甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养再生植株

油菜是重要的油料作物,我国的油菜种植面积和油菜籽产量均居世界首位。提高油菜籽粒含油量是育种的主要目标之一。我们利用拥有自主知识产权的反义PEP(phosphoenolpyruvate carboxylse）技术获得了超高含油量油菜＾[1]。将超高含油量特性与油菜杂种优势结合是使超高油油菜尽快应用于生产,实现产业化生产的重要途径。而超高含油量不育系的选育是杂种优势利用的前提之一。通过不对称体细胞杂交能“一步法”快速选育不育系＾[2]。为此,建立重演性好、再生额率高的原生质体培养系统十分必要。甘蓝型油菜原生质体的培养已有一些成功的报道＾[3-6],但愈伤组织分化频率都不高。本文以甘蓝型油菜下胚轴为材料,通过琼脂糖包埋法,建立了原生质体高频分裂及植株再生体系,为通过不对称体细胞杂交快速选育超高含油量不育系提供一些科学依据。     

芝麻菜下胚轴原生质体的分离培养及再生植株

以芝麻菜 Eruca sativa Mill 无菌苗下胚轴为材料,研究了光照条件、苗龄、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇浓度及纯化条件对其原生质体分离制备的影响.以附加不同激素组合的改良KM8p培养基进行液体浅层培养.结果表明,无菌苗的下胚轴酶解10 h,用"过滤-离心-漂浮法"进行纯化后,可高效分离出有活力的原生质体;在改良的KMSp培养基的进行原生质体培养,当密度为7×104mL-1时,分裂频率最高,为24.8%.4周后形成大量的细胞团和肉眼可见的小愈伤组织,植板率为5.6%.然后转移到培养基上使其增殖,当愈伤组织长至3～5 mm时,将其转到分化培养基上诱导芽的分化,芽分化率为33.6%.当芽长2～3cm 时,将其切下插入生根培养基上诱导生根,可获得完整植株.     

结球甘蓝下胚轴培养及植株再生

对５个不同基因型结球甘蓝自交系进行下胚轴和子叶离体培养,结果,理甲和强甲２个自交系植株再生频率达８０％;用ＭＳ培养基,附加０．２×１０（－６）ＮＡＡ,１．０×１０（－６）２,４—Ｄ,１．０×１０（－６）６─ＢＡ培养甘蓝下胚轴,植株的再生频率最高。     

山杏下胚轴再生植株的研究

研究了影响山杏下胚轴再生的有关因素,首次获得了山杏下胚轴再生植株。结果表明,经15d的暗培养,山杏下胚轴切段在附加TDZ2mg/L+NAA0.5mg/L的改良MS培养基(1/2NH4NO3)上,愈伤组织诱导率(100%)和再生频率(37.5%)均最高,细胞分裂素用TDZ效果优于6-BA,再生获得的不定芽在改良MS+IBA0.2mg/L培养基上生根率为75.8%。     

油桃下胚轴再生植株影响因素的研究

为了建立一个稳定的桃再生体系,以晚熟油桃秦光2号为试验材料,对影响其种胚萌发及下胚轴再生的不同激素质量浓度与组合、培养基、预培养时间、低温处理等因素进行了研究。结果表明,种皮对种胚萌发有抑制作用,在种胚培养中应剥去种皮培养;低温处理可以明显提高胚培养的萌发率,胚培养种胚以5℃低温处理70 d萌发率最高,达到93.33%,且经过7 d常温光培养所得下胚轴健壮、幼嫩,更适宜做下胚轴再生的外植体,诱导率达到34.38%,在蔗糖质量浓度为30 g/L时萌发率最高,达到75.66%,用1600 mg/L GA浸泡24 h,诱导率达到62.3%;下胚轴能够再生植株,形态学上部再生率为34.67%,下部为18.67%,二者差异显著,下胚轴再生以QL+TDZ 2.0mg/L+NAA 0.5 mg/L效果最好,再生率达到38.67%,平均再生不定芽数为2.50个,晚熟油桃秦光2号下胚轴可以直接从未产生愈伤组织的切口部位产生不定芽。     

番茄子叶下胚轴植株再生技术的研究

番茄子叶下胚轴植株再生技术的研究孟祥栋张卫华马红刘文宝（山东农业大学园艺系）关键词：番茄;子叶;下胚轴;植株再生中图法分类号：Ｓ６４１．２ＳＴＵＤＹＯＮＴＥＣＨＮＩＱＵＥＯＦＰＬＡＮＴＲＥＧＥＮＥＲＡＴＩＯＮＦＲＯＭＴＯＭＡＴＯＣＯＴＹＬＥＤＯＮＡ...     

佛手瓜下胚轴离体培养及再生植株

对佛手瓜下胚轴再生植株、试管苗移栽及大田定植进行了试验，结果表明：在ＭＳ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＬＨ２００ｍｇ／Ｌ培养基上容易形成下胚轴愈伤组织；愈伤组织分化芽的培养基为ＭＳ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ，诱导分化率可达５７５％；顶芽和带腋芽茎段生根的培养基分别为ＭＳ＋ＩＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ和１／２ＭＳ＋ＩＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ，生根率分别为８１．８％和８３．３％；移栽培     

油柿下胚轴培养再生植株

试验于2004～2006在广东省汕头大学生物系遗传实验室进行。供试油柿幼果6月中旬采自汕头市澄海区栽培的成年油柿树。切取油柿幼果种子，用70%酒精表面消毒30 s，0.1%升汞浸泡15 min，无菌水冲洗6次。切开种子，取出幼胚，切除胚根、胚芽和子叶，将胚轴横切几处伤口后接种于预先配好的培养基上培养。分别以MS、1/2MS、MS（1/2N）为基础培养基，添加0.05 mg•L-1IAA和2.0 mg•L-1 ZT，将胚轴接种于培养基上培养，试验基础培养基种类对不定芽再生的影响。以MS（1/2N）为基础培养基，附加不同浓度的IAA（0.01、0.05、0.1 mg•L-1）和ZT（0.5、2.0、5.0 mg•L-1），确定不同浓度的激素组合对不定芽再生的影响。以1/2MS为基础培养基，添加0.1 mg•L-1 IAA和不同浓度的ZT（0.5、2.0、5.0 mg•L-1）和BA（2.0 、5.0、10.0 mg•L-1），试验不同种类和浓度的细胞分裂素对胚轴不定芽再生的影响。培养8周后统计再生结果。所有培养基均添加0.8%琼脂、3%蔗糖和500 mg•L-1PVP，pH调至5.8后于121℃高温灭菌15 min（下同）。培养物置于28℃、光周期为12 h、光照度为60 µmol•m-2•s-1的条件下培养。 用两种方法诱导生根：一种是把再生芽基部浸入250 mg•L-1 IBA溶液中不同时间（15、30、45 s）后接种于无激素的MS(1/2N)培养基；另一种是切取再生芽直接接种于单独或组合添加了IAA（0、0.25、0.5、1.0 mg•L-1）、IBA（0、0.25、0.5、1.0 mg•L-1）、NAA（0、0.5 mg•L-1）的MS（1/2N）培养基。先暗培养9 d再移至光照下培养。 结果表明，外植体接种后逐渐从乳白色转为暗黄色，2周左右即有褐色、致密的愈伤组织形成，3周后开始出现绿色芽点。大部分不定芽形成于胚轴基部的伤口末端和侧面，而顶部较少，单个外植体最多可再生17个不定芽。试验的3种基础培养基中，MS（1/2N）效果最好，其愈伤形成率、不定芽再生率和外植体平均不定芽数分别为100%、48.3%和4.3个；MS培养基效果最差，各指标分别为90.4%、22.4%和3.5个；1/2MS的效果居于前两者之间。 在不同浓度的IAA与ZT组合中，IAA 0.1 mg•L-1与ZT 2.0 mg•L-1组合的愈伤形成率、不定芽再生率和外植体平均不定芽数分别达到100%、81.7%和5.3个，均显著高于其它组合。ZT浓度较高（大于2.0 mg•L-1）时再生率均超过40%，随着IAA浓度的增加，形成的愈伤组织也增加。ZT诱导不定芽的效果明显好于BA，BA浓度从2.0 mg•L-1升高到10.0 mg•L-1，不定芽再生率和平均不定芽数分别从20.5%和2.2个下降到0。 试验结果显示，用250 mg•L-1IBA浸泡基部30 s和45 s时生根最快，第7天即有不定根出现，但形成的不定根较细，植株生长缓慢。添加了不同浓度、不同种类生长素的培养基中，以IAA和IBA各0.5 mg•L-1的组合，再生苗生根较快，生根率和平均根数分别达到100%和3.2条，且愈伤少、侧根多、植株生长快且健壮，移栽后易成活，为本试验中的最佳组合。再生植株经炼苗后移栽，30 d时成活率达96.2%。     

番茄下胚轴愈伤组织高频率诱导与植株再生

以２份番茄栽培品种为供试材料，比较了不同基因型和不同激素配比对愈伤组织诱导和植株再生频率的影响。结果表明，不同基因型之间的培养反应值存在较大的差异，以下胚轴为外植体可以获得具较高分化力的愈伤组织。     

柱花草下胚轴愈伤诱导和植株再生

以柱花草品种“热研2号”下胚轴为外植体,建立了高效的再生体系.下胚轴愈伤诱导最佳培养基为:MS +2,-D 2.0 mg/L,其愈伤诱导率为96％;最佳芽分化培养基为:MS+6 -BA 3.0 mg/L,其分化率为88％,最佳壮苗培养基为:MS+6-BA1.0mg/L+ NAA 0.7 mg/L +GA 0.2 mg/L;在最佳生根培养基MS+ NAA 0.2 mg/L上,生根率达到72％,移栽成活率为74％.     

番茄子叶、下胚轴植株再生体系的建立

本研究以番茄(Lycopersicon esculentumM ill.)栽培品种“中杂9号”、“毛粉802”和“合作908”为试材,通过对番茄子叶、下胚轴的离体培养,研究不同基因型以及不同激素配比对植株再生的影响。结果表明:以下胚轴为外植体时3种材料均可诱导再生植株,其中中杂9号和毛粉802最适宜诱导愈伤组织和芽分化的培养基为MS 6-BA2.0mg/L IAA0.5mg/L,合作908最适宜诱导愈伤组织和芽分化的培养基为MS 6-BA2.0mg/L IAA0.4 mg/L。以子叶为外植体时毛粉802和合作908均可诱导出再生植株,其中毛粉802诱导愈伤组织及芽分化的最适宜培养基为MS 6-BA1.0mg/L IAA0.2mg/L和MS 6-BA1.0mg/L IAA0.5mg/L,合作908诱导愈伤组织及芽分化的培养基为MS 6-BA0.5mg/L IBA0.5mg/L。两种外植体适宜的生根培养基均为MS IAA0.5 mg/L。     

番茄下胚轴转化获得转基因植株

通过根癌农杆菌介导转化番茄（Lycopersicon esculentum Mill.)下胚轴，将外源双价基因导入番茄，获得了一批卡那霉素抗性苗，经PCR则证明外源基因已经整合到番茄基因组中。研究表明番茄下胚轴是良好的遗传转化受体，具有操作简便，节省番茄材料和再生速度快的特点。烟草细胞看护培养能够提高外植体的转化效率和减少农杆菌对外植体的污染。     

马蹄金下胚轴离体培养与植株再生

探讨了马蹄金（Dichondra repens Forst.）下胚轴离体培养的方法。在黑暗条件下种子萌发培养无菌苗，可迅速获得大量下胚轴，然后将下胚轴接种到MS 0.2mg/L2，4-D 0.5mg/L6-BA中可迅速获得大量愈伤组织，再用B5 2mg/L6-BA 0.2mg/Lα-NAA作分化培养基出苗数效果较好。     

菘蓝子叶和下胚轴组织培养再生植株的研究

以菘蓝子叶和下胚轴为外植体进行组织培养，筛选出植株再生的适宜的培养基为ＭＳ＋ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ。对器官发生进行系统的细胞组织学观察发现：菘蓝下胚轴培养，细胞启动和不定芽的形成随下胚轴部位的不同而有所不同；不定芽发生的数量与其维管轴的发育有关，整个下胚轴分化不定芽的数量呈梯度变化。     

结球甘蓝下胚轴高效植株再生系统的研究

研究不同取材时期以及不同浓度BA NAA的组合和不同浓度AgNO3对结球甘蓝(Brassica olerace var capitata L．)下胚轴的不定芽分化率的影响,建立了结球甘蓝下胚轴高效植株再生系统,离体培养再生频率达到76％。最佳取材时期为6、7日苗龄,BA、NAA、AgNO3的最佳浓度配比为BA5．0mg／L NAA1．0mg/L AgNO37．5mg／L。     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养再生植株

从早熟甘蓝型油菜品种６０１的子叶中游离出原生质体，采用液体浅层培养，获得持续分裂的细胞。培养基中的２，４－Ｄ浓度对刺激细胞分裂至关重要。形成的小愈伤组织必须继代培养（ＭＳ培养基补加２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ，ｋｔ２ＭＧ／Ｌ）后，再转至ＭＳ分化培养基（补加ＮＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ，ＫＴ３ｍｇ／Ｌ）上，才能分化出芽。分化的芽在ＭＳ生根培养基（补加ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ）上，可以形成完整植株。