具有质膜ATP酶活力的大豆细胞壁碎片的制备

通过反复洗涤与低速离心（１０００×ｇ,１０ｍｉｎ）,从大豆下胚轴得到的细胞壁碎片具有ＡＴＰ酶活力．酶活依赖于Ｍｇ２＋的存在,受Ｋ＋刺激和钒酸钠的强烈抑制．经加ＫＩ的悬浮液洗涤,碎片ＡＴＰ酶受叠氮化钠抑制很少,几乎不受硝酸盐抑制．表明所得的ＡＴＰ酶基本上为质膜ＡＴＰ酶．本方法简化了质膜的制备过程,在质膜及质膜ＡＴＰ酶的生理研究中有较高的应用价值．     

质膜ATP酶介导机械伤害诱导豌豆叶片的防御反应

【目的】研究质膜ATP酶(H+-ATPase)在机械胁迫诱导植物防御反应形成中的作用。【方法】通过酶活性生化测定、Western blot检测和电镜细胞化学观测方法,研究机械伤害对豌豆幼苗质膜H+-ATPase活性的影响;同时结合药理学实验,进一步探讨了质膜H+-ATPase与活性氧积累在伤害防御反应中的关系。【结果】机械胁迫能诱导质膜H+-ATPase活性提高,但并未改变该酶蛋白含量;抑制质膜H+-ATPase活性,伤诱导的H2O2累积和苯丙氨酸解氨酶活性提高随之被抑制,活性氧清除剂处理对伤诱导质膜H+-ATPase活性提高没有影响。【结论】质膜H+-ATPase参与机械胁迫诱导防御反应相关的信号传递,该酶可能作用于活性氧信号上游,并通过蛋白磷酸化调节来诱导下游防御反应形成。     

渗透胁迫下小麦幼苗根质膜ATP酶活性与膜透性的关系

经-1．0MP。聚乙二醇PEG渗透胁迫处理72h的小麦根系质膜透性可逆升高，抗旱品种（陕合6号）增幅小于干旱敏感品种（郑引1号），反复胁迫易导致质膜透性的不可逆伤害；PMH^＋-ATPase活性降低下降比质膜透性严重受伤害早，且不易恢复，可能是渗透胁迫伤害的原初作用点；PMCa^2＋-ATPase活性强弱取决于小麦抗旱性强弱；渗透胁迫下的质膜透性变化与PM ATPase活性变化不呈现直接相关。     

镉胁迫对长春花质膜过氧化、ATP酶及5′-核苷酸酶活性的影响

长春花(Catharanthus roseus)是我国广泛栽培兼具园林绿化和抗癌药源等重要价值的多年生草本花卉植物.为了解镉胁迫下长春花植物体内活性氧清除及其质膜ATP相关酶调控的机理,采用盆栽试验研究了不同镉浓度(0、5、10、25、50、100 mg·kg-1)处理下长春花质膜过氧化、ATP酶及镉富集特性的影响.结果表明:中、低浓度Cd(≤10 mg·kg-1)胁迫下,长春花的丙二醛(MDA)和H2Oz含量、超氧阴离子自由基(O2-·)产生速率及抗氧化酶活性与对照没有显著差异.高浓度Cd(≥25 mg·kg-1)胁迫下,地上部MDA、H2O2含量和O2-·产生速率较对照显著升高,且地下部高于地上部;高浓度Cd处理使地上部过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及地下部POD、SOD活性显著上升,但地下部CAT活性和GSH含量无明显变化.随着Cd处理浓度升高,地上部H+-ATPase活性逐渐降低,地下部H+-ATPase、地上部和地下部Ca2+-ATPase与5'-AMPase活性均先升后降,在高浓度处理下显著降低.同时,长春花对Cd有较强的富集能力,根系的富集能力高于地上部.     

大豆质膜内在水孔蛋白的生物学功能预测

[目的]利用生物信息学方法对大豆质膜内在水孔蛋白（GrnPIP）的亚细胞定位、跨膜区、信号肽和磷酸化住点进行预测,为基因的功能研究提供参考。[方法]从干旱胁迫后磊抗旱大豆品种21的叶片中克隆出GmPIP基因．利用PSLpced、Protcomp Version8．0、WoLF PSORT、CELLO v2．5等亚细胞预测工具进行亚细胞定位预测;利用TMHMM Serverv．2．0进行蛋白跨膜区分析;利用NetPhos 2．0 Server进行磷酸化位点分析;利用SignaIP3．0 Server程序进行信号肽分析。[结果]综合4种工具的预测结果表明,GmPIP蛋白包含6个跨膜区,亚细胞定位预测表明该蛋白位于细胞质膜上,发现该蛋白的第254个氧基酸是一个潜在的糖基化位点和13个磷酸化位点,该蛋白没有明显的信号肽结构。[结论]利用不同方法进行的生物信息学分析结果可相互验证,生物信息学可以对未知蛋白进行初步的功能预测．有助于确定后续试验的方向．     

双酶水解法制备大豆多肽的研究

[目的]研究酶解法制备微苦大豆多肽的新方法,为其在食品和药品领域的广泛应用提供参考。[方法]选择Alcalase蛋白酶和Flavourzyme酶对大豆分离蛋白进行分步水解。采用单因素分析法和正交试验设计,研究pH值、温度、酶浓度和底物浓度等因素对Alca-lase蛋白酶水解效果的影响,确定其最佳的水解条件。并且,对Flavourzyme酶的脱苦作用进行了研究。[结果]Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解条件是pH值8.0,温度60℃,酶浓度1000U/g、底物浓度3%,水解时间2h,此时的大豆分离蛋白水解度可达46.13%。Flavourzyme酶可明显降低大豆多肽的苦味。[结论]采用Alcalase蛋白酶和Flavourzyme酶分步酶解法制备的大豆多肽无明显苦味,可被广泛应用于食品生产中。     

酶解制备水溶性大豆多糖的研究

[目的]采用植物复合水解酶水解不溶性豆渣粉制备水溶性大豆多糖（SSPS）,研究最佳制备工艺。[方法]用3,5-二硝基水杨酸比色法测定总糖和还原糖,通过单因素试验研究料液比、pH、温度、酶添加量和水解时间对ssPs得率的影响,在单因素试验的基础上设计正交试验选出优化的因素组合。[结果]各因素对SSPS得率的影响大小依次为水解温度〉水解时间〉酶添加量〉pH,在料液比l：20（g：m1）、酶添加量1．2％、pH4．5、温度50℃、提取时间25h的最佳条件下,SSPS得率为8．89％。[结论]酶解制备SSPS工艺设备简单,条件温和,但是耗时较长。     

酶标记大豆甙元的制备和鉴定

本文报道丹贝中生物活性物质大豆甙元同辣根过氧化物酶偶氧及其酶活性、免疫活性和光谱分析鉴定，大豆甙元－－辣根地氧化物酶标记物中两者摩尔比１１：１，标记物工作浓度５０ｍｇ／ｍｌ，３．５ｎｇ／ｍｌ大豆甙元能与氧化酶标记物发生５０％左右竞争。     

盐碱胁迫下紫丁香根系中质膜ATP酶活性和电阻抗图谱估测研究

本文以2年生紫丁香苗木为试材,研究了不同浓度的NaCl和Na2CO3胁迫对苗木根系质膜ATP酶(PM-ATP ase)和EIS的影响,探寻EIS参数与PM-ATPase之间的相关性,并建立了估算模型,及对模型进行了验证。其中胞外电阻率(re)与PM-ATPase活性呈极显著负相关,相关系数是-0.959,是估测盐碱胁迫处理后紫丁香根系PM-ATPase活性最佳参数,其最佳估测模型为y=-0.0124x3+1.1659x2-36.267x+385.35。研究结果为EIS技术快速评价盐碱胁迫下紫丁香根系的PM-ATPase活性及耐盐碱性具有一定的借鉴意义。     

不同质膜稳定剂对烟草原生质体细胞壁再生的影响

质膜稳定剂能增加完整原生质体数量,防止质膜破坏,促进原生质体细胞壁再生和细胞分裂形成细胞团。本研究拟在原生质体酶解液中分别加入CaCl2.2H2O、KH2PO4、MES 3种质膜稳定剂,或3种质膜稳定剂组合分离、提纯、培养原生质体,探讨3种质膜稳定剂对烟草原生质体细胞壁再生的影响。结果表明:3种质膜稳定剂对于解离出的原生质体的质量及原生质体细胞壁再生和原生质体细胞分裂都有一定影响,最佳浓度分别为CaCl2.2H2O 10 mM、KH2PO40.7 mM、MES 5 mM;3种质膜稳定剂组合以CaCl2.2H2O 5 mM、KH2PO40.35 mM与MES 2.5 mM的组合最佳,原生质体壁再生率达88.5%,细胞分裂率达77.5%,表明能最快促进烟草原生质体细胞壁再生及细胞分裂生长。     

光周期对大豆叶片过氧化物酶活力和同工酶谱的影响

通过研究光周期对大豆品种丹豆５号不同发育时期叶片过氧化物酶活力和同工酶谱的影响，比较了大豆初花前后光周期反应的异同．结果表明，不论在出苗至第１三出复叶展开前，第１三出复叶展开至初花期（ＲＩ）还是初花（ＲＩ）以后，短日照均加速大豆开花和（或）结实进程，并使叶片过氧化物酶活力上升．过氧化物同工酶谱因不同光周期处理而变化．作者提出，光周期对大豆初花前后发育进程的调控有相似的生长基础．供试品种从出苗至成熟阶段均对光周期敏感，而无真正的童期（ｊｕｖｅｎｉｌｅｐｈａｓｅ）．     

以豆饼为原料酶解制备大豆多肽分散条件的研究

以功能性大豆多肽饮料的研制为目标,探讨了以豆饼为原料酶解制备大豆多肽过程中的酶解条件。在80℃下分散10min,选用Protease M“Amano”G酶,在50℃下水解8h,经过对pH值和豆饼的分散浓度进行优选,确定了在pH值为8、分散浓度为15％的条件下,水解程度达到65．21％又不产生苦味,制备的饮料具有良好的口感和风味。     

铝胁迫下钙对小麦根系细胞质膜ATP酶活性和膜脂组成的效应

 比较了在铝胁迫条件下钙对耐铝性不同的2个小麦品种Altas66、Scout66根细胞质膜ATP酶活性、膜脂和脂肪酸组成的影响。结果表明,铝胁迫下增加营养液中的钙浓度,可提高质膜H~+-ATP酶活性和磷脂含量,降低Ca~(2+)-ATP酶活性和糖脂含量;Altas66的亚麻酸含量下降,其它组分略有上升,不饱和指数和双键指数下降;Scout66的亚麻酸含量明显上升,棕榈酸则下降明显,其它组分也略有降低,不饱和指数和双键指数明显上升。     

两种圆柏属植物叶绿体膜脂肪酸组成和ATP酶活力的季节变化特征与比较

以2种常绿的祁连圆柏(Sabina przewalskii Kom.)和圆柏(Sabina chinensis(Lin)Ant.)为材料,测定叶绿体膜脂脂肪酸组分及膜功能蛋白活力的季节变化,比较分析2种植物的种间差异.结果表明:祁连圆柏和圆柏叶绿体膜脂中不饱和脂肪酸亚油酸(18∶2)、亚麻酸(18∶3)与月平均气温呈显著负相关,而饱和脂肪酸棕榈酸(16∶0)和硬脂酸(18∶0)与月平均气温呈显著正相关;K~+Na~+-ATPase和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATPase的活性也与月平均气温呈显著负相关.抗寒性强的祁连圆柏叶绿体膜脂中亚麻酸含量显著低于抗寒性弱的圆柏,而其饱和脂肪酸花生四烯酸含量显著高于圆柏.可见,季节性变化中不饱和脂肪酸的比例提高有利于圆柏属植物抗寒性增强,但不饱和脂肪酸含量高低并不是物种间抗寒性强弱的决定因素.     

大豆籽粒尿囊素酶的变性和化学修饰

大豆籽粒尿囊素酶对十二烷基磺酸钠、尿素、盐酸胍变性处理较不敏感。十二烷基磺酸钠、尿素变性处理的尿囊素酶可通过解释而恢复活力，但一经盐酸胍变性后却难以通过解释而恢复活力。酶蛋白质氨基酸残基化学修饰结果表明，巯基、赖氨酸残基、酪氨酸残基不是构成酶分子活力中心的必需基因，色氨酸残基是酶活性中心的必需基团。甘油醛、异烟肼不影响酶反应，而乙酰氧肟氧肟酸抑制酶活力３９．６％。