猪流行性腹泻病毒荧光抗体的制备及应用

本研究旨在建立一种可辅助猪流行性腹泻病毒（PEDV）分离鉴定的直接荧光抗体检测方法。借助基因工程技术融合表达PEDV S1基因中和抗原表位区域（COE）,层析柱法纯化兔源免疫球蛋白IgG,搅拌法标记荧光素。通过Western blotting和动物免疫试验测定表达融合蛋白的抗原性,间接ELISA方法测定免疫后的抗体效价,直接免疫荧光法测定标记荧光抗体的特异性,梯度稀释方法测定标记抗体的最佳工作浓度。结果显示,本研究成功将423 bp的S1基因中和抗原表位COE进行融合表达,表达蛋白大小约40 ku,蛋白命名为pGEX-6P/COE;Western blotting检测结果表明,融合蛋白具有良好的反应原性;ELISA检测结果显示,免疫后35 d的血清抗体效价达1：25 600;与猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PoRV）、猪瘟病毒（CSFV）及猪细小病毒（PPV）等均无非特异性反应,标记的荧光抗体具有良好的特异性,最佳工作稀释度为1：32~1：64。综上所述,本试验制备的直接免疫荧光抗体可用于细胞平台上的PEDV快速检测,能直观地提供相关检测数据,对于病毒分离过程的取舍具有重要指导意义。     

抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的制备及应用

本试验利用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)SC株免疫产蛋鸡,收集高免卵黄,采用水稀释法和水稀释-盐析法获得鸡源抗PEDV卵黄抗体,采用已建立的ELISA方法对卵黄抗体效价进行测定。以3日龄无母源抗体的易感仔猪为试验动物,对抗PEDV卵黄抗体的治疗效果及安全性进行测定,并进一步利用自然发病猪场的治疗效果进行验证。结果表明,经PEDV SC株细胞毒免疫的鸡可在2次加强免疫后15 d产生高水平的特异性抗体。在实验室治疗试验中,攻毒治疗组仔猪的存活率达60%,攻毒对照组存活率为20%;用于自然发病猪场时,饲喂抗PEDV卵黄抗体饲料的仔猪存活率亦为60%,而自然发病对照组的存活率为10%。以上结果表明抗PEDV卵黄抗体对感染PEDV的仔猪有一定治疗作用。     

猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的制备与应用

用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)SD株免疫产蛋鸡,收集卵黄制备出特异性PEDV抗体。人工感染后治疗结果显示,一次抗体治疗组可减少死亡率50.0个百分点,两次抗体治疗组可减少死亡率83.3个百分点;3家自然发病猪场的临床应用表明,相较于对照组,抗体治疗组可减少仔猪死亡率分别为67.7个百分点、57.0个百分点和77.5个百分点。     

猪流行性腹泻病毒卵黄抗体制备及抗体水平检测

利用猪流行性腹泻病毒(PEDV)SC株免疫产蛋鸡,收集高免卵黄,获得鸡源抗PEDV卵黄抗体,建立ELISA方法对卵黄抗体进行测定。跟踪监测在3次免疫期间及之后的18个月卵黄抗体在免疫鸡只所产卵黄中的消长规律。收集第3次免疫后15 d的高免卵黄,经盐析法提纯后封装分别储存于4℃、-20℃、-80℃和冻干后储存于-20℃4种条件下,定期对不同条件下储存的样品进行检测。监测结果显示冻干后储存于-20℃条件下,卵黄抗体保存状况最佳。     

猪流行性腹泻病毒与猪流行性腹泻

正猪流行腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronaviridae)成员,可造成新生仔猪的急性腹泻、呕吐、脱水等临床症状并使新生仔猪呈现高死亡率;该病毒可引起育肥猪以及成年母猪腹泻或是隐性感染。PEDV首先在欧洲发现并报道,并迅速     

抗猪流行性腹泻病毒纳米单链抗体CNC-CBD-scFv的制备及鉴定

为防治猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),本文制备纳米化抗PEDV单链抗体(single-chain fragment,scFv)并验证其生物学特性。通过PCR方法扩增含有纤维素结合结构域(cellulose binding domain,CBD)的单链抗体基因CBD-scFv,构建抗PEDV的原核重组表达载体pET19b-CBD-scFv,鉴定正确后进行蛋白表达与鉴定。经硫酸水解法制备纳米纤维素(cellulose nanocrystal,CNC)后,将纯化复性后的CBD-scFv蛋白与CNC孵育结合得到纳米抗体CNC-CBD-scFv,通过SDS-PAGE和透射电镜鉴定复合物的结合效果。SDS-PAGE与Western blot结果表明抗体蛋白CBD-scFv正确表达;制备的纳米纤维素粒度均达到纳米材料级别;CNC与CBD-scFv结合后SDS-PAGE与透射电镜结果说明CNC与CBD-scFv在室温条件下可高效结合。本试验在高效表达合成复合纳米抗体材料的同时为PEDV的防治及应用奠定了一定的试验基础。     

抗猪流行性腹泻病毒高免卵黄抗体的制备及临床应用研究

猪流行性腹泻具有发病急、传播快、发病率与死亡率高、波及面广等特点。近年来,在全国范围内爆发频繁。本试验主要制备一种高免卵黄抗体,并研究其在预防和治疗上的效果。研究结果表明,制备抗PEDV的特异性高免卵黄抗体对未吃初乳的仔猪保护率达90%,对仔猪流行性腹泻有很好的预防效果,对10日龄以上的仔猪有显著的治疗效果,可应用于临床实践。     

猪流行性腹泻病毒及其卵黄抗体研究进展

猪流行性腹泻病毒是引起仔猪病毒性腹泻甚至死亡的关键诱因,而安全高效的抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体具有降低仔猪腹泻率、死亡率等优点已应用于生猪养殖。本文总结了近年来猪流行性腹泻病毒的致病机理及其卵黄抗体的制备与应用效果的研究进展,为卵黄抗体在防治猪流行性腹泻上的应用提供理论基础和技术指导。     

抗猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒卵黄抗体制备及其临床应用研究

本研究旨在制备猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒高免卵黄抗体,研究其治疗效果。以猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻二联灭活苗免疫产蛋鸡,琼脂扩散方法检测抗体效价达到1∶64时,收集卵黄,采用氯仿抽提和硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体,进行微生物学检测、安全性试验,通过人工感染治疗试验和临床应用,观察其治疗效果。结果人工感染治愈率为100%,临床应用治愈率为88.0%,表明制备的卵黄抗体对猪传染性胃肠炎和流行性腹泻具有显著的治疗效果。     

猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备

猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中,经IPTG诱导并纯化后,所得蛋白用于小鼠免疫,制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达,通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果：Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达,并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10 240的多克隆抗体,该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力;免疫荧光及Western blot结果表明,Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达,且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上,本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体,验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达,为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。     

猪流行性腹泻病毒研究进展

<正>猪流行性腹泻病毒属于冠状病毒科冠状病毒属,是I群冠状病毒的成员。目前对于PEDV感染机理方面的研究较少,2007年猪氨基肽酶(p APN)被证实为PEDV的功能性细胞感染受体,继而又有研究从数量上证实增加p APN的密度可以增大PEDV感染率。PEDV基因组长为27000~33000个核苷酸(nt),靠近3’端5kb区域内有5个主要的开放阅读框(ORF)。编码4种结构蛋白:S蛋白、E蛋白、M蛋白和N蛋白,位于E基因上游的ORF命名为ORF3,编码一个未知功能且具有多态性的产物。     

猪流行性腹泻病毒抗体ELISA检测方法的建立

为检测猪血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体水平,以纯化的PEDV作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV血清IgG抗体的诊断方法:当血清OD_(450nm)值0.31时,判定阳性;当OD_(450nm)值小于0.26时,判定阴性;当OD_(450nm)值介于两者之间判定可疑。结果表明,试验建立的ELISA抗体检测方法可用于检测猪血清中猪流行腹泻病毒抗体、监测猪流行腹泻病的流行情况和评价相关疫苗的免疫效果。     

间接ELISA检测猪流行性腹泻病毒的抗体水平

本研究以猪流行性腹泻病毒细胞培养物中提纯的抗原,组织毒兔获得的高兔血清建立了间接ＥＬＩＳＡ检测ＰＥＤＶ抗体水平。结果表明：包被怕浓度为１：２００００,酶标羊抗猪ＩｇＧ浓度选用１：２５０为测定抗ＰＥＤＶＩｇＧ抗体的最达工作浓度。田间检测结果与临床发病预期结果一致。     

猪流行性腹泻病毒研究进展

猪流行性腹泻病毒是引起猪腹泻的重要病原体之一,广泛流行于世界各地,造成了重大的经济损失。文章阐述了猪流行性腹泻病毒的分子生物学特点,概括了病毒的检测方法,并对近年来流行病学及疫苗的研发情况进行了综述,以期对猪流行性腹泻病毒研究提供帮助。     

猪流行性腹泻病毒M蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗M蛋白单克隆抗体(MAb),本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BALB/c小鼠;以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,得到一株稳定分泌抗M蛋白MAb.MAb亚类鉴定为IgG2b型,轻链为к链,杂交瘤细胞培养上清和诱导的小鼠腹水抗体效价分别为1:3000和1:2×105.Western blot试验表明该MAb能够识别重组及天然的PEDV M蛋白.间接免疫荧光试验表明该MAb能够与PEDV感染的Vero E6细胞产生特异性免疫荧光.     

猪流行性腹泻病毒研究进展及疫苗应用前景

In recent years, the epidemic intensity of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) have continuously enlarged,causing a huge economic losses in pig industry. This paper summarizes the research progress on the isolation and identification,variation, molecular biology of PEDV.This paper based on the current immunity results ot the PEDV vaccines, the research and development direction of PEDV production, with a view to the new, more useful product of PEDV.     

猪流行性腹泻病毒Nsp7蛋白的表达与多克隆抗体制备

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)非结构蛋白7(Nsp7)的结构特征和免疫原性,本研究通过生物信息学分析Nsp7蛋白序列特征及空间结构,在此基础上对Nsp7进行原核表达和纯化,并制备抗Nsp7多克隆抗体。结果显示,Nsp7基因在PEDV不同毒株间高度保守,Nsp7蛋白的三级结构主要由4个α螺旋片组成。SDS-PAGE试验表明,Nsp7在大肠杆菌中获得大量表达,重组蛋白大小为9.2 ku,经纯化后得到单一条带。采用纯化的Nsp7免疫兔制备多克隆抗体,然后经Western blot和间接免疫荧光试验鉴定,多克隆抗体能够特异性识别重组Nsp7蛋白和PEDV感染细胞的Nsp7蛋白,证明Nsp7免疫原性良好,为后续研究Nsp7的功能及研制以Nsp7为检测靶标的PEDV诊断试剂盒奠定基础。     

抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体治疗效果研究

目的:探究分析猪流行性腹泻病毒卵黄抗体治疗效果.方法:选取2017年1月初日龄未吃初乳的猪仔20头为研究对象,展开攻毒试验后.随机分为常规哺育的对照组(10例),与在对照组的基础上,选择加喂卵黄抗体液的观察组(10例),比较分析两组猪仔的粪便指数和5d后猪死亡率.结果:观察组猪仔的死亡率20%明显低于对照组猪仔的死亡率100%,差异显著(P<0.05),且观察组猪仔的粪便指数均低于对照组,差异显著(P<0.05).结论:抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的治疗显著,可以有效改善猪仔腹泻情况,并降低猪仔的死亡率,效果显著,具有较高的猪流行性腹泻病毒的预防效果,值得推广实践.     

抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体治疗效果研究

猪流行性腹泻病毒简称为PEDV,属于冠状病毒科,发病症状与传染性肠胃炎病毒很相似。本文以试验的形式分析两组不同仔猪抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体治疗效果,在试验结果的基础上,总结出抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体治疗措施。