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猪细小病毒(PPV)是引起母猪繁殖障碍和仔猪死亡的主要病原,疫苗免疫预防是控制该病的主要手段。由于对生物安全的担心,目前国内使用的疫苗仍以灭活苗为主。病毒样颗粒(VLPs)疫苗以其安全性高、免疫原性好成为各类病毒疫苗研究的热门方向。猪细小病毒病毒样颗粒(PPV-VLPs)是不含PPV DNA的空衣壳结构,由PPV VP2结构蛋白体外自行组装形成,形态上与天然病毒粒子相似,具有很强的免疫原性和生物学活性。论文就VLPs疫苗的免疫机制及PPV-VLPs的组装及其在国内外的研究进行综述,为PPV-VLPs研究提供参考。 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(4)
对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)病毒样颗粒(VLPs)的免疫原性进行了探讨,并将其与鸡传染性法氏囊病活疫苗进行比较。分别用VLPs及VLPs+Poly IC对14日龄非免鸡进行免疫,并用IBDV B87株弱毒商品疫苗作为阳性对照,同时设置空杆粒蛋白组作阴性对照及PBS对照。免疫前进行颈静脉采血,首免后每隔1周进行3次采血,通过间接ELISA抗体水平检测、中和试验和淋巴细胞增殖试验来进行分析比较。抗体水平检测结果显示,首免后第7天,在鸡的体内可检测到IBDV特异性抗体的组别为:VLPs组、VLPs+Poly IC组和B87株组,且在加强免疫后,抗体水平明显增高(P0.05)。首免后第14天,在3组鸡的体内均检测到高水平的抗IBDV中和抗体,且呈快速增长趋势。淋巴细胞增殖试验结果显示,VLPs组、VLPs+Poly IC组和B87株组鸡体内淋巴细胞增殖动态明显高于接种PBS和空杆粒蛋白组的鸡(P0.01),并且在加强免疫后明显提高(P0.05)。动物攻毒保护试验结果显示,攻毒后第2天PBS组和空杆粒蛋白组的鸡均表现出IBD的典型临床症状和病理变化且在攻毒后第6天全部死亡,VLPs组鸡的存活率为88.7%;VLPs+Poly IC组鸡存活率为80%;B87疫苗组鸡存活率为88.7%。器官指数分析结果显示,3组与空白组相比差异不显著(P0.05)。本试验制备的鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗能够诱导机体产生较高水平的体液和细胞免疫应答,具有良好的应用前景。 相似文献
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猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病的主要病原体,给养殖业造成重大经济损失。一直以来,对于PCV2的防控主要通过疫苗接种。目前使用的疫苗可大致分为全病毒灭活疫苗、嵌合病毒疫苗、重组亚单位疫苗三大类。病毒样颗粒(VLPs)作为一种伪病毒,以其高免疫原性、高安全性成为新型疫苗的研究热点。本文综述了VLPs在国内外的最新研究动态、研究和开发的意义,提出了VLPs作为一种基因转载工具,其研究为疫苗研发开拓了新的方向。 相似文献
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为研究牛细小病毒(BPV)VP2衣壳蛋白自组装病毒样颗粒(VLPs)以及VLPs的免疫原性.本研究以BPV-1型C7-5中国分离株的基因组序列为模板扩增VP2蛋白的编码基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用E.coliB J5183内同源重组将VP2基因插入腺病毒骨架质粒pAdEasy-1中,获得携带BPVVP2基因的重组腺病毒质粒(pAd-BPV-VP2).该重组质粒经Pac Ⅰ线性化后转染Ad293细胞,获得重组腺病毒rAd-BPV-VP2,第8代时滴度为107.25 TCID50/mL.间接免疫荧光、westemblot以及电镜观察结果显示,BPV VP2蛋白可以在腺病毒系统中稳定表达,并有效组装VLPs.将rAd-BPV-VP2肌肉注射免疫BALB/c小鼠,结果显示,针对BPV的血清IgG和中和(VN)抗体分别于加强免疫后2周和8周达最高水平,高峰抗体可持续至15周,VN抗体的最高滴度可达1:4 000.此外,与对照小鼠血清相比,免疫小鼠血清中的IL-2、IL-4及IFN-γ含量显著升高(p<0.05).结果表明,rAd-BPV-VP2免疫小鼠后可以诱导机体产生针对BPV的特异性体液和细胞免疫.本研究为BPV的免疫预防及载体的开发奠定了基础. 相似文献
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病毒样颗粒疫苗的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是含有某种病毒的一个或多个结构蛋白的空心颗粒,没有病毒核酸,不能自主复制,在形态上与真正病毒粒子相同或相似,俗称伪病毒、假病毒.VLPs有3个突出的优势:第一,以化学交联或基冈工程的方法对其表面进一步修饰和改造;第二,VLPs可包裹分子质量及电荷适中的核酸或非核酸分子;第三,多数病毒的VLPs在真核表达系统及少数病毒的VLPs在原核表达系统巾都能够有效地实现自我组装. 相似文献
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<正> 引言乳房炎是影响奶牛业生产和经济效益的主要疾病,其病原因子是多样性的,以细菌较为重要。常见的致病菌约有十余种,其中金黄色葡萄球菌是乳房炎的主要病原因子之一,肠杆菌中以大肠杆菌较为常见。本试验用临床型乳房炎分离的金黄色葡萄球菌、大肠杆(?)菌株进行实验性乳房感染,并以药敏试验所筛选出的药物进行治疗,现报告如下。 相似文献
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为制备含有病毒性出血性败血症病毒(VHSV)N基因的RNA病毒样颗粒标准样品,通过RT-RCR扩增VHSV的N基因,将其克隆至含有组氨酸标签的pNH-MS_2his载体中,构建重组原核表达载体pNHMS_2his-N;将重组质粒pNH-MS_2his-N转化至表达菌株BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG诱导表达、纯化;对病毒样颗粒进行鉴定及稳定性试验,使用数字PCR对病毒样颗粒进行定值。结果显示,该病毒样颗粒含VHSV N基因序列,并且稳定性良好,定值结果为8×10~6 copies/m L。结果表明,构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用。 相似文献
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旨在利用原核表达系统在大肠杆菌中制备出猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP),用改良的镍亲和层析法纯化并在小鼠体内评价其免疫原性。通过PCR方法从发病猪中扩增出PCV2的ORF2序列,对其全长进行密码子优化并交由公司合成重组质粒pET-32a-yCap;以BL21(DE3)为表达菌株,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE与Western blot对Cap蛋白的表达方式及抗原特异性进行鉴定;利用改良的镍亲和层析法纯化带有His-Tag标签的重组蛋白;利用透射电镜观察所纯化的载体融合蛋白能否形成VLP;用自制的VLP疫苗与PCV2灭活疫苗(ZJ/C株)分别免疫小鼠,利用商业化PCV2 IgG抗体ELISA检测试剂盒评价其免疫原性。结果显示,成功得到PCV2 ORF2序列和重组质粒pET-32a-yCap,重组质粒在大肠杆菌中主要以可溶性蛋白形式表达,蛋白大小为47 kDa;经镍亲和层析法纯化可得到单一的目的蛋白;重组Cap蛋白能与PCV2多克隆抗体及HRP标记的6*His, His-Tag小鼠单克隆抗体发生特异性结合;经过磷钨酸负染色的蛋白悬液在透射电镜下可观察到大量规则的、直... 相似文献
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《中国兽医学报》2014,(11):1725-1731
为了制备鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒,本试验通过RT-PCR技术扩增出鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株JL株的VP2全长基因,并将其插入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建含有IBDV VP2基因的重组供体质粒pFast-VP2,转化DH10Bac E.coli感受态细胞中,经蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-VP2,将重组杆粒rBacmid-VP2转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-VP2。rBac-VP2感染sf9细胞,提取DNA,经PCR电泳分析,得到1条与预期大小相符的特异性条带;间接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-blotting分析,在大约53 000处出现1条特异性的蛋白条带;电镜观察感染重组杆状病毒的细胞上清和沉淀,均可见重组VP2蛋白自行组装形成的病毒样颗粒。试验结果表明IBDV VP2基因在昆虫细胞中得到了表达,并自组装成了IBDV病毒样颗粒。本试验为研制鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗奠定了基础。 相似文献
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病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是某种病毒的1种或几种结构蛋白在体外组装而成,由于VLPs不包含病毒基因组,在宿主细胞中不能自我复制,因此VLPs在亚单位疫苗应用中具有较高的生物安全性。自猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)在世界范围内流行以来,已经给全球养猪业带来巨大经济损失,因此PCV2的致病机理和疫苗研究具有重要现实意义。PCV2Cap蛋白(capsid protein)是病毒唯一的衣壳蛋白,也是主要的免疫原性蛋白,60个Cap蛋白亚基在体外能自行组装成PCV2VLPs,该VLPs因与天然病毒粒子形态相似并保留了病毒完整的构象表位,已经在PCV2组装和侵染机理研究、亚单位疫苗的研发及其相关性系统疾病(PCV2-systemic disease,PCV2-SD)的预防研究中得到广泛应用。本文主要对PCV2Cap蛋白的Loops结构及其VLPs的制备研究进展进行阐述,为PCV2侵染机理与亚单位疫苗的研发等提供参考。 相似文献
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试验旨在制备水貂肠炎病毒(Mink enteritis parvovirus,MEV)可溶性VP2蛋白及其病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。优化并合成MEV VP2基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),将重组质粒pET-30a-VP2与分子伴侣pTf16共同转化到宿主菌ER2566中,以不同培养温度、L-阿拉伯糖浓度和IPTG浓度进行诱导表达,收集样品进行SDS-PAGE和Western blotting分析。通过硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法对表达产物进行纯化,由SDS-PAGE进行鉴定,透析去除蔗糖,通过动态光散射技术(DLS)和透射电子显微镜(TEM)观察不同组装条件下VLPs的粒径和形态。用制备的MEV VLPs疫苗免疫水貂评价其免疫原性。结果显示,以2 g/L L-阿拉伯糖、0.2 mmol/L IPTG、25 ℃培养16 h为诱导条件时,VP2蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,分子质量约为65 ku。经Western blotting鉴定VP2蛋白具有良好的抗原特异性。将此表达产物利用硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法纯化后,纯度可达90%以上。在pH 8.0,150 mmol/L NaCl的透析液中,VP2经自组装可形成与天然MEV形状和粒径相似且具有血凝特性(1:214)的VLPs。VLPs疫苗免疫水貂21 d后,测得水貂血清中的血凝抑制(HI)抗体水平均相对最高,可达1:211,说明该VLP疫苗有较好的免疫原性,能有效预防MEV的感染。本试验结果表明,将pET-30a-VP2与pTf16在原核表达系统中共表达,可获得具有高免疫原性的VLPs,为后期MEV VLPs疫苗的研发奠定基础。 相似文献
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病毒样颗粒 (Virus_LikeParticles,VLPs)或核心样颗粒 (Core_LikeParticles ,CLPs)是含有某种病毒的一个或多个结构蛋白的空心颗粒 ,没有病毒的核酸 ,不能自主复制 ,其在形态上与真正病毒粒子相同或相似。目前多数病毒的VLPs在真核表达系统以及少数病毒的VLPs在原核表达系统中都能够有效地实现自我组装 ,这为病毒的基础研究及疫苗的开发提供了便利条件。该技术自 2 0世纪 80年代一出现就受到了人们的普遍重视。目前VLPs已应用于多种病毒的基础研究、形态发生学、疫苗制备和免疫特性的研究。1 VLPs在基础研究中的应用目前 ,对多种… 相似文献