExFABP基因编码区（Coding Sequence,CDS）序列进行测序及生物信息学分析,检测其在不同组织中的表达,探究ExFABP对赤水乌骨鸡肉质性能的影响。运用RT-PCR对赤水乌骨鸡ExFABP基因的编码区序列进行扩增测序,并对其氨基酸序列进行生物学特性分析,构建物种进化树揭示亲缘关系,同时通过实时荧光定量PCR检测了赤水乌骨鸡不同组织中ExFABP的差异表达情况。结果显示,赤水乌骨鸡ExFABP基因编码区长537 bp,编码178个氨基酸。赤水乌骨鸡ExFABP编码氨基酸序列与原鸡的同源性最高,达到100%。系统进化树分析表明,赤水乌骨鸡与原鸡的亲缘关系最近。ExFABP基因在各组织中均有表达,在肺脏中的表达量最高,显著高于其他组织,在胸肌中的表达量最低。研究结果为进一步研究改善赤水乌骨鸡肉品质、风味提供基础材料。     

不同新城疫疫苗对贵州三穗麻鸭的免疫效果比较

为探讨不同新城疫（ND）疫苗对贵州三穗麻鸭的免疫效果,选用NDⅠ系活疫苗（CS2株）、Ⅳ系灭活疫苗（LaSota株）和重组基因Ⅶ型NDV灭活疫苗（A-Ⅶ株）分别对三穗麻鸭进行免疫实验,检测疫苗最小免疫剂量、免疫鸭的抗体滴度和消长规律,以及病毒感染免疫鸭后的排毒情况。结果显示,活疫苗CS2株、灭活疫苗LaSota株、灭活疫苗A-Ⅶ株的最小免疫剂量分别为1.0 mL/只、0.5 mL/只和0.2 mL/只;3种疫苗2次免疫要高于1次免疫产生的抗体滴度,但各免疫组不同免疫次数鸭的抗体滴度均在第60天达到高峰,其中以灭活疫苗A-Ⅶ株1次或2次免疫诱发的抗体滴度最高（分别为7.5log2和8.1log2）,并且抗体持续期长,在免疫后第150天抗体水平仍能达到免疫保护要求;对免疫鸭的排毒检测发现,活疫苗CS2株免疫后的鸭持续排毒,灭活疫苗LaSota株免疫后的鸭排毒量少且时间短,而灭活疫苗A-Ⅶ株免疫后的鸭未检测到排毒。试验结果表明,重组基因Ⅶ型NDV灭活疫苗（A-Ⅶ株）在免疫剂量、免疫次数、免疫鸭的抗体滴度和持续时间,以及抑制免疫鸭排毒方面均明显优于传统ND疫苗。     

鸡冷诱导RNA结合蛋白基因序列分析及组织表达

为研究鸡冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)基因的结构特征和组织定量分布情况,根据GenBank中原鸡CIRP基因(NM-001031347)的编码区序列自行设计引物,从健康雏鸡脾脏中扩增青脚麻羽鸡CIRP基因的编码区(CDS)并进行生物信息学分析;设计引物建立实时荧光定量RT-PCR,检测CIRP mRNA在雏鸡各组织器官中的分布及相对表达水平。结果显示,鸡CIRP基因CDS区全长573bp,编码190个氨基酸,其氨基端包含一个RNA结合域,羧基端富含RGG重复序列,推导的多肽链羧基端比鸭、斑胸草雀及哺乳动物要多18个氨基酸;CIRP基因在鸡各被检组织器官中均有表达,相对表达水平由低到高分别为法氏囊、肺脏、胰腺、胸腺、脾脏、睾丸、盲肠扁桃体、心脏、脑、肾脏、哈德氏腺、肝脏。本研究为进一步探讨鸡CIRP基因的遗传进化及其在病原感染中的作用提供了参考。     

陆川猪PDK4基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析

试验旨在了解陆川猪丙酮酸脱氢激酶4（pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4）基因CDS区序列信息及其所编码蛋白的结构和功能,构建PDK4基因的真核表达载体,分析PDK4基因在陆川猪不同组织中的表达情况,以期为阐明PDK4基因在陆川猪生长发育过程中的分子机制奠定基础。采用RT-PCR技术扩增陆川猪皮下脂肪PDK4基因CDS区,利用生物信息学软件预测分析其结构与功能,并利用常规分子克隆技术将其插入真核表达载体中获得pEGFP-N1-PDK4,用脂质体法将重组质粒转染3T3-L1细胞并观察荧光,用实时荧光定量PCR检测PDK4基因mRNA在陆川猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、皮下脂肪中的表达情况。结果显示,陆川猪PDK4基因CDS区全长1 224 bp,编码407个氨基酸,与NCBI上公布的野猪PDK4基因CDS区同源性达99.8%。对陆川猪PDK4基因所编码的蛋白进行生物信息学分析发现,其分子质量约为46.144 ku,原子总数为6 509个,理论等电点（pI）为7.21,带正电荷和负电荷的氨基酸数均为42个。PDK4蛋白可能有2个N-糖基化位点、33个磷酸化位点。亚细胞定位结果发现,PDK4蛋白有34.8%存在于线粒体,30.4%存在于细胞质,26.1%存在于细胞核,质膜和液泡膜各占4.3%。细胞试验发现,对照组和试验组均发出荧光,相较于对照组,试验组中PDK4表达量极显著升高（P<0.01）,PDK4基因在皮下脂肪中表达丰度最高,随之为肝脏、肺脏、心脏、脾脏和肾脏,在背最长肌中表达量最低,而且在皮下脂肪中的表达量极显著高于背最长肌（P<0.01）。本试验成功扩增出PDK4基因CDS区并构建了真核表达载体,成功对其结构和功能进行预测分析,为研究陆川猪皮下脂肪沉积的遗传改良提供了参考依据。     

陆川猪PDK4基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析

试验旨在了解陆川猪丙酮酸脱氢激酶4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)基因CDS区序列信息及其所编码蛋白的结构和功能,构建PDK4基因的真核表达载体,分析PDK4基因在陆川猪不同组织中的表达情况,以期为阐明PDK4基因在陆川猪生长发育过程中的分子机制奠定基础。采用RT-PCR技术扩增陆川猪皮下脂肪PDK4基因CDS区,利用生物信息学软件预测分析其结构与功能,并利用常规分子克隆技术将其插入真核表达载体中获得pEGFP-N1-PDK4,用脂质体法将重组质粒转染3T3-L1细胞并观察荧光,用实时荧光定量PCR检测PDK4基因mRNA在陆川猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、皮下脂肪中的表达情况。结果显示,陆川猪PDK4基因CDS区全长1 224 bp,编码407个氨基酸,与NCBI上公布的野猪PDK4基因CDS区同源性达99.8%。对陆川猪PDK4基因所编码的蛋白进行生物信息学分析发现,其分子质量约为46.144 ku,原子总数为6 509个,理论等电点(pI)为7.21,带正电荷和负电荷的氨基酸数均为42个。PDK4蛋白可能有2个N-糖基化位点、33个磷酸化位点。亚细胞定位结果发现,PDK4蛋白有34.8%存在于线粒体,30.4%存在于细胞质,26.1%存在于细胞核,质膜和液泡膜各占4.3%。细胞试验发现,对照组和试验组均发出荧光,相较于对照组,试验组中PDK4表达量极显著升高(P0.01),PDK4基因在皮下脂肪中表达丰度最高,随之为肝脏、肺脏、心脏、脾脏和肾脏,在背最长肌中表达量最低,而且在皮下脂肪中的表达量极显著高于背最长肌(P0.01)。本试验成功扩增出PDK4基因CDS区并构建了真核表达载体,成功对其结构和功能进行预测分析,为研究陆川猪皮下脂肪沉积的遗传改良提供了参考依据。     

去谷壳酱香型白酒酒糟高蛋白饲料对三穗麻鸭的饲喂效果

为评价去谷壳酱香型白酒酒糟高蛋白饲料饲喂三穗麻鸭的效果,选取24日龄健康三穗麻鸭120羽,随机分成对照组和实验组,对照组饲喂主料为玉米(质量分数64.87%)、豆饼(质量分数19.40%)、麦麸(质量分数6.30%)、玉米DDGS(质量分数5.00%)的基础日粮,实验组饲喂实验日粮(以去谷壳酱香型白酒酒糟高蛋白饲料等量替代基础日粮中的玉米DDGS),实验期为50 d。结果显示：实验组三穗麻鸭40日龄、74日龄的体重分别较对照组提高2.47 g/羽和15.07 g/羽,但2组间无显著差异(P>0.05);与对照组相比,实验组三穗麻鸭日增重提高1.85%、料肉比降低1.76%(P>0.05);实验结束时(74日龄),2组三穗麻鸭体尺指标无显著差异(P>0.05)。结果表明：去谷壳酱香型白酒酒糟高蛋白饲料具有较高的饲用价值,可以作为玉米DDGS替代品饲喂三穗麻鸭。     

OPN基因序列分析及其在产蛋后期鸡胫骨中的表达研究

试验旨在研究鸡骨桥蛋白（osteopontin,OPN）基因的结构与功能,并探索其在蛋鸡产蛋后期骨骼组织中的表达特性。采集产蛋后期海兰灰蛋鸡胫骨组织进行RNA提取,根据GenBank数据库中公布的中国原鸡OPN基因序列（登录号：NC_006091.5）,利用Primer Premier 3.0在线软件设计引物,利用RT-PCR扩增OPN基因编码区（coding sequence,CDS）并对其进行生物信息学分析,实时荧光定量PCR检测海兰灰产蛋后期胫骨组织中OPN基因mRNA的表达。RT-PCR及测序结果显示,鸡OPN基因CDS区长795 bp,共编码264个氨基酸。应用Mega 6.0软件构建系统发育树发现,鸡与鹌鹑的亲缘关系最近,同源性为100%,OPN基因在禽类进化的过程中具有高度保守性。生物信息学分析表明,OPN为不稳定的水溶性蛋白,含有信号肽,无跨膜结构域,有27个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和34个磷酸化位点,亚细胞主要定位于细胞质（44.4%）和线粒体（33.3%）,二级结构主要是无规则卷曲和α-螺旋。实时荧光定量PCR结果表明,OPN基因mRNA在胫骨中的表达存在个体差异,但与骨骼强度无关。结果表明,蛋鸡产蛋后期OPN基因表达与骨断裂强度无显著相关,为进一步研究OPN基因在产蛋后期蛋鸡骨代谢中的作用机制提供依据。     

OPN基因序列分析及其在产蛋后期鸡胫骨中的表达研究

试验旨在研究鸡骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因的结构与功能,并探索其在蛋鸡产蛋后期骨骼组织中的表达特性。采集产蛋后期海兰灰蛋鸡胫骨组织进行RNA提取,根据GenBank数据库中公布的中国原鸡OPN基因序列(登录号:NC_006091.5),利用Primer Premier 3.0在线软件设计引物,利用RT-PCR扩增OPN基因编码区(coding sequence,CDS)并对其进行生物信息学分析,实时荧光定量PCR检测海兰灰产蛋后期胫骨组织中OPN基因mRNA的表达。RT-PCR及测序结果显示,鸡OPN基因CDS区长795 bp,共编码264个氨基酸。应用Mega 6.0软件构建系统发育树发现,鸡与鹌鹑的亲缘关系最近,同源性为100%,OPN基因在禽类进化的过程中具有高度保守性。生物信息学分析表明,OPN为不稳定的水溶性蛋白,含有信号肽,无跨膜结构域,有27个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和34个磷酸化位点,亚细胞主要定位于细胞质(44.4%)和线粒体(33.3%),二级结构主要是无规则卷曲和α-螺旋。实时荧光定量PCR结果表明,OPN基因mRNA在胫骨中的表达存在个体差异,但与骨骼强度无关。结果表明,蛋鸡产蛋后期OPN基因表达与骨断裂强度无显著相关,为进一步研究OPN基因在产蛋后期蛋鸡骨代谢中的作用机制提供依据。     

山麻鸭OC-116基因克隆、生物信息学及组织表达谱分析

实验旨在探究OC-116(Ovocleidin-116)基因在山麻鸭蛋壳形成过程中的作用,应用SMART-RACE技术克隆获得了长度为2129 bp的山麻鸭OC-116基因cDNA全长序列,运用生物信息学软件对该基因和蛋白的特征进行分析,结果显示:该基因编码蛋白的分子式为C2710H4331N865O927S12,属于...     

山麻鸭品系繁育及其应用研究

品系繁育是促进品种不断提高和发展的一项重要措施。它可以加速现有品种的改良,促进新品种或新品系育成,充分利用杂种优势。品系繁育首先是在品种内建立各具特点的品系,丰富品种结构,有意识地控制品种内部的差异,促使品种异质性系统化,然后进行品系间杂交,获得优势后代投产。本文介绍品系繁育在山麻鸭育种中的应用。1　品系的数量　为了给品系繁育创造有利条件,并能更充分利用品系繁育技术,迅速有效地提高生产性能。品系繁育需要选择一定数量的优秀个体,在少数高产性能个体中进行品系繁育是不够的。只有建立3个以上的品系,才能在自繁时,稳定…     

表达二穗短柄草CBF2基因拟南芥抗旱性分析

以表达二穗短柄草(Brachypodium distachyon)CBF2基因的拟南芥(Arabidopsis thaliana)为材料,通过模拟干旱胁迫分析其种子和幼苗对甘露醇渗透胁迫的响应和成苗对盆栽条件下水分胁迫的响应。结果表明,渗透压为-0.62MPa时种子萌发率开始下降,转基因拟南芥种子萌发率略高于野生拟南芥,但差异不显著(P0.05)。以根的增长量作为评价幼苗抗旱性的主要标准,当渗透压小于-0.37 MPa时,根长增长量随着胁迫强度的增加而明显减小,转基因株系根长增长量始终显著高于野生型拟南芥(P0.05)。拟南芥成苗干旱胁迫至25d,野生拟南芥成活率为11.7%,转基因植株平均成活率为41.6%;随着干旱胁迫时间的延长,转基因拟南芥过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性均显著高于野生植株,丙二醛含量及相对电导率显著低于野生植株。结果表明,二穗短柄草CBF2基因提高了拟南芥幼苗及成苗的抗旱性。