河流型水牛热休克蛋白70的原核表达及其对精液抗冻性的影响

试验旨在克隆河流型水牛热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）基因的CDS区序列,构建HSP70原核表达载体,诱导表达HSP70融合蛋白,进一步研究HSP70蛋白对水牛精液抗冻性的影响。以摩拉水牛精子基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增HSP70基因CDS区序列,将PCR产物与pET30a质粒连接构建重组原核表达质粒,诱导表达HSP70融合蛋白,将获得的表达蛋白作为稀释液组分添加到水牛精液中制作冷冻精液并评定其活力。结果显示,试验成功扩增获得HSP70基因CDS区长为2 155 bp的片段;SDS-PAGE及Western blotting分析显示,在70 ku处出现一条明显条带,且表达产物可与相应的抗体发生反应;对添加有HSP70蛋白的水牛冷冻精液活力评定结果显示,终浓度为2、4、8 mg/mL的HSP70能提高冷冻精液活力,且8 mg/mL HSP70组冻精活力最高,但各组间差异均不显著（P>0.05）。综上所述,本试验成功表达了水牛HSP70蛋白,获得了高纯度、有活性的HSP70融合蛋白,外源添加HSP70蛋白可提高水牛冷冻精液的活力,为进一步研究水牛HSP70蛋白的抗冻性保护机理奠定了理论基础。     

河流型水牛热休克蛋白70(HSP70)基因CDS序列的多态性分析

为了研究河流型水牛HSP70基因CDS序列的多态性,试验首先从摩拉水牛、尼里/拉菲水牛、槟榔江水牛、地中海水牛冷冻精液中抽提基因组DNA,以基因组DNA为模板扩增获得河流型水牛HSP70基因,对其进行基因克隆,测序,序列分析;其次对26头摩拉水牛、43头尼里/拉菲水牛HSP70基因CDS序列进行测序、高分辨率熔解曲线检测分析。结果显示:河流型水牛的HSP70基因CDS序列长度为1927bp,4个品种HSP70基因CDS序列相似度高达99%以上;摩拉、尼里/拉菲种公牛HSP70基因CDS序列存在相同的SNP位点,分别是C602T、A708T、A1284G,并产生不同的基因型。摩拉公牛HSP70基因CDs区602bp位点、尼里/拉菲602bp位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态。试验结果说明了HSP70基因在进化上具有高度保守性,但在同一群体中存在多态性。     

亚洲水牛热休克蛋白70的纯化、鉴定及表达动力学

本试验旨在研究亚洲水牛热休克蛋白70(heatshock protein70,HSP70)在淋巴细胞中的诱导、纯化和鉴定,同时还研究了HSP70在不同温度和时间段的诱导和表达动力学,用腺苷二磷酸-琼脂糖柱免疫亲和层析法纯化HSP70,并用鼠抗HSP70单克隆抗体经Western blotting法鉴定纯化的蛋白质,水牛淋巴细胞的HSP70分子质量约为68ku,低于牛脑HSP70的分子质量。用间接抑制酶联免疫吸附试验(ELISA)测定纯化的HSP70,纯化后获得大量HSP70。为测定温度和时间变化对HSP70诱导和表达模式的影响,把水牛淋巴细胞分为3个不同温度处理组,即38℃处理48h,之后继续在45℃条件下处理3h;②42℃条件下处理3h;③45℃条件下处理3h。3组细胞活力分别为68%、63%、51%;HSP70水平分别为58.30±4.37、42.59±9.04、21.95±6.79ng/百万细胞。结果表明,较高强度和较长时间的温度辐照造成水牛淋巴细胞HSP70的较高诱导以维持细胞自动调节,然而,淋巴细胞中HSP70的直接诱导依赖于热辐射的大小(应激水平)和热辐射的时间(应激时间)。     

物候节律对河流型水牛精液质量影响的分析

对摩拉水牛和尼里水牛2006—2014年不同季节和节气的射精量、原精活力、精子密度、解冻活力进行测定、记录和统计分析。结果:河流型水牛春季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力平均分别为(4.80±2.063)m L(n=2 216)、(57.61±14.727)%(n=2 209)、(7.79±4.165)亿/m L(n=2 213)和(36.00±2.581)%(n=1 413);夏季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力平均分别为(53.28±2.311)m L(n=2 392)、(60.32±10.515)%(n=2 379)、(8.26±4.250)亿/m L(n=2 389)和(35.99±2.506)%(n=1 823);秋季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力平均分别为(5.28±2.161)m L(n=1 977)、(61.15±16.462)%(n=1 965)、(8.28±4.212)亿/m L(n=1 977)和(36.56±9.897)%(n=1 517);冬季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力平均分别为(5.02±2.019)m L(n=2 350)、(57.11±18.910)%(n=2 337)、(7.68±3.901)亿/m L(n=2 344)和(36.21±2.615)%(n=1 476)。     

热休克蛋白70及其对精子影响作用的研究进展

分子伴侣是正常细胞和细胞损伤不同阶段蛋白质动态平衡的关键决定因素,热休克蛋白70(HSP70)是普遍存在的分子伴侣,具有多种细胞功能.伴侣蛋白通过利用各种独特的机制来维持细胞中正确的蛋白质折叠,以防止分子间的异常相互作用,防止蛋白质聚集以及蛋白质重折叠等,且HSP70在细胞中与辅助伴侣蛋白协同互作,这些辅助伴侣蛋白由J...     

隐孢子虫截短热休克蛋白70(HSP70)基因的原核表达及其抗原性分析

根据Gen Bank上的安氏隐孢子虫HSP70基因主要抗原片段区序列设计特异性引物,用RT-PCR方法扩增出目的片段,构建克隆载体,双酶切后连接到p ET-32a表达载体,成功构建了表达质粒p ET-32a-HSP70。将鉴定正确的重组质粒转化到表达菌中,IPTG诱导表达,表达产物经过SDS-PAGE和Western blot鉴定和分析,证实获得HSP70融合蛋白。以鼠抗安氏隐孢子虫卵囊高免血清为一抗进行Western blot检测,试验结果证实重组HSP70蛋白具有良好的免疫反应性,为建立隐孢子虫病免疫学诊断方法奠定了基础。     

热休克蛋白70诱导剂及其应用

热休克蛋白70(HSP70)是生物体在应激原刺激下合成的一族进化上高度保守的蛋白质。HSP70家族的功能表现在多方面:作为分子伴侣,HSP70在应激状态下帮助需要折叠的蛋白质正确折叠,加快正常蛋白质合成的恢复;在细胞保护方面,HSP70表达的增加可以增强机体对应激的抵抗力,缓解细胞所受伤害。本文主要综述HSP70的生物学特性及其细胞保护作用,并讨论了HSP70诱导剂在畜牧业中潜在的应用意义。     

谷氨酰胺诱导热休克蛋白70表达的研究

选取24只8周龄健康的雌性昆明小白鼠并随机分成4组,Ⅰ组为对照组.尾静脉注射生理盐水,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别注射不同剂量的Gln,注射后4h处死,取肝脏、子宫和卵巢.采用RT-PCR和Western Blot法检测HSP70 mRNA和HSP70的表达.试验结果表明.Gln注射组鼠组织中HSP70表达量均高于对照组,且HSP70表达量随着Gln注射量的增加而增加.Ⅱ组鼠肝脏、子宫和卵巢组织中HSP70蛋白表达量比对照组分别增加了9.49%、5.49%和4.84%(P>0.05);Ⅲ组鼠各组织中HSP70比对照组分别显著(P<0.05)增加了23.56%、21.10%和14.30%:Ⅳ组肝脏组织中HSP70比对照组显著增加了35.33%(P<0.05),子宫和卵巢比对照组分别极显著(P<0.01)增加了33.74%和33.77%.因此.Gln能诱导小鼠肝脏、子宫、卵巢组织细胞HSP70的表达,并且HSP70表达量随着Gln剂量的加大而增加.     

谷氨酰胺对热休克蛋白表达的影响

谷氨酰胺的研究是生理和营养免疫领域研究的热点之一 ,近年来发现当动物处于应激状态下 ,谷氨酰胺不能满足机体需要 ,添加谷氨酰胺有助于增强机体对应激的抵抗能力。热休克蛋白 (HSP)是动物对外界刺激作出应答反应时产生的多肽类物质 ,起减缓应激不良影响、恢复机体正常机能的作用。鉴于最近几年来谷氨酰胺和热休克蛋白关系的研究 ,本文从体内、外试验研究两方面论述了谷氨酰胺对应激细胞的保护作用 ,以及添加谷氨酰胺与提高HSP表达的关系 ,且对其作用机制作了初步的探讨     

热休克蛋白70上调表达对热应激猪小肠上皮细胞凋亡的影响

本试验以谷氨酰胺作为热休克蛋白70(HSP70)诱导剂,从细胞凋亡线粒体信号转导途径探讨HSP70对热应激猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡相关因子的影响。试验以体外培养的猪小肠上皮细胞为模型,分别加入不同浓度(1、2、4、6、8、10 mmol/L)谷氨酰胺的培养基中培养24 h,提取总RNA和总蛋白,用实时荧光定量PCR和Western blot检测HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量,筛选出谷氨酰胺诱导HSP70表达的最佳浓度。取对数生长期的细胞分为3组,分别为对照组(Con组,37℃培养12 h)、热应激组(Hs组,42℃培养12 h)、谷氨酰胺组(Gln组,6 mmol/L谷氨酰胺、42℃培养12 h)。采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HSP70、凋亡酶激活因子-1(Apaf-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA和蛋白的相对表达量。结果表明:谷氨酰胺对HSP70上调表达呈先上升后下降的趋势,6 mmol/L的谷氨酰胺诱导时HSP70 mRNA和蛋白相对表达量最高,显著高于其他浓度(P<0.05),作为后续试验中Gln组的诱导条件。与Con组相比,Hs组细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),HSP70、Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),而Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01)。与Hs组相比,Gln组细胞凋亡率极显著降低(P<0.01),但仍极显著高于Con组(P<0.01);Gln组HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01);Gln组Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01),但极显著高于Con组(P<0.01);Gln组Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),但极显著低于Con组(P<0.01)。由此可见,上调HSP70的表达可有效缓解热应激导致的猪小肠上皮细胞凋亡。     

热休克蛋白70的研究进展

热休克蛋白（HSP）是生物细胞在受热、生物应激、理化因素等应激原刺激后所产生的一类在生物进化中最保守的蛋白，其中HSP70是最受关注、研究最为深入的一种。随着研究的深入，在生物学的功能不断被发现的同时，HSP70的应用前景也变得越来越广泛。     

牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70的克隆与原核表达重组质粒的构建

为了构建牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70(HSP70)基因片段原核重组表达质粒,本试验根据Gen-Bank上登录的牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70基因序列(D12692.1),应用Primer Premier 5.0软件设计合成一对特异性引物,以牛瑟氏泰勒虫DNA为模板,扩增片段大小为1 692bp,与参考序列的同源性为99%。将该基因与pET-28a(+)载体进行连接,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSP70,本试验为进一步研究牛瑟氏泰勒虫HSP70基因佐剂作用、研制基因工程疫苗奠定了基础。     

热休克蛋白70研究新进展

1962年,Ritassa在果蝇的研究中首次发现,短暂的热休克可以诱导唾液腺染色体出现3个膨突,提示这一区带转录加强,他将这一现象称为“热休克反应“(heat shock response,HSR).1974年,Tissieres发现热休克反应中转录合成的为一组特殊蛋白,而且伴随着这类蛋白的合成,细胞的其他蛋白合成却受到抑制,由于这类蛋白的合成与热休克反应有关,故命名为热休克蛋白(heat shock protein,HSP).除了高热之外,多种应激原如重金属、饥饿、缺氧、缺血等都可以诱导HSP的表达,但人们习惯上仍称为HSP或热应激蛋白(heat stress protein,HSP),有时也称为应激蛋白(stress protein,SP).……     

热应激对肉鸡的影响及热休克蛋白70的研究进展

在现代化畜禽生产中,热应激已成为制约肉鸡生长、代谢、肉品质及生理功能的重要因素之一,给养殖业带来了严重的经济损失。热应激蛋白（heat shock protein,HSPs）是动物在不良因素作用下所产生的一组特异性蛋白质,而HSP70是其家族成员中最保守、最重要的蛋白之一;它具有分子伴侣、热耐性,抗过氧化损伤等特性,能够使机体迅速适应环境变化,在热应激保护中发挥了重要的作用。作者主要阐述了热应激对肉鸡的影响和HSP70的生物学特点及其抗热应激的作用机理,以期为从药物方面探讨HSP70的抗应激功能提供理论依据。     

中药复方对热刺激大鼠空肠热休克蛋白70的影响

为探讨中药复方的抗热应激机理,以大鼠为热应激模型,热应激条件为41℃,2 h。用Real-time PCR和ELISA方法检测了中药复方对热刺激后空肠组织中Hsp70的表达。结果显示,高温刺激后大鼠空肠组织中Hsp70的mRNA和蛋白表达均升高(P0.01),且中药组Hsp70表达高于热应激组(P0.01),说明中药复方能通过诱导Hsp70的表达来抵抗高温对机体造成的热刺激。     

Kisspeptin对热应激大鼠脑抗氧化性能和热休克蛋白70 mRNAs表达的影响

本试验旨在探讨神经肽kisspeptin对热应激大鼠脑抗氧化性能、热休克蛋白70mRNA表达及肾上腺、胸腺及脾指数的影响。本试验使用试剂盒检测大鼠脑内GSH-Px、T-SOD活力和T-AOC及MDA含量,并用荧光定量方法检测热应激休克蛋白mRNA的表达。热应激导致脑组织中MDA含量极显著升高,T-SOD、GSH-Px活力及T-AOC极显著下降,热休克蛋白mRNAs表达极显著升高,肾上腺、胸腺和脾指数降低;与热应激组相比,注射kisspeptin热应激组中脑MDA的含量显著减少,GSH-Px、T-SOD活性和T-AOC显著升高,热休克蛋白mRNAs表达显著下降,肾上腺、胸腺和脾指数上升;与对照组相比,单纯注射kisspeptin组中GSH-Px、T-SOD活力和T-AOC显著升高,MDA含量显著降低而热休克蛋白mRNAs并未发生明显变化。以上结果说明kisspeptin可缓解热应激引起的大鼠脑中应激损伤。     

冷应激对湖羊血清因子及热休克蛋白70 mRNA表达的影响

为研究冷应激对湖羊免疫系统及热休克蛋白70(heat stress proteins 70,Hsp70)的影响,试验分别采用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测冷应激前后湖羊肝脏、肺脏、脾脏、淋巴结组织中Hsp70mRNA表达量及血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)浓度。结果显示,与冷应激前相比,冷应激后湖羊肝脏、肺脏及脾脏组织中Hsp70mRNA表达量均极显著增加(P0.01),其中肝脏的表达量尤为显著;冷应激后湖羊血清中IL-2、IL-4的浓度均呈下降趋势,其中IL-4浓度下降尤为显著(P0.01)。结果表明,冷应激条件下湖羊各组织中Hsp70mRNA表达增强,可提高动物机体的自我保护机能,增强对外界不良刺激的抵抗力,但细胞因子IL-2和IL-4的浓度下降,表明冷应激抑制机体免疫系统。     

谷氨酰胺对热休克蛋白70的诱导及其抗应激作用

热休克蛋白是机体受到应激原的刺激后所产生的几高度保守的蛋白质,对维持细胞生存和内环境的稳定着重要作用。其中热休克蛋白70是最重要的一种,它大多数生物中含量最多,在细胞应激后生成最显著。休克蛋白具有多种生物学功能,包括分子伴侣功能、参与免疫反应、抗细胞凋亡功能、抗氧化功能、提高细胞的应激耐受性、促进细胞增殖、参与细胞骨架的形成和修复等等,     

水牛ghrelin基因原核表达载体构建与蛋白表达

为了研究水牛ghrelin基因的结构与功能,本试验对水牛ghrelin基因进行原核表达载体构建与融合蛋白表达条件的优化。采用RT-PCR方法从水牛胃组织的总RNA中扩增出ghrelin编码区,连接到pRSET-a载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆子,用IPTG进行诱导表达条件的优化。结果表明,成功构建原核表达载体pRSET-a-ghrelin,在2 mmol/L IPTG,37℃的条件下诱导表达4 h,水牛ghrelin重组蛋白可成功获得表达,经SDS-PAGE鉴定发现,ghrelin融合蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为20 ku,其表达量占总菌体蛋白量的35%。本试验结果为进一步研究水牛ghrelin基因的结构和功能提供有价值的生物学信息。     

中药对急性热应激小白鼠肺、肾脏的热休克蛋白70及热休克因子1表达量的影响

文章旨在研究中药对急性热应激小白鼠肺、肾脏的热休克蛋白70及热休克因子1表达量的影响。试验选用体质健康,体重基本一致的6～7周龄健康SPF级昆明小白鼠90只,将其随机分为7组,分别为复方一组、复方二组和复方三组、紫锥菊组、王老吉组、阳性空白对照组、阴性空白对照组,每组10只。在试验第1、3小时每组取5只小白鼠,采用ELISA法测定小白鼠肺、肾脏组织热休克蛋白70(HSP70)和热休克因子1(HSF1)表达量。结果显示,中药复方组能有效提高热应激小白鼠肺脏和肾脏HSP70表达量,复方一,复方二和紫锥菊能提高热应激小鼠肺脏HSP70的含量,复方三和王老吉组能缓解其下降幅度。高热应激过程中小白鼠肺脏HSF1表达量呈上升趋势,复方二能显著提高肺脏HSF1的表达量;但肾脏HSF1的表达量却呈下降趋势,这与肾脏HSP70高表达有关。结果表明,在此试验中,通过HSP70的表达量变化阐明了中药对急性热应激的预防保护能力。