果蝇免疫基因的激活

果蝇免疫基因的激活周永富饶军华阳建春（广东省昆虫研究所广州５１０２６０）１．引言受经典脊椎动物免疫学研究模式的影响，长期以来，昆虫免疫机制的研究主要集中在昆虫免疫球蛋白及昆虫免疫记忆方面。１９７４年Ｂｏｍａｎ等从鳞翅目昆虫天蚕（Ｈｙ－ｌａｏｐｈｏｒａ...     

日本的果蝇根除计划

前言在日本，桔小实蝇Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａｄｏｒｓａｌｉｓ（英文简称ＯＦＦ）以往发生于奄美Ａｍａｍｉ岛（ＡＩ）、冲绳Ｏｋｉｎａｗａ岛和Ｂｏｎｉｎ岛（ＢＩ），瓜实蝇Ｂ．ｃｕｃｕｒｂｉｔａｅ（英文简称ＭＦ）发生于ＡＩ和冲绳岛。这些果蝇曾严重地影响了当地的水...     

枯草芽孢杆菌B-908几丁质酶基因的转化及表达

 水稻纹枯病是我国水稻上一大病害,目前主要靠施用井冈霉素来进行防治,但有迹象表明,病原菌似有抗药性变异出现。因此亟需一种无污染的替代药剂,以便交互使用,防止抗药性的发展。     

山东省樱桃主产区果蝇的调查与鉴定

为了解山东省樱桃主产区果蝇的发生情况,本研究选择了山东省主要樱桃产区的7个地点进行调查,并通过形态学特征和分子鉴定法对果蝇的种类进行鉴定。结果发现,山东省樱桃主产区有4种果蝇,通过形态特征与分子鉴定法最终确定4种果蝇,分别为斑翅果蝇Drosophila suzukii、黑腹果蝇D.melanogaster、海德果蝇D.hydei和伊米果蝇D.immigrans。这4种果蝇对樱桃的为害程度与种植地区、果实腐烂程度和樱桃的品种均有关系;莱芜和泰安地区果蝇分别有4种和3种;烟台和威海地区则只有斑翅果蝇和黑腹果蝇2种。烟台地区果蝇为害率最高,且数量最多,其中烟台丁家夼村樱桃为害率高达45.16%,在第2次采集中烟台薛家村每100粒樱桃中斑翅果蝇和黑腹果蝇的数量最多。美早和先锋2个品种樱桃对果蝇的吸引力较强;采摘后期腐烂的果实可吸引大量的果蝇产卵。因此,应对烟台地区进行重点预防、早期防治,并减少美早和先锋品种樱桃在山东省的种植。     

果蝇诱捕器诱捕杨桃桔小实蝇的效果观察

应用果蝇诱捕器能有效诱捕杨桃果园的桔小实蝇,且具专一性,对其它害虫及天敌无效,具安全、有效、简便、经济、实用、生态环保的优点。可在生产中应用。     

花鼠乳酸脱氢酶C基因cDNA的克隆、分析及原核表达

为研究花鼠乳酸脱氢酶C(lactate dehydrogenase C,LDH-C)对花鼠免疫不育控制的影响,以花鼠睾丸c DNA为模板,通过RT-PCR技术得到花鼠LDH-C基因c DNA编码区,并进行序列分析,构建花鼠LDH-C的原核表达载体,导入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法对表达产物进行鉴定。结果显示:扩增出的c DNA片段为999 bp,编码332个氨基酸,含有完整的开放阅读框;负电荷残基与正电荷残基均为36个;预测蛋白质分子量为37k D,理论等电点为7.04,无信号肽和跨膜区,推测其是一种非分泌、疏水性蛋白。α螺旋、无规则卷曲以及延伸链是s LDH-C蛋白二级结构的主要成分。重组菌在IPTG诱导下获得了约37 k D带有His-Tag的目的蛋白。     

2个适于水稻条斑病菌致病相关基因转录表达分析的启动子探针载体的构建

 水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola, Xoc)为稻黄单胞菌种下的致病变种,引起细菌性条斑病(bacterial leaf streak, BLS),对水稻安全生产构成严重威胁。为准确在水稻条斑病菌中进行致病相关基因的转录表达和调控分析,本研究构建了包含终止子、gusA报道基因和多克隆位点等启动子探针元件的载体pUTG01和pUTG14。选取Xoc的hrpF启动子,构建在pUTG01载体上,将其导入hrpX突变体RΔhrpX中,GUS活性测定结果显示,hrpF基因的表达显著减低,验证了hrpF受HrpX正调控,证实该载体可有效进行基因的转录表达分析;通过双质粒兼容共存策略,在hrpX突变体中同时实现了hrpX基因的功能互补和通过GUS活性定量测定hrpF基因的转录表达分析。该载体系统的建立,为后续分析稻黄单胞菌致病相关基因的表达调控提供了有效的工作系统。     

两种果蝇对不同成熟期草莓果实及其挥发物的趋性行为分析

黑腹果蝇Drosophila melanogaster和斑翅果蝇D. suzukii能够为害包括草莓Fragaria×ananassa在内的多种浆果类经济水果,造成巨大经济损失。本研究通过分析这两种果蝇对不同成熟期草莓及其挥发物组分的趋性行为,旨在为果蝇引诱剂的研发筛选有应用价值的挥发物组分。双选择陷阱试验结果表明,相较于琼脂凝胶,各个成熟期的草莓对两种果蝇雌成虫均有显著的吸引效果。两种果蝇对不同成熟期草莓的选择偏好依次为腐坏草莓,红熟草莓和白熟草莓;红熟期和白熟期的草莓对果蝇的吸引效果无显著差异。通过HS-SPME和GC-MS收集分析了不同成熟期草莓的挥发物,发现红熟期和腐坏期草莓挥发物组分差异显著。在5种测试的化合物中,仅乙酸乙酯对两种果蝇雌虫有显著吸引效果,效应浓度为0.005%～0.05%(v/v)。     

温度和相对湿度对斑翅果蝇和黑腹果蝇飞行能力的影响

为研究不同温度和相对湿度对斑翅果蝇Drosophila suzukii与黑腹果蝇D. melanogaster飞行能力的影响,了解2种果蝇的飞行规律,利用26路昆虫飞行磨系统测试2种果蝇在不同条件下的总飞行距离、总飞行时间和平均飞行速度。结果表明,斑翅果蝇雌虫飞行的最适宜温度为18℃,总飞行距离达358.04 m,总飞行时间为3 082.68 s;雄虫更适宜在较高温度下飞行,当温度为30℃时,其总飞行距离和总飞行时间分别为171.37 m和3 075.89 s,且飞行速度较快。黑腹果蝇雌虫的飞行能力在30℃时最强,总飞行距离为702.77 m,雄虫的最适飞行温度是18℃和24℃。当相对湿度为75%时,斑翅果蝇雌虫的飞行能力最强,总飞行距离为262.10 m,总飞行时间也较长,为1 224.12 s,雄虫则在相对湿度44%时表现出较强的飞行能力;当相对湿度为58%时黑腹果蝇雌、雄虫的总飞行距离均达到最大,分别为554.30 m和514.47 m,此条件下雌、雄虫的总飞行时间也最长,分别为2 606.57 s和6 079.07 s。表明温度和相对湿度对2种果蝇飞行能力的影响存在差异,低温高湿条件有利于斑翅果蝇雌虫飞行,高温低湿条件下斑翅果蝇雄虫的飞行能力最强,高温中湿环境下黑腹果蝇的飞行能力较强,且黑腹果蝇的飞行能力总体上强于斑翅果蝇。     

干旱胁迫对赤芍生理特性影响及相关基因的克隆表达

为探究不同干旱程度对赤芍生长发育的影响及其抗旱机制,采用盆栽控水法,设置对照组、轻度干旱和重度干旱3个处理,测定赤芍叶片相对含水量、可溶性糖、可溶性蛋白、脱落酸、叶绿素、类胡萝卜素、类黄酮、丙二醛、游离脯氨酸含量、光合参数及超氧化物酶活性等生理指标,评价赤芍抗旱性;采用RT-PCR结合RACE技术克隆抗旱相关基因（DREB、Psb27、PsaK、MDHAR、SOD和GR）,探究不同干旱程度对赤芍相关基因表达水平的影响。结果表明,重度干旱胁迫下,赤芍可溶性糖、可溶性蛋白、类胡萝卜素、类黄酮、脯氨酸、丙二醛、抗坏血酸及谷胱甘肽的含量均呈上升趋势,如在重度干旱和轻度干旱24 d后,赤芍叶片可溶性糖含量分别为对照的2.50倍和1.66倍,重度干旱胁迫第16天时,可溶性蛋白含量为对照组的2.43倍,类胡萝卜素与类黄酮的含量分别约为对照组的1.8倍和1.4倍,约为轻度干旱的1.4倍和1.2倍;而叶片相对含水量、蒸腾速率、气孔导度、净光合速率与叶绿素含量均降低,如重度干旱胁迫下赤芍叶片含水量不足20%,而轻度干旱和对照组叶片含水量均高于55%,叶绿素含量在第16天降到最低值,约为对照组的26%,为轻度干旱的33%;干旱胁迫下,光合作用相关基因Psb27、PsaK的表达量上调,且重度干旱上调水平更高;多个抗氧化基因的表达量（SOD、GR）、ABA含量以及胞间CO₂浓度呈先升后降趋势,如SOD在重度干旱第16天表达水平达到峰值,分别为轻度干旱与对照组的1.58倍和1.86倍,而后剧烈下降,到第24天时表达水平降到对照组的1.43倍,其中MDHAR的表达量呈下降趋势,重度干旱第24天时表达水平降到对照组的5.53倍。     

甲醛对果蝇发育和繁殖的影响

甲醛已被广泛用于人们的日常生活中,成为室内环境的主要污染源。为探讨甲醛对动物不同发育阶段的毒性,本文以模式生物果蝇Drosophila melanogaster为对象,研究了饲料中添加不同浓度甲醛对果蝇生长发育的影响。结果显示,当对照组发育至3龄幼虫(孵化后3d)时,与未添加甲醛的对照组相比,饲料中添加0.25%或0.50%的甲醛极显著降低了幼虫的体重(P<0.01),添加了0.50%甲醛的饲料组中发育出来的雌、雄成蝇体重也显著低于对照组,其中雌虫体重的差异达到极显著水平。此外,饲料中添加甲醛,还显著延长了幼虫发育的时间,即从胚胎到化蛹的发育时间、胚胎到羽化的发育时间都极显著长于对照组(P<0.01),而其蛹期变态发育时间在对照组和各实验组之间没有显著差异。饲料中添加甲醛,还极显著降低了果蝇的产卵量(P<0.01)。综上结果表明,饲料中含有甲醛可显著降低果蝇的发育速度,影响果蝇的生长和繁殖力,但对果蝇蛹期变态发育过程没有显著影响。     

六种农药对两种果蝇成虫室内毒力和主要解毒酶活性的影响

为明确田间常用农药对伊米果蝇Drosophila immigrans和海德氏果蝇D. hydei的毒力和解毒机制,采用药膜法在室内测定6种田间常用农药原药对2种果蝇实验种群成虫的LC_(10)、LC_(20)和LC_(50),并研究其中3种农药的亚致死剂量(LC_(10)、LC_(20))对果蝇谷胱甘肽S-转移酶(GST)、羧酸酯酶(CarE)、乙酰胆碱酯酶(AchE)3种主要解毒酶活性的影响。结果表明,乙基多杀菌素对伊米果蝇的毒力最大,LC_(10)、LC_(20)和LC_(50)分别为0.29、0.51和1.51 mg/L;甲维盐对海德氏果蝇的毒力最大,LC_(10)、LC_(20)和LC_(50)分别为0.14、0.36和2.09 mg/L;吡虫啉对2种果蝇的毒力均最低。不同亚致死浓度的乙基多杀菌素处理伊米果蝇24 h后,CarE和AchE活性均显著高于对照,而GST活性在低浓度时显著高于对照;高浓度甲维盐仅对海德氏果蝇AchE活性有显著抑制作用;吡虫啉可抑制伊米果蝇AchE和海德氏果蝇CarE活性。表明伊米果蝇和海德氏果蝇可通过改变3种解毒酶的活性来防御杀虫剂对其造成的影响。     

两种昆虫生长调节剂对黑腹果蝇和斑翅果蝇的生物活性

为探讨昆虫生长调节剂氟铃脲和虱螨脲对黑腹果蝇Drosophila melanogaster和斑翅果蝇D.suzukii的毒性机制,采用室内生测法测定氟铃脲、虱螨脲对2种果蝇2龄幼虫的毒力,以及其在亚致死浓度LC_(10)、LC_(20)下对2种果蝇体内几丁质酶活性的影响。结果显示,经不同浓度的氟铃脲和虱螨脲处理后,随着时间的延长和浓度的增加,2种果蝇的死亡率均明显增加,氟铃脲处理可使2种果蝇的死亡率最高达到83.33%,明显高于虱螨脲处理后黑腹果蝇(65.00%)和斑翅果蝇(66.66%)的死亡率。亚致死浓度LC_(10)和LC_(20)的虱螨脲处理果蝇2龄幼虫24 h后,黑腹果蝇2龄幼虫体内的几丁质酶活性呈下降趋势,而斑翅果蝇2龄幼虫体内的几丁质酶活性则呈上升趋势。另外,亚致死浓度的氟铃脲可明显抑制黑腹果蝇体内几丁质酶的活性。表明昆虫生长调节剂氟铃脲和虱螨脲对果蝇有较强的毒力,氟铃脲的毒力高于虱螨脲,且果蝇体内几丁质酶的活性与氟铃脲和虱螨脲密切相关。     

不同栽培模式下蓝莓园果蝇数量的动态规律

蓝莓作为新兴的经济作物,因其极高的营养价值和经济价值,种植面积逐年增加。但近几年,果蝇成为蓝莓上的主要害虫,严重影响了我国蓝莓产业的发展。为了明确青岛地区为害蓝莓的果蝇种类及发生动态规律,2016年5-12月,在青岛沃林蓝莓采摘园,选择暖棚、冷棚和大田3种蓝莓栽培环境,在相同高度悬挂糖醋液诱集瓶,监测果蝇发生的种类及数量动态规律。共进行了33次调查,诱集果蝇11 709头。结果表明,青岛地区为害蓝莓的果蝇主要有黑腹果蝇Drosophila melanogaster Meigen、铃木氏果蝇Drosophila suzukii Matsumura、海德氏果蝇Drosophila hydei Sturtevant和伊米果蝇Drosophila immigrans Sturtevant 4种。在3种不同的种植环境中,为害蓝莓的优势种为黑腹果蝇,共计6 878头,占总数量的59%,平均23.7头/5瓶,其次是铃木氏果蝇,共计4 372头,占总数量的37%,平均14.7头/5瓶,海德氏果蝇和伊米果蝇发生数量较少,共369头和90头,分别占总数量的3%和1%,平均1.2头/5瓶和0.4头/5瓶。黑腹果蝇在6-10月发生数量一直处于较高水平,而铃木氏果蝇在6-7月和10-11月出现2个明显的发生高峰,8-9月是发生的低谷期。冷棚诱集到果蝇数量为5 736头,占总数量的49%,大田为3 746头,占总数量的32%,暖棚为2 227头,占总数量的19%,暖棚能更好地减少果蝇的发生。本文讨论了不同栽培措施对蓝莓园果蝇种类和数量动态的影响,以期为蓝莓果蝇的监测和综合防治提供依据。     

2个不同缺失型美洲商陆抗病毒蛋白基因在大肠杆菌中的表达

 美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral proteins,PAPs)是在美洲商陆不同组织或不同生长阶段合成的一类具酶功能的单链核糖体失活蛋白,它有抑制多种病毒侵染的能力。PA P是从美洲商陆春季叶片中分离出来的一种单链碱性蛋白,成熟蛋白分子量约为29 kD^[1]。     

马铃薯Y病毒CP基因的原核表达及免疫金标试纸条的研制

选取马铃薯Y病毒（potato virus Y,PVY）代表株（NC＿001616.1）外壳蛋白基因37～281区间,采用化学合成方法合成目标序列,将其连接到原核表达载体pET-32a（+）,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出45 kDa融合蛋白,回收后免疫日本大耳白兔制备抗血清。Western Blot分析多克隆抗体特异性良好,后制备25 nm胶体金,标记PVY CP37-281多克隆抗体,制备胶体金免疫层析试纸条。结果表明,试纸条能在15 min内检出PVY,PVY病株汁液检测稀释限度可达106倍（W/V）,使用常见复合侵染烟草检测,未出现交叉反应。由此可知,该试纸条操作简便,反应灵敏特异,适用于田间一线及种薯生产中马铃薯Y病毒的检测。     

植物防卫基因研究进展

植物在与病原微生物共同进化的过程中，发展了一系列拮抗病原物侵染的复杂的防御反应体系。在植物与病原互作中，有大量的基因诱导表达，它们编码的蛋白质参与植物对病原物的防卫生反应，这类基因称之为防卫相关基因（defense related genes)，或简称为防卫基因（defense genes)。根据防卫基因表达产物及其功能，可大致分为次生物质合成基因、水解酶和病程相关基因、细胞壁修饰有关基因和清除活性氧的细胞内防卫酶系统基因四大类。从1902年人们发现病原物侵染而引起植物过敏反应起，人们对防卫反应进行了广泛深入的研究，到目前为止，防卫基因仍然是植保和遗传学家们研究的前沿和重点。     

小麦抗叶锈病近等基因系TcLr19的差异表达分析

由小麦叶锈菌(Puccinia triticina)引起的小麦叶锈病是影响小麦生产的重要病害之一,利用抗病品种是控制小麦叶锈病的主要措施。研究不同抗叶锈病基因与小麦叶锈菌互作后基因表达的特异性,对于探明小麦抗叶锈病机制具有重要作用,同时为抗病基因的克隆及优秀抗病小麦品种的     

稻螟赤眼蜂实时荧光定量PCR内参基因的筛选

为了筛选适合稻螟赤眼蜂试验使用的内参基因,本试验根据转录组测序结果挑选了十个稻螟赤眼蜂候选内参基因（包括PABPC1L、ACTR2、ARPC2、EF1a、EEF1D、SFRS7、HSP70、CSNK1a1、GAPDH和TMEM209）,分别检测了其在包括温度、取食、农药刺激等不同条件下,以及在稻螟赤眼蜂不同的发育历期的表达情况。利用RefFinder分析软件对Delta CT、BestKeeper、NormFinder、GeNorm四种软件分析基因表达稳定性的结果进行综合排序。结果表明,不同温度、取食、农药刺激和不同发育历期处理,表达相对稳定的内参基因分别为EF1a、EEF1D;SFRS7、ARPC2;PABPC1L、TMEM209;PABPC1L、ARPC2。本研究结果为在不同条件下选择稻螟赤眼蜂内参基因提供了参考,也有利于在稻螟赤眼蜂的基因表达研究中取得更为可靠、准确的数据。     

大豆谷胱甘肽还原酶基因的扩增及连作胁迫应答

利用数据库Phytozome获得大豆胱甘肽还原酶（Glutathione reductase,GR）基因4个成员的编码序列（Coding sequence, CDS）序列,以大豆叶片和根中RNA为模板,经RT-PCR扩增获得[STBX]Glyma10g03740和Glyma02g16010[STBZ]基因,二者大小均为1 638 bp,基因结构相似;获得[STBX]Glyma16g27210和Glyma02g08180[STBZ]基因,二者结构相似,基因大小均为1 506 bp。系统进化分析显示,Glyma10g03740/Glyma02g16010和Glyma16g27210/Glyma02g08180蛋白聚类于不同分支,但分别都与豇豆、尖叶菜豆和芸豆亲缘关系最近。4个成员的结构域相同,均含有FAD/NAD-binding_dom结构域和Pyr_nucl-dis_OxRdtase_dimer结构域。三级结构显示Glyma16g27210和Glyma02g08180构象相似,Glyma10g03740和Glyma02g16010构象相似,4个蛋白均以二聚体结构存在,互作蛋白完全相同,包括2个硫氧还蛋白还原酶和8个硫氧还蛋白。RT-qPCR方法分析GRs基因对连作逆境的响应,结果显示,在连作胁迫下,敏感品种HF55的GRs基因表达在根中启动较早（出苗后15 d内）,而叶片中启动较晚,出苗后45 d时表达仍呈上升趋势;对于抗性品种KX8,根和叶片中GRs基因各成员均在出苗后15~45 d表达量达到最高,30 d时根中GRs基因总表达量增加达19.03倍,叶片中GRs基因总表达量增加2.50倍。